Диссертация (1140935), страница 2

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 2)

При гиперпаратиреозе различного генезаизменяется концентрации цитокинов в крови [153, 156, 237, 124, 89, 130].Полагают, что одним из ключевых факторов изменения активности,пролиферацииижизнеспособностииммунокомпетентныхклетокпригиперпаратиреозе является увеличение внутриклеточной концентрации кальция[104, 40, 167, 109, 272].В связи с этим, целесообразным для коррекцииизменений врожденного и адаптивного иммунитета при ХПН может оказатьсяприменение блокаторов кальциевых каналов.Цель исследованияИзучитьрольПТГивторичногогиперпаратиреозавкомплексепатогенетических факторов формирования иммунного статуса и коррекцию егоизмененийамлодипиномприхроническойпочечнойнедостаточностивклинических и в экспериментальных условиях.Задачи исследования1.Исследовать состояние врожденного иммунитета, адаптивного иммунитета,концентрацию в крови некоторых цитокинов, ПТГ, общего кальция и8неорганическогофосфораубольныххроническойпочечнойнедостаточностью в динамике диализной процедуры.2.Исследовать состояние врожденного иммунитета, адаптивного иммунитета,концентрацию в крови некоторых цитокинов, ПТГ, общего кальция инеорганического фосфора при экспериментальной хронической почечнойнедостаточности.3.Определить наличие и характер связи между показателями иммунногостатуса и показателями гибели лимфоцитов периферической крови,концентрацией веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНиСММ),продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в плазме и в лимфоцитах,активностьюферментовантиокислительнойзащитывсыворотке,содержанием ПТГ, общего кальция и неорганического фосфора в сывороткеприхроническойпочечнойнедостаточностивклиническихивэкспериментальных условиях.4.Изучить состояние врожденного иммунитета, адаптивного иммунитета инекоторыемеханизмыихформированияприэкспериментальномгиперпаратиреозе.5.В экспериментальных условиях in vitro оценить влияние ПТГ нафункциональнуюактивность нейтрофилов,секреторную способностьмононуклеаров, показатели гибели путем апоптоза и некроза лимфоцитовпериферической крови.6.Изучить при экспериментальном гиперпаратиреозе влияние амлодипина напоказателиконцентрациюврожденноговкровииммунитета,некоторыхадаптивногоцитокинов,иммунитета,показателигибелилимфоцитов периферической крови, концентрацию ВНиСММ, продуктовПОЛ в плазме и в лимфоцитах, активность ферментов антиокислительнойзащиты, содержание ПТГ, общего кальция и неорганического фосфора всыворотке.7.Изучить при экспериментальной хронической почечной недостаточностивлияние амлодипина на показатели врожденного иммунитета, адаптивного9иммунитета, концентрацию в крови некоторых цитокинов, показателигибели лимфоцитов периферической крови, концентрацию ВНиСММ,продуктов ПОЛ в плазме и в лимфоцитах, активность ферментовантиокислительнойзащиты,содержаниеПТГ,общегокальцияинеорганического фосфора в сыворотке.Методология и методы исследованияИсследование выполнено на кафедре патологической физиологии, накафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии и клинической лабораторнойдиагностики,(ЦНИЛ),набазеЦентральнойнаучно-исследовательскойНаучно-исследовательскогоинституталабраториииммунологии(НИИИммунологии) Государственного бюджетного образовательного учреждениявысшего профессионального образования «Южно-Уральский государственныймедицинскийуниверситет»МинздраваРоссии(ГБОУВПО«ЮУГМУ»Минздрава России), на базе отделения диализа Государственного бюджетногоучреждения здравоохранения «Челябинской областной клинической больницы»(ГБУЗ «ЧОКБ») с 2012 по 2014 гг.

Методом сплошной выборки с учетомкритериев включения и исключения отобрано 45 больных ХПН, которымпроводится лечение программным гемодиализом, и 24 клинически здоровыхчеловека. Организация исследования одобрена этическим комитетом ГБОУ ВПОЮУГМУ Минздрава России (протоколы № 11 от 25.11.2012 г. и № 1 от 22.01.2016г.).Эксперименты in vivo выполнены на 283 белых нелинейных крысах-самцахмассой 200-220 г., находящихся в стандартных условиях вивария на типовомрационе в соответствии с Европейской конвенцией о защите позвоночныхживотных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (ETSIN123, 18 марта 1986 г.), включая приложение А от 15.06.2006 г., c Директивой2010/63/EU Европейского парламента и совета европейского союза по охранеживотных, используемых в научных целях от 22.09.2010 г.

Моделирование ХПН у10крыс создавали путем двухэтапной оперативной резекции 5/6 почечной ткани пометоду Шуркалина Б.К. и соавт. в модификации Santos L.S. et al. и Hai-Chun Yanget al [34, 269, 337]. Опытной группе per os ежедневно вводили блокаторкальциевых каналов в составе препарата «Амлодипин-Тева» (международноенепатентованное название: амлодипин, «Тева», Израиль) Для экспериментов invitro использована цельная кровь 30 клинически здоровых людей – добровольцев.Для достижения цели и решения поставленных задач исследованияиспользованы биохимические, иммунологические, статистические методы иэкспериментальное моделирование.Степень достоверности, апробация результатов, личное участие автораДостоверность результатов работы, правомочность основных положений ивыводовоснованынадостаточномчисленаблюденийклиническогоэкспериментального фрагмента работы, полноте и широтебиблиографическойсправки,использованииилитературно-современныхметодовстатистической обработки материалов исследования с применением программ«Statistica 10.0 for Windows» [295], глубоком и аргументированном анализеполученных результатов.Основные положения диссертации представлены на II международнойнаучно-практической конференции студентов и молодых ученых «Пироговскиечтения» (Челябинск, 2012); V Международной (XII-ой итоговой) научнопрактической конференции молодых ученых, посвященной 70-летию ЮГМУ(Челябинск, 2014); VIII международной научно-практической конференциимолодых ученых-медиков (Воронеж, 2014); VI Международной (XIII-ойитоговой) научно-практической конференции молодых ученых, посвященной 70летию победы (Челябинск, 2015); XVII Международном конгрессе «Здоровье иобразованиевXXIвеке»(Москва,2015).Предварительнаяэкспертизадиссертационного исследования проведена на расширенном заседании кафедрпатологической физиологии, микробиологии, вирусологии, иммунологии и11клинической лабораторной диагностики, нормальной физиологии, гистологии,эмбриологии и цитологии, НИИ Иммунологии, ЦНИЛ ГБОУ ВПО ЮУГМУМинздрава России.Планирование научной работы, постановка цели и задач проводилосьсовместно с научными руководителями – доктором медицинских наук,профессором Осиковым Михаилом Владимировичем и доктором биологическихнаук,доцентомГизингерОксанойАнатольевной.Выборметодовиэкспериментальных моделей, набор экспериментального материала, научноинформационный поиск, анализ и обобщение данныхотечественной изарубежной научной литературы, анализ и интерпретация полученных данных,статистическая обработка, подготовка научных публикаций, написание иоформление рукописи выполнены лично автором.

Проведение клиническогоэтапа работы осуществлялось при поддержке заведующего отделением диализаГБУЗ «ЧОКБ», кандидата медицинских наук Ахматова Владимира Юрьевича.Иммунологические и биохимические исследования проводились на базе ЦНИЛГБОУ ВПО «ЮУГМУ» Минздрава России.Основные положения, выносимые на защиту1. У больных ХПН, находящихся на гемодиализе, и при экспериментальнойХПНповышаетсяпоглотительная,НСТ-редуцирующаяспособность,лизосомальная активность, снижается функциональный резерв нейтрофиловпериферической крови, развивается лимфоцитопения, в том числе снижаетсяколичество эффекторов клеточного (CD3+, CD4+, CD8+, CD16+) игуморального (CD20+, CD45RA+) иммунитета, подавляется Th1- и Th2зависимый иммунный ответ, изменяется цитокиновый профиль в крови.2. Факторами патогенеза изменений иммунного статуса при ХПН выступаютнакопление первичных и вторичных продуктов ПОЛ в плазме и в лимфоцитахпериферической крови, снижение активности СОД и каталазы в сыворотке,повышение концентрации ВНиСММ в плазме и в лимфоцитах, активация12гибели лимфоцитов в крови путем апоптоза и некроза, повышениеконцентрации в крови ПТГ, общего кальция.3.

При экспериментальном гиперпаратиреозе увеличивается НСТ-редуцирующаяспособность нейтрофилов, снижается количество лимфоцитов в крови, в томчисле CD3+ и CD45RA+, угнетается Th1- и Th2-зависимый иммунный ответ,увеличивается концентрация ИЛ-1β и уменьшается концентрация ИЛ-4 иИФН-γ в плазме. В условиях in vitro ПТГ активирует функциональнуюактивность нейтрофилов, гибель лимфоцитов, повышает секрецию ИЛ-8,снижает секрецию ИЛ-2 и ИЛ-10 мононуклеарами, выделенными из кровиздоровых людей.4.Применение амлодипина при экспериментальной ХПН и экспериментальномгиперпаратиреозе приводит к полному или частичному восстановлениюпоказателей иммунного статуса за счет ПОЛ-ограничивающего эффекта вплазме и в лимфоцитах периферической крови, повышения активности СОД всыворотке, ограничения гибели лимфоцитов периферической крови.Научная новизна исследованияВпервые в клинических и в экспериментальных условиях проведенокомплексное исследование врожденного и адаптивного иммунитета при ХПН всвязи с данными о состоянии фосфорно-кальциевого гомеостаза, процессовсвободно-радикального окисления, накоплении ВНиСММ в плазме и влимфоцитах периферической крови, гибели лимфоцитов в крови.

При ХПНповышаетсяпоглотительная,нитросинийтетразолий(НСТ)-редуцирующаяспособность, лизосомальная активность, снижается функциональный резервнейтрофиловпериферическойкрови,снижаетсяколичествоэффекторовклеточного (CD3+, CD4+, CD8+, CD16+) и гуморального (CD20+, CD45RA+)иммунитета, подавляется Th1- и Th2-зависимый иммунный ответ, изменяетсяцитокиновый профиль в крови. Продемонстрировано, что изменения врожденногои адаптивного иммунитета при ХПН ассоциированы с повышением концентрации13в крови ПТГ, общего кальция, накоплением продуктов ПОЛ в плазме и влимфоцитах периферической крови, снижением активности супероксиддисмутазы(СОД) и каталазы в сыворотке, повышением концентрации ВНиСММ в плазме и влимфоцитах, активацией гибели лимфоцитов в крови путем некроза и апоптоза.Показано, что вектор изменений иммунного статуса при изолированном диетаиндуцированном гиперпаратиреозе у крыс соответствует изменениям иммунногостатуса при ХПН: активируется функциональная активность нейтрофилов,снижается количество в крови CD3+ и CD45RA+ лимфоцитов, угнетается Th1- иTh2-зависимыйиммунныйответ,увеличиваетсяконцентрацияИЛ-1βиуменьшается концентрация ИЛ-4 и интерферона-гамма (ИФН-γ) в плазме.Впервые в экспериментальных условиях in vitro продемонстрировано, что ПТГоказывает прямое действие на иммунокомпетентные клетки, выделенные изцельной крови здоровых людей: дозо-зависимо активирует поглотительную иНСТ-редуцирующую способность нейтрофилов и гибель путем апоптоза инекроза лимфоцитов, выделенных из периферической крови здоровых людей;независимо от дозы повышает секрецию ИЛ-8, снижает секрецию ИЛ-2 и ИЛ-10мононуклеарами.

Характеристики

Список файлов диссертации