Автореферат (1139933), страница 4
Текст из файла (страница 4)
Продукт реакции коричневого цвета. Ув. ×100.Получены результаты уровня активности маркёра CD31 по всем видамматриксов для ТИК – результаты схожи. На 7-е сутки отмечается высокаямембранная экспрессия CD31. К 14 суткам происходит умеренное снижениеэкспрессии CD31. К 21 суткам уровень маркёра CD31 снижается. Однако, у ТИК наоснове полипропиленовой и титановой сетках– уровни активности на 14 и 21 суткиостаются одинаковыми, что говорит о хорошем кровоснабжении данного участкаткани (рисунок 27).АБРисунок 27 - Иммуногистохимическая реакция с антителами к антигену CD31 на 21 сутки: А –ТИК на основе титана, Б – ТИК на основе биологического имплантата.
Ув. ×100.18Тканевую реакцию организма на имплантацию ТИК на различных матриксахс ДФ крыс оценивали по интенсивности, которая представлена балльной шкалой от1 (отсутствие отклонения признака) до 5 (максимальное проявление признака).Результаты отражены в таблице 2.Таблица 2Сравнительная оценка тканевой реакции на имплантацию крысе ТИК наразличных матриксах с аутологичными ДФ.БиорезорбцияМакрофагальнаяреакцияТоксическиесвойстваИммунореактивностьАнгиогенезМикрососудистыеповрежденияФормированиекапсулыТитановая Биологич. Викриловсетка + ДФ импланта ая сетка +крысыт + ДФ ДФкрысыкрысы335Композитнаясетка+ДФкрысы4Полипропиленовая сетка +ДФ крысы2334411111,4±0,552±1112,25±0,52,6±0,552,33±0,5853,8±0,4533,8±1,12,67±1,1511,2±0,451,5±0,581,4±0,5522234У ТИК на титановой сетке с ДФ получили следующие3индексы: ИП –7,33±0,58; ИВ – 9.66±1,08; ИР – 0,76.
ТИК на биологическом имплантате: ИП –10.0; ИВ – 3.0; ИР – 3,33. ТИК на викриловой сетке: ИП – 10,8±0,45; ИВ – 3.2±0,45;ИР – 3,38. ТИК на композитной сетке: ИП – 10.0; ИВ – 4.75±0,54; ИР – 2,11. ТИКна полипропиленовой сетке: ИП – 10,8±1.1; ИВ – 5.4±0,55; ИР – 2.Основная задача третьего этапа – создание прототипа ТИК с аутологичнымклеточным компонентом человека в условиях in vitro для дальнейшегоиспользования клинических условиях.На третьем этапе исследования для получения ДФ кожи человекапроизводили забор образцов кожи размером 2×3×1 мм у самого исследователяпосле проведения клинико-лабораторных исследований с целью исключениявоспалительных и инфекционных заболеваний. Подготовка клеточной культурыпроводилась аналогичным способом, как и первых двух этапах (рисунок 28).19Рисунок 28 - Первичная клеточная культура дермальных фибробластов кожи человека (ДФ в видеверетенообразных клеток).
Стрелкой указано на адгезивную клетку. Ув. ×200, фазовый контраст.Наданномэтапеисследованияоценивалидинамикупокрытияполипропиленовых хирургических сеток ДФ человека в условиях in vitro.Результаты фиксировали при помощи светового микроскопа на 1 сутки (рисунок29), 12 сутки (рисунок 30) и 30 сутки (рисунок 31). К 60 суткам формироваласьКИК в несколько слоев (рисунок 32).Рисунок 29 - Сетка с ДФч на 1 сутки после нанесения. Ув. × 200, фазовый контраст. Стрелкойуказано на адгезированную клетку.БАРисунок 30 - Начало заполнения ячеек после полного заполнения поверхности нитей сеток Аполипропилен, Б –пролен.
ДФ человека на 12 сутки после нанесения. Ув. × 100, фазовый контраст.АБРисунок 31 - Сетки (А - полипропилен, Б – пролен) с ДФ человека на 30 сут. после нанесения. Ув.× 40, фазовый контраст. Стрелкой указано на полностью закрытую фибробластами ячейку сетки.Рисунок 32 - Сетка полипропиленовая, почти полностью покрытая в несколько слоев ДФ (60 суткикультивирования). Ув.
× 40, фазовый контраст.Жизнеспособность клеток оценивали путем под счета в ТК-10 > 95%.АБРисунок 33 - Полипропиленовая сетка, покрытая ДФч: А- оставшаяся незакрытой ячейка сетки сживыми ДФ, расположенными в несколько слоев (30 сут. культивирования); Б –закрытая ячейкасетки с живыми ДФ, расположенными в несколько слоев (60 сут. культивирования).Конфокальная микроскопия. Окраска LIVE/DEAD.Вывод: полученная ТИК жизнеспособна и возможно использование даннойконструкции в условиях in vivo.20Оценкатканевойреакции.Результатыоценкитканевойреакциипредставлены на рисунке 34.
Сравнение материалов по регенеративному индексу.Рисунок 34 - Оценка тканевой реакцииИндекс пролиферации: максимальный - ТИК на полипропиленовой сетке,покрытые аутологичными МСК КМ крысы, минимальный – ТИК на титановойсетке, покрытой аутологичными ДФ крысы. Пролиферация на ТИК с МСК КМкрысы несколько ниже, чем на контрольной сетке.Индекс воспаления: максимальный - контрольные ППС, минимальный –ТИК на биологическом имплантате, покрытом аутологичными ДФ крысы.Воспаление на ТИК с МСК КМ и на контрольной сетке схоже.Индекс регенерации: максимальный - ТИК на биодеградируемых матриксах,покрытых ДФ крысы, минимальный – контрольные ППС.
Регенеративная реакцияна ТИК с МСК КМ и на контрольной сетке схожа.ВЫВОДЫ1. Хирургические имплантаты, применяемые в гинекологической практике, можноиспользовать в качестве матрикса для культивирования на них клеточныхкультур мезенхимальных стромальных клеток костного мозга и дермальныхфибробластов в составе ТИК.2. Аутологичные дермальные фибробласты и мезенхимальные стромальные клеткикостного мозга способны к формированию многослойного клеточного покрытияимплантата.3. Преимуществом обладают дермальные фибробласты в силу техническойпростаты и меньшей травматичности получения аутологичного материала,меньшего количества осложнений и экономической целесообразности.4. Тканеинженерные конструкции с аутологичным клеточным компонентомобеспечивают более быстрое формирование и зрелость соединительнотканных21структур в области имплантации, формируя тканеинженерную фасцию, котораяможет быть применена при реконструкции тазового дна.5.
В качестве ТИК необходимо использовать полученную конструкцию сколичеством жизнеспособных клеток более 85%.6. Лучшие результаты продемонстрировала ТИК на основе полипропиленового ититанового материала. Отмечалось наилучшее восприятие тканью реципиента:индекс регенерации на полипропиленовом матриксе составил - 2, а на титановом– 0.76, при этом высокая резистентность организма к растяжению и деформациихирургического материала.7.
Полученные данные позволяют создать ТИК на основе полипропиленовой сеткии ДФ человека.8. Результаты работы могут служить теоретическим и практическим обоснованиемдля использования ТИК с ДФ человека в клинической практике.ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ1. Для создания тканеинженерных конструкций могут быть использованыметодики выделения, культивирования и иммобилизации МСК и ДФ,отработанные в настоящем исследовании.2. Для использованиятканеинженерныхконструкций наоснове сетчатыхимплантатов необходимо создание полного покрытия аутологичными клетками,обеспечивающего снижение иммуногенности за счет изоляции материалаимплантата от окружающих тканей.3.
Разработанныйпрототиптканеинженернойконструкцииможетбытьиспользован в доклинических и клинических исследованиях при созданиибиомедицинского клеточного продукта.Список работ, опубликованных по теме диссертации1. Сулина Я.Ю., Ищенко А.И., Люндуп А.В., Александров Л.С. Опыт создания клеточноинженерной конструкции для хирургического лечения тазового пролапса. // МатериалыРоссийской научно-практической конференции с международным участиемСнегиревские чтения «Инновационные технологии в акушерстве и гинекологии». 2015. - С.
98-1002. Ищенко А.И., Люндуп А.В., Александров Л.С., Сулина Я.Ю. Возможностииспользования клеточных технологий в хирургическом лечении в хирургическомлечении тазового пролапса. // Материалы VIIIРегионального научно-образовательногофорума «Мать и дитя». - 2015. – С. 104-105.223. Ищенко А.И., Люндуп А.В., Александров Л.С., Сулина Я.Ю. Опыт создания клеточноинженерной конструкции для хирургического лечения тазового пролапса(предварительное сообщение). // Российский вестник акушера-гинеколога.
- 2015. - Т.15. - № 3. - С. 52-55.4. Сулина Я.Ю., Ищенко А.И., Люндуп А.В., Александров Л.С., Ищенко А.А., ГорбенкоО.Ю., Крашенинников М.Е. Опыт применения аутологичного клеточного компонента(мезенхимальных стволовых клеток костного мозга дермальных фибробластов) длясоздания клеточно-инженерных конструкций на основе полипропиленовогоимплантата для хирургической коррекции тазового пролапса. // Материалы XVIIВсероссийского научно-образовательного форума «Мать и дитя». - 2016. - С. 214-215.5.
Сулина Я.Ю., Ищенко А.И., Люндуп А.В., Александров Л.С., Ищенко А.А.Возможность использования клеточно-инженерных конструкций с аутологичнымклеточным материалом в хирургическом лечении тазового пролапса. // Материалы IXРегионального научно-образовательного форума «Мать и дитя». - 2016. - С. 112-1136. Сулина Я.Ю., Ищенко А.И., Люндуп А.В., Александров Л.С., Ищенко А.А., ГорбенкоО.Ю., Крашенинников М.Е., Демченко А.Г., Ляшенко Ю.С., Абдулаев Л.С., ПащенкоА.А.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
