Автореферат (1141248), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Микробиологический анализ сырья проводили в соответствии стехникой и требованиями, описанными в ГФ XIII.6ДостоверностьполученныхнаучныхрезультатовположенийподтвержденаивыводовпроведениемДостоверностьбольшогообъемаэкспериментальных исследований и применением современных методовисследования, позволяющих получать воспроизводимые и достоверныерезультаты. Полученные результаты исследований статистически обработаны всоответствии с требованиями ГФ XIII.АпробациярезультатовисследованияОсновныеположениядиссертации доложены и обсуждены на конференции «Молодых ученых» вНИИ фармации, (Москва, ноябрь 2012 г); на научно – практическихконференциях «Современные аспекты использования растительного сырья исырья природного происхождения в медицине» (Москва, 2013, 2014, 2015); наВсероссийском научном симпозиуме «Медицинская антропология в России и заеё пределами» (Москва, 03.07.2013); на 25 и 27 Московской международнойгомеопатическойконференции«Развитиегомеопатическогометодавсовременной медицине» (Москва, 2015).
Апробация диссертации состоялась наконференции НИИ фармации ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. СеченоваМинздрава России (Москва, 2015).ЛичныйвкладавтораПринепосредственномучастииавтораопределены цели и задачи работы; проведён сбор, обобщение и анализлитературных данных.
Диссертант принимал непосредственное участие вразработке методик идентификации и количественного содержания основныхБАВ в сырье и настойке звездчатки средней. Диссертантом изготовленынастойки гомеопатические матричные из свежей и высушенной травызвездчатки средней и определены показатели качества разработанной настойки.Автору принадлежит ведущая роль при проведении экспериментальныхисследований, статистической обработке и анализе полученных данных,написаниипубликацийинормативнойдокументации.Диссертацияиавтореферат написаны лично автором.ВнедрениерезультатовисследованияРазработанныеметодыприготовления и стандартизации гомеопатических настоек могут быть7внедрены на фармпредприятиях.
Материалы исследования могут бытьиспользованы в учебном процессе фармацевтических вузов.Соответствие диссертации паспорту научной специальности Научноеположение диссертации соответствует формуле специальности 14.04.02 –фармацевтическая химия, фармакогнозия, конкретно пунктам 3, 6 паспортафармацевтическая химия, фармакогнозия.Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтическойнауки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематикой ипланом НИИ фармации ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова:«Развитие научных и научно – методических основ, базовых и инновационныхподходов при разработке, внедрении и применении лекарственных средств» №012012616553.Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 153страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы,пятиэкспериментальныхглав,спискалитературы,приложений.Библиографический указатель содержит 155 наименований (38 из которых –иностранные).
Приведено 27 таблиц и 27 рисунков.Публикации По теме диссертации опубликовано 9 научных статей,полностью отражающих содержание диссертации; из них 3 статьи в журналах,включенных в перечень ведущих периодических изданий ВАК РФ.СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫОбъектами исследования служили образцы свежей и высушенной травызвездчатки средней (Stellaria media L), сем.
гвоздичные (Сaryophyllaceae),собранные в разные стадии вегетации растения, в Тамбовской, Московской,Пермской, Рязанской, Кировской областях.В работе использованы реактивы, растворители, стандарты, отвечающиетребованиям соответствующей норативной документации.Микроскопический анализ проводили в соответствии с ОФС «техникамикроскопического и микрохимического исследования ЛРС»(ГФII). Дляисследованияготовилимикропрепараты8изсвежегосырья.ГотовыемикропрепаратыизучалиподмикроскопомМФИ–3.Результатыдокументировали с помощью фотоаппарата «Зенит» с микронасадкой МФН –12.Получение гомеопатических настоек из высушенной и свежей травызвездчаткипроводилосьвсоответствииОФС42-0027-05«Настойкигомеопатические матричные». Определение числовых показателей матричныхнастоек (плотность, сухой остаток, микробиологическая чистота) проводили всоответствии с ГФ XI, ГФ XII часть 1.ДлястандартизациисырьяиНГМпроведенаразработкасоответствующих методик идентификации и количественного определенияактивных компонентов на основе анализа данных литературы и нормативнойдокументации.
Идентификацию БАВ проводили качественными реакциями иметодом ТСХ на пластинках «Sorbifil» (Россия) в различных системахрастворителя. Кроме того качественное определение БАВ проводили методомВЭЖХ.Очищенный испытуемый раствор и раствор модельной смеси стандартовхроматографировалиукомплектованномнажидкостномсистемойхроматографеградиентнойподачивысокогодавления,элюента,УФ-диодноматричным детектором, а также компьютерной системой сборки иобработки данных в следующих условиях:- колонка 250 на 4,6 мм; сорбент Сromosil 100-5C18 с размером частиц 5мкм; - температура термостата 38 0С; - длина волны детектирования 255 нм; подвижная фаза: ацетонитрил (А), 0,1 % раствор фосфорной кислоты (В); режим градиентный элюирования.Качественный состав флавоноидных соединений проводили методомультраэффективнойжидкостнойхроматографии/масспектрометриинахроматографе Waters Acquility с тандемным квадрупольным МС-детекторомTQD (Waters). Подвижная фаза А (ПФ А).
Смесь вода - ацетонитрил (95:5) смуравьиной кислотой. Подвижная фаза В (ПФ В). Ацетонитрил с муравьинойкислотой. Хроматографируют испытуемый раствор 2, приготовленный как9указано выше, в следующих условиях: объем пробы 1 мкл; - колонка 0,21 х 5,0см Acuility UPLC BEH C18 (1,7 мкм); температура колонки 35 0С; скоростьпотока 0,5 мл/мин; градиентный режим элюирования; МС детекция в режимепозитивных ионов; параметры детектора: напряжение на капилляре – 3 кВ;напряжение на конусе – 55 В; температура капилляра 450 0С; температураисточника 120 0С; скорость потока осушающего газа 800 л/ч; скорость потокагаза в конусе 50 л/ч и сканирование в диапазоне масс от 100 до 1000 ед.Дляколичественногоспектрофотометрическийопределенияметодфлавоноидовпосленамипроведенияпримененреакциикомплексообразования с хлоридом алюминия. В качестве стандартноговещества выбран лютеолин-7-гликозид, дифференциальный спектр поглощениякоторого с алюминия хлоридом в предлагаемых условиях совпадает сдифференциальным спектром поглощения флавоноидов звездчатки средней.Качественный состав и количественное содержание углеводов изучалиметодом ВЭЖХ.
Свободные сахара - способом прямофазной ВЭЖХ на колонкеLuna NH2 4,6 х 250 mm (5 mm) или аналогичной с подвижной фазой:ацетонитрил – вода (70:30) при скорости потока 1 мл/мин, при комнатнойтемпературе с рефрактометрической детекцией. Связанные сахара - способомкапиллярного электрофореза.Аминокислотный анализ водорастворимых фракций проводили нааминокислотном анализаторе фирмы «Хитачи» модель 835 на стальной колонке(0,4 х 15 см), заполненной катионообменной смолой марки 2619 (HitachiCustom lon-Exchange Resin).Количественноеопределениесапониновпроводилиспектрофотометрическим методом, в основе которого лежит способностьсапонинов давать окрашивание с кислотой серной концентрированной.
Приснятии спектров поглощения продуктов реакции стандарта эсцина и извлеченияиз травы звездчатки средней с кислотой серной концентрированной нарегистрирующем спектрофотометре Cary – 50 установлено, что максимумпоглощения находится при длине волны 325 нм.10Метод определения аскорбиновой кислоты и витамина В1 описан выше вподразделе «качественное определение БАВ методом ВЭЖХ»Исследование анатомо-диагностических признаков травы звездчаткисредней.Результаты исследования анатомо-диагностических признаков различныхорганов травы зездчатки средней (стебля, листа, чашелистиков) представленына рисунках 1-6.Рисунок 1 - Фрагмент эпидермисаРисунок 2 - Фрагмент эпидермисастебля с устьицами и простыминижней стороны листа.
Ув. х 250.волосками. Ув. х 125.Рисунок 4 - Фрагмент паренхимыРисунок. 3 - Фрагмент листа сголовчатыми волосками. Ув. х 70листа с друзами. Ув. х 250Рисунок 6 - Фрагмент эпидермисаРисунок 5 - Фрагмент эпидермисанижней стороны чашелистика сверхней стороны чашелистика. Ув. Хголовчатыми волосками. Ув.
х 70.25011Исследование качественного состава и количественного содержаниябиологически активных веществ травы звездчаткиКачественное определение БАВ ( флавоноидов, витаминов, аминокислот,углеводов) в траве звездчатки проводили с помощью ВЭЖХ.Идентификацию компонентов проводили по характеру совместимостиспектров поглощения каждого хроматографического пика и по времениудерживания раствора РСО.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
