Диссертация (1141308), страница 21
Текст из файла (страница 21)
Нагревание проводили 30 мин, 45мин, 60 мин, 75 мин, 90 мин, 105 мин. По истечении времени извлечения охлаждалидо комнатной температуры, фильтровали и определяли содержание экстрактивныхвеществ и суммы флавоноидовЭкстракцию повторяли трижды, заливая сырье новой порцией экстрагента вколичестве, равном слитому излечению. Полученные данные приведены в табл.4.1.4.150Таблица 4.1.4Содержание экстрактивных веществ и флавоноидов в извлеченияхизучаемого сбора в зависимости от времени экстрагирования и количестваэкстракцийВремяэкстракции, мин3045607590105Содержание экстрактивныхвеществ, %I17,9818,5420,2620,0420,1620,17II3,493,633,963,933,943,92III0,830,860,930,940,930,93Содержание суммыфлавоноидов в пересчете налютеолин-7-гликозид, %IIIIII0,290,040,10×10 -10,320,050,11×10 -10,350,090,21×10 -10,340,080,19×10 -10,350,080,20×10 -10,340,090,19×10 -1На основании полученных результатов исследования можно заключить, чтооптимальными условиями экстракции являются: время – 60 мин, кратность – 3.
Приэтом вовремя I стадии экстракции выделяется 75-80% от общего количестваизвлекаемых веществ, при II выход 15-20%, при III – до 5%.В результате проведенных исследований установлены оптимальныепараметры экстрагирования изучаемого сбора: экстрагент – горячая вода (70°С),соотношение сырья и экстрагента – 1:10, измельченность сбора – 2 мм, кратностьи время экстракции – трехкратно, 60 мин.4.2 Лабораторная схема получения экстракта сухого из сбораОбщая лабораторная схема получения экстракта сухого из изучаемого сборавключаетосновныестадиитехнологическогопроцесса:измельчениерастительного сырья до определенной величины, получение водного экстракта,упаривание водного экстракта и сушки.Изложение технологического процессаТП.1.Измельчениерастительногосырья.Сбор,состоящийизлекарственного растительного сырья: корней лопуха, травы полыни обыкновенной,151листьев брусники, травы хвоща полевого, плодов укропа огородного измельчалина универсальной лабораторной мельнице до частиц, проходящих через сито сразмеромотверстий2мм.
Затем отвешивалинеобходимое количествоизмельченного сырья и переходили к следующей стадии технологическогопроцесса.ТП.2.1. Экстракция сбора. Экстракцию вели водой очищенной всоотношении 1:10 при перемешивании на магнитной мешалке при температуре70°С. Экстрагирование проводили трехкратно, при двух последующих экстракцияхэкстрагент добавляли в количестве, равном предыдущему отпуску. Времяэкстракции при первом, втором и третьем контакте фаз – 60 минут.ТП.2.2. Фильтрация экстракта. После трехкратной экстракции водныеизвлеченияобъединялиифильтроваливсборникчерезслойватыгигроскопической, находящийся между двумя листами бумаги фильтровальной,помещенной на перфорированную пластинку воронки Бюхнера.ТП.2.3.
Концентрирование экстракта. Объединенный экстракт порциямипереносили в круглодонную колбу, которую соединяли с роторным испарителем.Упаривание вели при температуре реакционной массы (60±5) ºС и давлении 0,09МПа (0,9 кгс/см2) приблизительно до 1/16 первоначального объема.ТП.2.4. Сушка экстракта. Экстракт сушили в вакуумном сушильном шкафупри температуре (60±5)ºС и остаточном давлении 0,1 кгс/см2. Удаление влагипроисходило под вакуумом при нагревании водного экстракта в мягких условиях.ТП.2.5. Измельчение сухого экстракта.
Полученный твердый остатоквысушенного экстракта измельчали при помощи ступки и пестика, после чегоизмельченный экстракт сухой просеивали через капроновое сито. Полученныйготовый экстракт сухой расфасовывали в банки из темного стекла снавинчиваемыми пластмассовыми крышками. Хранение экстракта сухого взащищенном от света месте при температуре от 15 до 25°С [27].Лабораторная схема получения экстракта сухого из сбора представлена нарис. 4.2.1.152Рис. 4.2.1 Лабораторная схема получения экстракта сухого из сбора.Экспериментально установленные оптимальные параметры экстракциисбора (гл.
4, п. 4.1), обеспечивающие максимальное извлечение БАВ, положеныв основу лабораторной схемы получения экстракта сухого (рис. 4.2.1).1534.3 Изучение состава БАВ экстракта сухого4.3.1 Определение основных БАВ качественными реакциями в экстрактесухомВ экстракте сухом проводили идентификацию тех же основных групп БАВ,что в растительном сборе.
Для исследования использовали водное извлечениеэкстракта сухого, приготовленное по выше приведенной методике (глава 2, п. 2.3).Было подтверждено наличие в экстракте сухом: флавоноидов – цианидиновая реакция (появление красного окрашивания)(глава 2, п. 2.3); полисахаридов – осаждение спиртом из водного извлечения (появлениебелых хлопьевидных сгустков) (глава 2, п. 2.3); дубильныхвеществ–появлениечерно-синегоокрашиваниясжелезоаммониевыми квасцами (глава 2, п.
2.3); свободных сахаров – выпадение кирпично-красного осадка с реактивомФеллинга (глава 2, п. 2.3); арбутина – появление синего окрашивания со спиртовым растворомдихлорхинонахлоримида (глава 2, п. 2.3);Таким образом, было установлено, что в экстракте сухом содержатся те жеБАВ, что и в исходном сборе.4.3.2 Идентификация веществ в экстракте сухом методомУФ-спектрофотометрииПодтверждение наличия фенольных соединений в сухом экстракте методомспектрофотометрии проводили с использованием водно-спиртового раствораэкстракта, приготовленного по выше указанной методике (глава 2, п.
2.3.4)Нами были получены спектры с характерными максимумами поглощения(рис. 4.3.2.1).154(1)(2)Рис. 4.3.2.1 УФ-спектры поглощения водно-спиртового извлечений: 1 – экстрактасухого изучаемого сбора и 2 – изучаемого сбораСогласно полученным результатам исследований спектр поглощения водноспиртового извлечения экстракта сухого практически идентичен спектрупоглощения водно-спиртового извлечения из сбора. Что свидетельствует облизости составов экстракта сухого и исходного сбора.4.3.3 Хроматографический анализ экстракта сухого4.3.3.1 Идентификация веществ методом ТСХФенольные соединенияДляхроматографическогоопределенияфенольныхсоединенийиспользовали 70% спиртовое извлечение экстракта сухого. Получение водноспиртового извлечения и хроматографическое исследование проводили по вышеприведенным методикам (глава 2, п.
2.3.1).Припросматриваниихроматограммыизвлеченияэкстрактасухогонаблюдали 7 зон, окрашенных в сине-фиолетовые цвета с Rf ~ 0,12 (хлорогеноваякислота); Rf ~ 0,38 (галловая кислота), Rf ~ 0,44 (гиперозид); Rf ~ 0,47 (рутин); Rf ~0,85 (феруловая кислота), идентичных зонам на хроматограмме исходного сбора.Свободные сахараДля хроматографического обнаружения свободных сахаров в качествеисследуемого раствора использовали 50% спиртовое извлечение экстракта сухого.155Получение водно-спиртового извлечения и хроматографическое исследованиепроводили по выше приведенным методикам (глава 2, п. 2.3.1).На хроматограмме исследуемого образца экстракта сухого обнаружено 3красно-фиолетовые зоны с Rf ~ 0,39 (сахароза); Rf ~ 0,50 (глюкоза); Rf ~ 0,55(фруктоза), идентичные зонам на хроматограмме исходного сбора.АрбутинДля хроматографического анализа арбутина в качестве исследуемогораствора использовали извлечения из экстракта сухого метиловым спиртом.Получение спиртового извлечения и хроматографическое исследованиепроводили по выше приведенным методикам (глава 2, п.
2.3.1).После детектирования хроматограммы исследуемого образца экстрактасухого наблюдали появление 2-х зон голубого цвета с Rf ~ 0,2 (арбутин), Rf ~ 0,85(гидрохинон) и зоны коричневого цвета с Rf ~ 0,67 (галловая кислота), идентичныхзонам на хроматограмме исходного сбора.ФлавоноидыДля хроматографического разделения флавоноидов в качестве исследуемогораствора использовали 70% спиртовое извлечение экстракта сухого. Получениеводно-спиртового извлечения и хроматографическое исследование проводили повыше приведенным методикам (глава 2, п.
2.3.1).После проявления хроматограммы и просматривании в УФ-свете, наблюдали5 зон адсорбции, окрашенных в желтый цвет с Rf ~ 0,14 (кверцетин); Rf ~ 0,42(лютеолин); Rf ~ 0,62 (лютеолин-7-гликозид); Rf ~ 0,70 (гиперозид); Rf ~ 0,78(рутин); Rf ~ 0,88 (нарингенин), идентичных зонам на хроматограмме исходногосбора.Проведенные исследования водно-спиртовых и водных извлечений изэкстракта сухого вышеуказанными методами хроматографии в тонком слоесорбента показали, что качественный состав исследуемого образца экстрактаидентичен исходной растительной смеси. В ходе работы в экстракте сухом былиидентифицированы: флавоноиды (рутин, гиперозид, лютеолин, лютеолин-7гликозид, кверцетин, нарингенин) и фенолкарбоновые кислоты (галловая кислота),156гидроксикоричные кислоты(хлорогеновая, феруловая), свободные сахара(сахароза, глюкоза, фруктоза), фенологликозид (арбутин).Из полученных результатов видно, в полученном экстракте имеется переходи обнаруживаются те же группы БАВ, которые обнаружены в исходномрастительном сборе.4.3.3.2 Идентификация веществ методом ВЭЖХФенольные соединенияПолученные результаты исследования качественного состава флавоноидов,фенологликозидов,фенолкарбоновыхподтвержденыдополненыикислотметодомвэкстрактесухомвысокоэффективнойбылижидкостнойхроматографии.Для исследования использовали водно-спиртовое извлечение экстрактасухого, полученное экстракцией 70% этанолом.
Получение водно-спиртовогоизвлечения и хроматографическое исследование проводили по выше приведеннымметодикам (глава 2, п. 2.3.3).Результаты проведенного ВЭЖХ анализа исследуемого водно-спиртовогоизвлечения экстракта представлены на рис. 4.3.3.2.1 и 4.3.3.2.2 и в табл. 4.3.3.2.3.mV80000ch20 2468нннкверцетиннно-метоксикумакоричная к-таэллаговая к-танннн2000гиперозидрутинарбутин к-та каскорбиноваягалловаянкатехинЭГКГаллатэпикатехинхлорогеноваяцикориеваяк-ткнкофейная к-таннеохлорогенованндикумаринферуловая к-таизоферуловая кнн4000лютеолин7глик600010 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60минРис.
4.3.3.2.1 ВЭЖХ-хроматограмма фенольных соединений водно-спиртовогоизвлечения экстракта сухого изучаемого сбора157mV80000ch20 123456789коричная к-таннэллаговая к-таннгиперозидрутинлютеолин7гликнизоферуловая кн2000феруловая к-таарбутинаскорбиноваягалловая к-та ккатехиннЭГКГаллатэпикатехин4000хлорогеноваяцикориеваяк-ткнкофейная к-таннеохлорогенованндикумарин600010 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30минРис. 4.3.3.2.2 ВЭЖХ-хроматограмма фенольных соединений водно-спиртовогоизвлечения экстракта сухого изучаемого сбораТаблица 4.3.3.2.3Компонентный состав фенольных соединений экстракта сухого изучаемого сбораметодом ВЭЖХ№11.2.3.4.5.6.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17.Время,мин23,6223,94,0494,5474,785,0295,1845,8436,0826,396,9387,4677,8698,5188,9779,56710,52Высота,mV31109,84941,821018,30604,85546,49890,25717,53390,19365,08568,40312,48154,15150,19213,54101,7488,1091,19Площадь,mV*сек427954,465062,9718906,5913392,774562,7013575,0012696,168133,083935,1512576,779348,233224,403659,637024,172588,944116,913064,85Название5АрбутинАскорбиновая к-таГалловая к-таКатехинНеидентифиц.ЭГКГаллатЭпикатехинХлорогеновая к-таЦикориевая к-таНеидентифиц.Кофейная к-таНеидентифиц.Неохлорогеновая к-таНеидентифиц.НеидентифицДикумаринФеруловая к-та158Продолжение таблицы 4.3.3.2.3118.19.20.21.22.23.24.25.27.28.29.30.31.32.33.34.35.36.37.211,7612,4113,3216,319,0219,9322,7324,7526,4527,5728,832,3335,5538,6639,9646,8650,1653,0756,673129,9092,07306,00478,17210,66187,79753,78182,0377,6665,6777,5370,3364,3789,9386,90151,0636,6338,9211,4646929,832863,9414280,5445802,5317684,1212274,2922911,9418954,185270,812922,4010311,0511973,528328,1415351,5414185,0031527,524654,397246,192362,395Изоферуловая к-таНеидентифиц.Неидентифиц.Лютеолин-7-гликозидГиперозидРутинНеидентифиц.Неидентифиц.Эллаговая к-таНеидентифиц.НеидентифицКоричная к-тао-метоксикумаринНеидентифицНеидентифицКверцетинНеидентифицНеидентифицНеидентифицВ сухом экстракте изучаемого сбора метод ВЭЖХ доказал присутствие в немидентифицированных ранее веществ, а также дополнил состав фенольныхсоединений за счет обнаружения – аскорбиной кислоты, катехина, ЭГКГаллата,эпикатехина, цикориевой кислоты, кофейной кислоты, неохлорогеновой кислоты,дикумарина, эллаговой кислоты, коричной кислоты, о-метоксикумарина.Свободные сахара и органические кислотыДля идентификации свободных сахаров и органических кислот методомВЭЖХ в качестве исследуемого раствора использовали водное извлечениеэкстракта сухого.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
