Автореферат (1139933), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Диссертационная работа носила экспериментальныйхарактер. Теоретической основой послужили научные труды отечественных изарубежных ученых.Апробация работы Основные результаты диссертации были доложены иобсуждены на Российской научно-практической конференции с международнымучастием «Снегиревские чтения» (г. Москва, 2016г.); на Общероссийском семинаре«Репродуктивный потенциал России: версия и контраверсия» Московские чтения(г.
Москва, 2016г.); на Международной конференции «Репродуктивная медицина:взгляд молодых - 2016» (г. Санкт-Петербург, 2016г.); на XVII Всероссийскомнаучно-образовательном форуме «Мать и дитя» (г. Москва, 2016г.); на XVIIIМеждународном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке» (г. Москва,2016г.); на Российской научно-практической конференции с международнымучастием «Снегиревские чтения» (г. Москва, 2017г.); на III Всероссийской 14межрегиональной с международным участием научной сессии молодых ученых истудентов «Современное решение актуальных научных проблем медицины» (г.Нижний Новгород, 2017г.); на X Общероссийском семинаре «Репродуктивныйпотенциал России: версии и контраверсии» (г.
Сочи, 2017 г.); на XVIIIВсероссийском научно-образовательном форуме «Мать и Дитя – 2017» (г. Москва,2017г.), Termis-Americas «Tissue Engineering and Regenerative Medicine» (США,Charlotte, NC, 2017г.).Апробация диссертационной работы состоялась на совместном заседаниикафедры акушерства и гинекологии №1 и кафедры патофизиологии ФГАОУ ВОПервый МГМУ им.
И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)28.03. 2018г (протокол №8). Диссертация рекомендована к защите.7ЛичныйвкладавтораАвторомличнопроведенаработаподоклиническому исследованию на 55 лабораторных животных (крысы породыВистар), производился забор биологического материала для получения клеточнойкультуры (пункция эпифиза бедренной кости и забор участка дермы улабораторныхживотных),отработаныэкспериментальнаямодельнесостоятельности фасциальных дефектов, методика получения тканеинженерныхконструкций на основе бионедеградируемых, биодеградируемых и композитныхматриксов с применением аутологичного клеточного компонента (мезенхимальныестромальные клетки костного мозга и дермальные фибробласты кожи крысы),проводиласьанестезиялабораторнымхирургических вмешательств иживотнымвовремяпроведенияимплантация тканеинженерных конструкций иконтрольных хирургических сеток лабораторным животным, забор образцовтканеинженерных конструкций с окружающими тканями на гистологическое ииммуногистохимическоеисследование.Собраниобработанпервичныйэкспериментальный материал, выполнена статистическая обработка данных,подготовлены публикации по теме исследования.ВнедрениерезультатовисследованиявпрактикуРезультатыисследования используются в учебно-методическом процессе на кафедрахакушерства и гинекологии, урологии, хирургии и отдела передовых клеточныхтехнологий института Регенеративной медицины ФГАОУ ВО Первый МГМУ им.И.М.
Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет).Соответствие диссертации паспорту научной специальности Научныеположения диссертации и результаты исследования соответствуют пункту 5паспорта специальности 14.01.01 – Акушерство и гинекология и пункту 10паспорта специальности 14.03.03 – Патологическая физиология. Отрасль науки:медицинские науки.Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 134 страницахпечатного текста. Состоит из введения, 4 глав, выводов, списка литературы, вкотором указаны 39 источников публикаций отечественных авторов и 75 работзарубежных авторов.
Работа иллюстрирована 87 рисунками и 6 таблицами.8Публикации По теме диссертационного исследования опубликовано 20научных работ, из них 7 статей в журналах, рекомендованных ВАК МинобрнаукиРоссии, учебное пособие для студентов и клинических ординаторов.ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫХарактеристикаматериалаиметодовэкспериментальногоисследования. Исследование проведено на 55 крысах - самцах породы Вистар весом 250-270 г. Животных содержали в Центральном виварии СеченовскогоУниверситета в контролируемых условиях. За 6-8 часов до операции улабораторных животных убирали корм и оставляли только воду. Оперативноевмешательство производили на фоне общей анестезии длительностью 20-30 минутс использованием инъекции смеси «Золетил 100» в дозе 2-3мг/100 г.
массы и«Рометар» в дозе 0,1 мл/100 г массы в мышцу наружной области бедра животного.Эксперимент проводили и завершали в соответствии с требованиями Хельсинскойконвенции о гуманном обращении с экспериментальными животными (1975).Тканеинженерные конструкции создавали на основе бионедеградируемых,биодеградируемых и композитных матриксов с применением аутологичногоклеточного компонента из мезенхимальных стромальных клеток костногомозга (МСК КМк) и дермальныхфибробластов кожи (ДФк) крыс.Завершающим этапом являлось создание тканеинженерной конструкции набионедеградируемой сетке с дермальными фибробластами (ДФч) кожичеловека.Вкачествебионедеградируемыхматриксовприменялиследующиехирургические сетки: 1) полипропиленовая сетка (ППС), сплетенная из нерассасывающихся волокон диаметром 0.5 мм; 2) проленовая сетка (ПС), на 50%более эластичная за счет специального плетения сетка из уменьшенных в диаметреволокон; 3) титановая сетка (ТС) - макропористый эндопротез, изготовленныйпутем плетения из титановых нитей диаметром 60–140 мкм.Биодеградируемых матриксы были представлены: 1) викриловой сеткой(ВС) из биодеградируемого в течение 60-90 суток полилактогликолида (90/10) сячейками сетки 0.5×0.5 мм.; 2) биологическим имплантатом, содержащим9свиной дермальный коллаген (БИ) из листовой свиной кожи, лишеннойантигенной структуры и спаянной химически.В качестве композитного материала (КС) применяли сетку, содержащую всвоей основе полипропиленовые волокна, придающие жесткость конструкции, ирассасывающиеся в течение 56-70 суток полиглактиновые волокна.Технологическиеэтапысозданиятканеинженерныхконструкцийфасции.
Создание ТИК на основе хирургических имплантатов (эндопротезов) иклеточного компонента проводилось в несколько последовательных этапов(рисунок 1). Работы по созданию ТИК проводили в Центре коллективногопользования «Регенеративная медицина» Сеченовского Университета - GMPлабораториисчистымипомещениями,оснащеннойоборудованиемдляисследований в области клеточных технологий.Рисунок 1 - Технология создания тканеинженерной конструкции фасции.Методы исследования полученных тканеинженерных конструкций.Световая и конфокальная микроскопия. Ежедневный контроль адгезиипролиферации клеток на фрагментах имплантатов проводили при помощи световоймикроскопии с фазовым контрастом (Olympus BX51, обработка при помощипрограммы Launch CAM VIEW).Для оценки жизнеспособности полученныхконструкций в условиях in vitro применяли окраску Live/Dead (зеленые клетки –живые; красные - мертвые) и конфокальную микроскопию.
Контроль степенижизнеспособности проводился на сроках 12, 30, 45 сутки.Морфологическое исследование. Морфологическое исследование полученныхпарафиновых срезов толщиной 5 мкм (ТИК и контрольных сеток с окружающимитканямиживотного)сприменением10окраскигематоксилин-эозиномипикрофуксином по Ван – Гизону.
Контрольное микроскопирование проводили насроках 7, 14, 21 день, а также через 2 и 4.5 месяца.Иммуногистохимический метод исследования материалов, полученных invivo. Иммуногистохимическое исследование проводили стрептавидин-биотиновымметодом (George L. Kumar, Lars Rudbeck, 2011). В качестве антитела использовалиследующие маркеры апоптотического и пролиферативного процессов: Caspase 3Caspase 9, Bcl2, CD31, CD51/61, Col3A1, Ki-67.Депарафинирование срезов итепловое демаскирование антигенов проводили при помощи автоматическойсистемы иммунного окрашивания Bench Mark (Ventana, США). Сроки получениярезультатов – 7, 14, 21 сутки, 2 и 4.5 месяца.Оценка тканевой реакции.
Тканевую реакцию оценивали по интенсивности,которая представлена балльной шкалой от 1 (отсутствие отклонения признака) до 5(максимальное проявление признака). Производилась оценка биорезорбции,макрофагальной реакции на материал, токсичность матрикса, иммунореактивность,степень ангиогенеза, выраженность микрососудистых повреждений, толщину изрелость капсулы, окружающей эндопротез.
Индекс пролиферации (ИП) считалисуммой баллов к максимальному количеству баллов, по следующим критериям:ангиогенезу, капсуле и биорезорбции. Индекс воспаления (ИВ) считали суммойбаллов к максимальному количеству баллов, по следующим критериям:токсичности,иммунореактивности,микрососудистымповреждениям.Регенеративный индекс (ИР) рассчитывали как отношение индекса пролиферациик воспалительному индексу.Статистическая обработка данных. Проводили в Graph Pad Prism II версии 7.00.Достоверность различий в регенеративном индексе между исследуемыми группамивыявлялидисперсионныманализом(one-wayANOVA)споправкойнамножественные сравнения Тьюки.
Статистические различия считали значимымипри p значении <0.05. Данные представлены как среднее значение ± стандартноеотклонение.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕПервый этап исследования заключался в создании тканеинженернойконструкции с аутологичным клеточным компонентом из МСК крысы набионедеградируемой полипропиленовой сетке (ППС).11Клеточную культуру костного мозга получали путем пункции аспирационнойиглой эпифиза бедренных костей у лабораторных животных (крыс).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
