Диссертация (1141241), страница 5
Текст из файла (страница 5)
Например,24было установлено, что димер из МДП обладает большими иммуностимулирующими свойствами, чем мономер [164].В лаборатории препаративной биохимии антигенов ГНЦ – Институт иммунологии ФМБА России из клеточной стенки грамотрицательных бактерийвыделено вещество, обладающее выраженным иммуностимулирующим эффектом. Вещество получило название полимурамил и при доклинических испытаниях показало полное отсутствие токсических и пирогенных свойств.На основании лабораторных исследований, проведённых в соответствии сМетодическими рекомендациями, утверждёнными МЗ РФ, установлено, чтопрепарат полимурамил, представляющий собой вещество глюкозомурамилпептидной природы, выделенное из клеточной стенки Salmonella typhi, обладаетсильным стимулирующим эффектом на клетки иммунной системы.
При изучении влияния полимурамила на функциональную активность NK-клеток установлено, что препарат оказывает выраженный стимулирующий эффект в дозах1 мкг/мл, 100 нг/мл и 10 нг/мл. Полимурамил индуцировал мощную продукциюиммуностимулирующих цитокинов ИЛ-12p70, ФНОα и ИЛ-6 макрофагами идендритными клетками человека в культурах. Наиболее важным, является способность полимурамила индуцировать продукцию ИЛ-12p70 – ключевого активатора Т-клеточного иммунитета, что существенно отличает его от других иммуностимуляторов [92, 96].Подводя итог можно сделать заключение, что операция является единственным эффективным базовым методом лечения хронических парапроктитов.Консервативные терапевтические мероприятия целесообразно применять в качестве предоперационной подготовки и в послеоперационном периоде.
Вместес тем, наличие у пациентов с хроническим парапроктитом вторичных иммунодефицитных состояний, недостаточности функции факторов врождённого иммунитета, нарушений работы системы адаптивного иммунитета, сопровождающиеся дисбалансом концентрации цитокинов крови требует включения в программу лечения иммунотропных препаратов и разработку эффективных схемкоррекции нарушений иммунитета.25РАЗДЕЛ IIСОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯГлава 33. Материалы и методы исследования3.1. Характеристика клинических наблюденийПод наблюдением на базе колопроктологического отделения ОГБУЗ«Белгородская областная клиническая больница Святителя Иоасафа» находились 82 больных с хроническим парапроктитом. Группа контроля состояла из15 клинически здоровых человек.Обследование и лечение больных с хроническим парапроктитом проводилось в соответствии с клиническими рекомендациями по диагностике и лечению взрослых больных хроническим парапроктитом (свищ заднего прохода,свищ прямой кишки) [54].В работе со здоровыми людьми и больными хроническим парапроктитомсоблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской ДекларациейВсемирной Медицинской Ассоциации (Declaration of Helsinki.
Ethical Principlesfor Medical Research Involving Human Subjects, 2008) и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утверждёнными Приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации от 19.06.2003 № 266 [91].Критериями включения в исследование были:хронический парапроктит, подлежащий хирургическому лечению;возраст от 18 до 65 лет;переносимость использованных в исследовании фармакологических препаратов;письменное информированное согласие пациентов на участие в исследовании.26Критерии исключения:параректальные свищи на фоне неспецифических воспалительных заболеваний кишечника (неспецифический язвенный колит, болезнь Крона);декомпенсированная сердечно-лёгочная недостаточность;системные и гематологические заболевания;онкопатология;беременность, кормление грудью;аллергическая реакция на препараты;отказ от проводимого исследования.Перечень общеклинических методов исследования включал общий анализ крови, общий анализ мочи, биохимический анализ крови, коагулограмму.
Впредоперационном периоде пациенты проходили специальный комплекс обследования, включающий: сбор жалоб и анамнеза, наружный осмотр, пальцевоеисследование прямой кишки, зондирование, пробу с красителем, ректороманоскопию.Ультразвуковое исследование интраректальным и промежностным методами проводилось SonoAce X8 (Samsung Medison, Корея), данный метод применялся при сложных видах параректальных свищей, наличии разветвлённыхсвищей, гнойных затёков, а также при невозможности чётко локализоватьвнутреннее отверстие при помощи других методов диагностики.Колоноскопия выполнялась у пациентов с подозрением на наличие сопутствующих изменений толстой кишки, воспалительных изменений характерных для болезни Крона и язвенного колита.
Исследования проводились на аппарате Fujinon EC 250 WL (Fujifilm, Япония).3.2. Бактериоскопическое и бактериологическое исследованиеВсем пациентам проводили бактериоскопическое и бактериологическоеисследование раневого экссудата с идентификацией микрофлоры и оценкой еёчувствительности к антибиотикам в бактериологической лаборатории ОГБУЗ27БОКБ Святителя Иоасафа. Исследование производилось на бактериологическом анализаторе WalkAway MicroScan (Siemens Healthcare Diagnostics Inc.,США).Бактериоскопическое исследование раневого экссудата проводили послеокрашивания мазков по методу Грама.Для верификации видов аэробных и анаэробных микроорганизмов былиспользован бактериологический метод исследования в соответствии с методикой действующего Приказа МЗ СССР от 22.04.1985 № 535 и методическимирекомендациями Б.А.
Ефимова с соавт. [39].Подсчёт колониеобразующих единиц производили по методу Коха [31].Аэробные микроорганизмы культивировали в суховоздушном термостате ТВ80-1 («Касимовский завод», Россия). Исследование анаэробных микроорганизмов проводили в бескислородных условиях в термостате-анаэростате MCO15AC («Sanyo», Япония). Посев аэробных микроорганизмов первоначальнопроизводили на 5% кровяной агар с последующим отсевом на селективные среды.Для выделения энтерококков использовали селективный Bile esculin azidagar, позволяющий дифференцировать их от других стрептококков на основании его способности расти в присутствии желчи.Для выделения стафилококков применяли желточно-солевой Staphylococcus agar. Дифференциальную диагностику между эпидермальным и золотистымстафилококком проводили на основании способности последнего к плазмокоагуляции.Для обнаружения кишечной палочки производили посев на среду Эндо.Культивирование энтеробактерий, клебсиеллы, протея, синегнойной палочкипроводили на среде MacConkey с последующей микроскопической идентификацией и верификацией на основании определения оксидазной, каталазной, лецитиназной активности.
Лактобактерии культивировали на среде MRS, на которой они росли в виде белых гладких или шероховатых колоний и не обладалиоксидазой и каталазой активностью. Бифидобактерии высевались на плотной28среде Блаурокка в течение 72 часов. Они имели типичный вид «куриной косточки» при бактериоскопическом исследовании колоний. Для обнаруженияграмположительных спорообразующих клостридий посевы проводили на средуColumbia agare base с добавлением 5% крови и 24-часовой анаэробной инкубацией. Бактероиды высевали на селетивной среде Bacteroides Bile esculin agar.Для выделения других облигатно- и факультативно-анаэробных бактерий использовали Schaedler agar и жидкую тиогликолевую среду Fluid Thioglycollatemedium.Грибы рода Candida высевались на среде Сабуро в течение 72 часов.Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам с обычнымипитательными потребностями использовали агар Мюллера-Хинтон без дополнительных добавок. Для бактерий со сложными питательными потребностямииспользовали агар Мюллера-Хинтон с добавлением 5% механически дефибринированной лошадиной крови.
Оценку чувствительности и интерпретацию результатов проводили с использованием критериев, предлагаемых Европейскимкомитетом по определению чувствительности к антимикробным препаратам(European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing – EUCAST).Определение чувствительности к антибиотикам проводилось дискодиффузионным методом. Действие антибиотиков оценивали по феномену задержки роста вокруг диска после инкубации в термостате при 37°С в течение18-24 часов. В зависимости от диаметра зоны задержки роста различали степень чувствительности испытуемого штамма: чувствительные (более 10 мм),малочувствительные (менее 10 мм) и устойчивые (отсутствие зоны).3.3.
Иммунологические методы исследованияИсследования проводились на базе клинической лаборатории ОГБУЗБОКБ Святителя Иоасафа. Забор крови для исследования производили в утренние часы (с 8 до 10 часов). Содержание цитокинов в сыворотке крови определяли методом ИФА с использованием коммерческих наборов ЗАО «Вектор-Бест»29в диапазоне концентраций: для интерферона-γ (ИФН-) 0-1000 пг/мл, факторанекроза опухолей α (ФНОα) 0-250 пг/мл, рецепторного антагониста интерлейкина-1 (РА ИЛ-1) 0-3000 пг/мл, интерлейкина-1ß (ИЛ-1β) 0-250 пг/мл, интерлейкина-2 (ИЛ-2) 0-500 пг/мл, интерлейкина-8 (ИЛ-8) 0-300 пг/мл, интерлейкина-10 (ИЛ-10) 0-500 пг/мл, Метод определения основан на трёхстадийном«сэндвич»- варианте твёрдофазного иммуноферментного анализа с использованием моно- и поликлональных антител.Также методом ИФА с использованием коммерческих наборов ЗАО«БиоХимМак» определялось содержание лактоферрина, лизоцима и антиоксидантной активности в сыворотке крови.Содержание иммуноглобулинов и церулоплазмина в сыворотке кровиопределяли методом ИФА с референсными значениями для иммуноглобулинаА (IgA) 0,7-4,0 г/л, иммуноглобулина М (IgM) 0,4-2,3 г/л, иммуноглобулина G(IgG) 7,0-16,0 г/л, церулоплазмина 20-60 мг/дл.С целью оценки состояния клеточного звена иммунитета проведено изучение фенотипов популяций лимфоцитов (CD3+CD19-, CD3+CD4+, CD3+CD8+,CD3+CD16+56+, CD3-CD16+56+, CD3+HLA-DR+) методом проточной цитофлуоримет-рии на аппарате BecKman Culter Epecs XL с моноклональными антителами.3.4.
Методы лечения больных с парапроктитамиУ всех больных с подтверждённым диагнозом хронического парапроктита до проведения хирургических и консервативных лечебных мероприятий забирали 10 мл венозной крови для исследования иммунного статуса и гнойноеотделяемое из свищевого хода для бактериологического исследования. Далеепациенты распределялись в одну из трёх групп.Пациенты первой группы (n=28) получали стандартное лечение, включавшее хирургическое вмешательство и стандартное лечение. Вид вмешательства определялся в зависимости от вида параректального свища, наличия гнойных затёков, рубцовых изменений в анальном канале.
В послеоперационном30периоде пациенты получали противовоспалительную терапию, анальгетики,производилось регулярное выполнение перевязок, заключающихся в очищенииран растворами антисептиков и нанесении на раневую поверхность мазей наводорастворимой основе.Пациенты второй группы (n=34) в дополнение к стандартному лечениюполучали азоксимера бромид в дозе 6 мг внутримышечно 1 раз в сутки черездень, общий курс 5 инъекций.Пациенты третьей группы (n=20) в дополнение к стандартному лечениюполучали полимурамил в дозе 200 мкг внутримышечно 1 раз в сутки ежедневнов течение 5 дней.Все препараты вводили согласно рекомендациям «Регистра лекарственных средств России» (2015 г.) и инструкциям по применению лекарственныхпрепаратов.На десятые сутки лечения проводился повторный забор 10 мл венознойкрови у каждого пациента с целью оценки изменений иммунного статуса.Набор пациентов в группы производили до получения статистически достоверных результатов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
