Диссертация (1140172), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Данный тест рекомендован для оценки активности CYP3A4in vivo российскими рекомендациями для фармацевтических компаний поизучению биотрансформации и транспортеров новых лекарственных средств[Сычев Д.А. и др., 2009]. На анализ берется именно утренняя моча, так какуровень кортизола самый высокий именно в утренние часы. Моча во времяутреннего туалета собирается в отдельную емкость, затем из нее перемещается впластмассовую пробирку, допускается замораживание мочи.Также преимуществом теста является возможность сбора материала (мочи)в домашних условиях. Концентрации 6-β-ГК и кортизола в моче определяетсяметодом хромато-масс-спектрометрического анализа на высокоэффективномжидкостном хроматографе, что является главным недостатком теста, так какделает его дорогим. Низкие значения отношения 6-β-ГК/кортизол соответствуетнизкой активности CYP3A4, а высокие значения отношения 6-β-ГК/кортизол –высокой активности CYP3A4 [Раменская Г.В.
и др., 2008].46Рисунок 1. Метаболические превращения кортизола [Abel et al, 1992; Galteau et al,2003]На данный момент известны несколько методик фенотипированияCYP2C9.47Проба с использованием толбутамида заключается в введении 125 мгпрепарата и отбора проб плазмы крови в течение 24 ч после приемалекарственного вещества. По данным Jetter A. и др., ученые определялитолбутамид и его метаболиты 4-гидрокситолбутамид и карбокситолбутамид вплазме и моче у 26 здоровых мужчин в течение 24 часов после приема препарата.Исследование биоматериала проводили с помощью метода ВЭЖХ/МС [Jetter et al,2004].В данной методике не учитывается метаболическая активность другогоизофермента, а именно CYP2C19, в отношении толбудамида, что в результатеможет привести к получению неточных данных.Проба с использованием фенитоина заключается в введении 300 мгфенитоина в качестве пробы на активность CYP2C9. В исследовании GeorgeM.
идр., в участии принимали 48 больных туберкулезом, которым перед основнойпротивотуберкулезной терапией получили 300 мг фенитоина для оценкиактивности изофермента CYP2C9. Пробы плазмы были собраны через три часа.ФенотипированиеCYP2C9проводилосьпутемизмеренияконцентрациифенитоина и его метаболита, п-гидроксифенилгидантиона, с помощью методаВЭЖХ/МС [George et al., 2012].В данной методике, как и в предыдущей, также не учитываетсяметаболическая активность других изоферментов, а именно CYP2C19 и CYP3A4,в отношении фенитоина, что в результате может привести к получению неточныхданных.Лозартановый тест рекомендован для оценки активности CYP2С9 in vivoроссийскими рекомендациями для фармацевтических компаний по изучениюбиотрансформации и транспортеров новых лекарственных средств [Сычев Д.А. идр., 2009].Тест основан на определении в образцах мочи концентраций лозартана иего активного метаболита E-3174 (в некоторых литературных источниках48используетсясинонимEXP3174),которыйобразуетсяизлозартанапреимущественно под действием CYP2C9 (Рисунок 2).
Она заключается воднократном приеме препарата в дозе 50 мг. В течение 8 часов проводится сбормочи, из которого отбирается образец объемом 15 мл, допускается замораживаниеи хранение при температуре -15ºС до анализа концентраций. Также, в течение 8часов сбора мочи, каждый 1 час проводится контроль состояния обследуемого –сбор жалоб, контроль АД и ЧСС [Jetter et al., 2004].После получения концентраций лозартана и его активного метаболитарассчитывают отношение E-3174/лозартан. Высокое значение данного отношениясвидетельствует о высокой активности CYP2C9 (метаболита образуется больше),низкое значение свидетельствует о низкой активности CYP2C9 (метаболитаобразуется меньше).В метаболизме лозартана участвует другой изофермент CYP3A4, что неучитывается в данной методике и может привести к получению неточных данныхпо активности изофермента CYP2C9.Вдальнейшиханализахinvitroокислительныхпроцессовсиспользованием дрожжей и микросомальных ферментов печени человека былоустановлено, что при физиологических концентрациях CYP2C9 являетсяопределяющим ферментом в процессе метаболизма лозартана, а CYP3A4включается в метаболизм только при высоких концентрациях препарата [Joy et al.,2009].
Исследования in vivo также доказали определяющую роль CYP2C9 вметаболизме лозартана. Разница между показателями AUC и периодомполувыведения лозартана, полученных из экспериментов in vivo с введениемингибиторов CYP3А4 и без них (эритромицин, итраконазол), оказаласьнесущественной [Williamson et al., 1998]. С другой стороны, исследованиявлияния ингибиторов CYP2C9 (флувастатин) на фармакокинетику лозартана уздоровых добровольцев показали, что для получения существенной разницымежду фармакокинетическими показателями, полученных в пробах с введением49ингбиторов и без, необходимо тормозить активность обоих изоферментоводновременно.
Исследования с ингибиторами других изоферментов (CYP2D6,CYP2C19) показали, что они не проявляют метаболической активности клозартану [Sandwall et al., 1999; Jasar et al., 2001].Рисунок 2. Схема метаболизма лозартана с указанием генов ферментовбиотрансформациии рецепторов (получено согласие PharmGKB и StanfordUniversity на публикацию схемы) [URL: https://www.pharmgkb.org, Whirl-Carrillo etal., 2012]Звездочкойнарисункеотмеченыгенызначимыхбиотрансформации лозартана и активный метаболит E-3174.ферментов50ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ2.1.
Дизайн исследования2.1.1. Общая схема исследования1. Проведение эпидемиологического исследования, целью которого являетсявыявление назначения потенциально опасных комбинаций ЛС пациентам старше65 лет. Оценка МВ ЛС, к которым могут привести потенциально опасныекомбинацииЛС,назначаемыепациентамстарше65летвусловияхтерапевтических отделений многопрофильного стационара, используя InteractionsChecker ресурса drugs.com, и разделение их по следующим категориям: опасныевзаимодействия,взаимодействиясреднейзначимостиинезначимыевзаимодействия.2.
Проведение эпидемиологического исследования, целью которого являетсяисследование частоты назначения потенциально не рекомендуемых ЛС пациентамстарше 65 лет по критериям Бирса, находившимся на лечении в терапевтическихотделениях многопрофильного стационара, используя данные листов назначений висториях болезни.3. Проведение эпидемиологического исследования, целью которого являетсяисследование частоты назначения потенциально не рекомендуемых ЛС пациентамстарше 65 лет по критериям STOPP/START, находившимся на лечении втерапевтических отделениях многопрофильного стационара, используя данныелистов назначений в историях болезни.4.
Проведение лозартанового теста у пациентов пожилого и старческого возрастаи у здоровых добровольцев молодого возраста с целью оценки активностиизофермента цитохрома Р450 CYP2C9. Пациентам утром натощак назначались 2551мг лозартана, с этого времени в течение 8 часов моча собиралась в отдельнуюемкость, измерялся объем собранной мочи, а затем отбирался в пробирку образецмочи 5 мл для определения концентрации лозартана и его метаболита,допускалось замораживание мочи. Методом высокоэффективной жидкостнойхроматографии определялись концентрации лозартана и Е-3174 в моче,рассчитывалосьотношениеЕ-3174/лозартан.Сопоставлениеактивностиизофермента цитохрома Р450 CYP2C9 (по отношению концентрации активногометаболита лозартана E-3174 к лозартану в моче) у пациентов пожилого истарческоговозрастаиуздоровыхдобровольцевмолодоговозраста.Сопоставление активности изофермента цитохрома Р450 CYP2C9 у пациентов,принимающих субстраты данного изофермента, и у лиц, не принимающихсубстраты CYP2C9.
Проведение корреляционного анализа между активностьюCYP2C9 и количеством ЛС, которое принимает пациент.2.1.2. Дизайн фармакоэпидемиологического исследования частотыназначения потенциально опасных комбинаций лекарственных средств упациентов старше 65 летМы провели анализ историй болезни 150 пациентов старше 65 лет,находящихся на лечении в терапевтическом отделении многопрофильногостационара за четырехмесячный период: с марта 2013 г. по июнь 2013 г.
напредмет назначения потенциально опасных комбинаций ЛС. Также данныеисторий болезни были проанализированы на предмет назначения потенциальноне рекомендованных ЛС по обновленным в 2012 году критериям БирсаАмериканской гериатрической ассоциации и критериям STOPP/START.52Длякаждогопациентабылсоставленсписокмеждународныхнепатентованных названий (МНН) ЛС из листа назначений в истории болезни. Всписок были также внесены компоненты комбинированных ЛС, имеющих в своемсоставе несколько ЛС с различными МНН.
Например, препарат «Беродуал»содержит 2 ЛС (ипратропия бромид и фенотерола гидробромид), поэтому всписок вносили названия ЛС, входящих в состав этого препарата.Все ЛС из листа назначений также были проверены на предметпотенциально опасных комбинаций ЛС с помощью свободной для доступасистемыDrugsInteractionCheckerинтернет-ресурсаwww.drugs.com,гармонизированного с инструкциями FDA и созданного компанией Cerner Multum.В данной системе МВ по клинической значимости разделены на 3 уровня:1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
