Диссертация (1139722), страница 27

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 27)

Это объясняется, во-первых, невозможностьюизготовления традиционных микропрепаратов из хрупкого, легко разрушающегося сырья, и, вовторых, его характерным специфическим строением.Микроскопическому анализу подвергался порошок грудного щита сепии с размеромчастиц менее 1 мм.При микроскопическом исследовании порошка грудного щита сепии в поле зрениямикроскопа видны: плоские, иногда ребристые стекловидные пластинки различной формы и128размера (реже палочки); тонкие пластинки бесцветные и прозрачные, толстые – кремоватосерые и матовые; поверхность большинства прозрачных пластин имеет мелкие борозды в видепараллельных тонких полосок размером от 3 до 10 мкм, на некоторых заметны остаткиобломившихся камерных перегородок в виде одиночных или парных продольных ребер;поверхность кремовых пластин шершавая, мелко бугристая с волнообразными, иногдаразветвляющимися гребневидными выростами (Рис.51А, 51Б).Полученные результаты могут быть использованы для включения в нормативныйдокумент на сырье сепии и для дальнейших исследований по совершенствованию контролякачества многокомпонентных лекарственных средств.Рисунок 50.

Грудной щит каракатицы аптечнойАБРисунок 51. Микроскопия порошка грудного щита каракатицы. Ув.х90.А, Б – фрагменты сепиона129Таким образом, была доказана возможность определения показателей подлинностипорошков животных организмов методом микроскопического анализа. Микроскопическимимаркерами у обоих видов сырья являются элементы внутреннего скелета исследуемыхорганизмов – спикул кремнезема у бадяги и рудиментарной раковины – сепиона у сепии.Использование гистохимического анализа в определении подлинности и3.4.идентификации сырья различного происхожденияДополнением к микроскопической диагностике ЛРС служатгистохимические имикрохимические реакции на различные группы БАВ, включенные во все ведущие фармакопеи.Не смотря на то, что они приведены и в отечественной фармакопее, при описании в частныхстатьях микроскопии ЛРС – используются редко, что безусловно обедняет анатомодиагностическую картину анализируемого сырья.В ходе микроскопического изучения для большинства объектов исследования былипроведены гистохимические реакции на липофильные вещества (с Суданом III), запасноепитательноевещество(растворЛюголя),одревесневающиеэлементы(срастворомфлороглюцина), слизи (с раствором туши) и др.Обобщиврезультатыданныхиспытанийбыливыявленыосновныефункциимикрохимического исследования в диагностике ЛРС и препаратов, каждая из которых можетиметьдополнительноедиагностическоезначениеирасширяетвозможностимикроскопического анализа (рис.52).Рисунок 52.

Функции гистохимического анализа в диагностике ЛРС и препаратов.Вкачествепримеровданныхфункцийприводимнаиболеепоказательныегистохимические реакции, выполненные с цельным сырьем, растительными порошками ипрепаратами.130Подтверждения наличия и локализации БАВ в ЛРС3.4.1. Кора корицыНа поперечных срезах коры корицы в клетках паренхимы коры видны клеткиидиобласты с содержимым в виде округлых бесцветных образований. Проведенные реакции сраствором Судана III и реактивом Люголя позволяют дифференцировать эти образования какэфирное масло и крахмал, которые проявляются оранжевым и сине-фиолетовым цветомсоответственно (рис. 53).АБРисунок 53.

Кора корицы. Поперечный срез. Ув.х90А - эфирное масло (р-ция с Суданом III)Б - крахмальные зерна (р-ция с р-вом Люголя)3.4.2. Корневища сыти круглойНа поперечных срезах корневища сыти круглой в клетках паренхимы видны клеткиидиобласты с желтоватым содержимым. Проведенные реакции с раствором Судана III ираствором железо-аммониевых квасцов позволяют дифференцировать содержимое этих клетоккак эфирное масло и дубильные вещества, которые проявляются оранжевым и черно-синимцветом соответственно (рис. 54А, 54Б).Реактив Люголя позволяет определить в сырье традиционной китайской медицины(прошедшем специальную обработку) наличие в клетках паренхимы клейстеризованногокрахмала, неразличимого без данной реакции (рис.

54А).3.4.3. Реакция с тушью. Клубнелуковицы ариземы единокровной. Корни лаконоса.Хорошо известная фармакопейная реакция с раствором туши на поперечных срезахподземных органов может свидетельствовать не только о наличие в клетках слизи, как этоможно наблюдать в клубнелуковицах ариземы единокровной (среди клеток основной131паренхимы видны более крупные (до 250 мкм) клетки со слизью (реакция с тушью) (рис.

55Б),но и о наличии веществ липофильной природы (например, млечников).АБРисунок 54. Корневище сыти круглой, поперечный срез.А - клейстеризованный крахмал (р-ция с р-вом Люголя). Ув.х200Б - дубильные вещества (р-ция с р-ром железоаммониевых квасцов). Ув.х400Что наблюдалось на поперечных срезах корней лаконоса американского, где клеткивокруг проводящих пучков, не прокрашивались, оставаясь белым на общем серо-черном фоне(рис. 55А). Реакции с Суданом III подтверждала наличие в этих клетках липофильных веществ,окрасивщихсы в оранжевый цвет.Рисунок 55.

Микрохимическая реакция с тушью. Ув.х100.А – поперечный срез корня лаконоса американского. Млечники вокруг проводящих пучков.Б - поперечный срез клубнелуковицы ариземы единокровной. Клетки со слизью.1323.4.4. Пория кокосовиднаяКачественная реакция на гликоген используется для подтверждения подлинностиплодовых тел пории кокосовидной и предусмотрена нормативным документом на данное сырье.По ГФ КНР реакция проводится при смачивании кусочков сырья или порошка раствором йода[214]. В отличие от высших растений с раствором йода запасной полисахарид грибов даёт несинее, а красное окрашивание.Но в ходе наших исследований было установлено, что результаты данной реакциицелесообразно оценивать под микроскопом, т.е. реакция должна быть проведена какгистохимическая.

Не вооруженным глазом красного окрашивания в порошке не наблюдается.Методикапроведениягистохимическойреакциинагликогенвсырьепориикокосовидной. На предметное стекло в каплю раствора йода помещают срез плодового телапории или вносят препаровальной иглой немного порошка (размер частиц не более 0,25 мм),накрывают покровным стеклом.

Через 30-60 секунд отсасывают жидкость фильтровальнойбумагой, а оставшиеся частички рассматривают под микроскопом. Наблюдают краснокирпичное окрашивание содержимого гифов (рис. 56).Рисунок 56. Пория кокосовидная. Поперечный срез.Гистохимическая реакция на гликоген. Ув.х400.3.4.5. Листья толокнянкиВ ходе микроскопического изучения трудно диагностируемого порошка листьевтолокнянки в качестве дополнительного испытания для определения подлинности былапредложена гистохимическая реакция на полифенольные соединения (производные катехина) сраствором ванилина.133Методика проведения микрохимической реакции на полифенольные соединения(производные катехина) в порошке листьев толокнянки. На предметное стекло помещаютнемного сухого порошка листа толокнянки (размер частиц не более 0,25 мм), добавляют каплю1%-ногоспиртовогораствораванилина,азатемкаплюHCl(конц.),перемешиваютпрепаравальной иглой и накрывают покровным стеклом.

Через 30-60 секунд отсасываютжидкость фильтровальной бумагой, а оставшиеся частички рассматривают под микроскопом.Наблюдают ярко-красную окраску паренхимных клеток. Наиболее интенсивно окрашиваютсяклетки колленхимы, расположенные над жилками (рис. 57).Рисунок 57.

Порошок листьев толокнянки(менее 0,25 мм).Конденсированные дубильные вещества (р-ция с ванилином), Ув. х90Для проведения данных реакций использовался сухой непросветленный порошок, таккак любое взаимодействие с просветляющей жидкостью вело к вымыванию и разрушениюдубильных веществ - производных катехина.Измельченность порошка не должна превышать 0,25 мм. Данный размер частицпозволяет создать достаточную площадь контакта клеток тканей с реактивом и наблюдатьрезультат реакции под микроскопом (для более крупных непросветленных частиц это непредставляется возможным).134Визуализация диагностических признаков в порошках и лекарственныхпрепаратах3.4.6.

Порошок травы термопсисаПорошоктравытермопсисаструйногоизмельченияхарактеризуетсянизкойдиагностичностью, так как представляет собой совокупность мелких частиц - разрушенныхтканей и клеток, большинство из которых не поддается диагностике.Однако при окрашивании порошка Суданом III визуализируются и становятся болеезаметными на фоне неинформативных элементов важные диагностические признаки - обрывкиэпидермиса, округлые валики – места прикрепления волосков и складчатая кутикула, которыеокрашивается в оранжевый цвет (рис. 58).Рисунок 58. Порошок травы термопсиса струйного измельчения (менее 0,1 мм)(р-ция с Суданом III) Ув.

х903.4.7. Кора дуба в драже «Тонзилгон»Важные диагностические признаки коры дуба – группы каменистых клеток и лубяныхволокон в порошке высокой дисперсности, и особенно в составе многокомпонентныхпрепаратов визуализируются с помощью микрохимической реакции с раствором флороглюцина,окрашиваясь в яркий красный цвет.Методика проведения гистохимической реакции на одревесневающие элементы(каменистые клетки и механические волокна) коры дуба в многокомпонентном препарате«Тонзилгон».

Небольшое количество просветленной таблеточной смеси, полученной врезультате пробоподготовки, (см. гл. 5) помещают на предметное стекло в каплю растворафлороглюцина, добавляют каплю раствора 25% серной кислоты, через 1-2 минуты жидкость135отсасывают фильтровальной бумагой, добавляют раствор глицерина, накрывают покровнымстеклом и исследуют под микроскопом. Конгломераты каменистых клеток и механическиеволокна окрашиваются в красный цвет (рис. 59).Рисунок 59. Порошок коры дуба в драже «Тонзилгон»Конгломерат каменистых клеток, (р-ция с флороглюцином), Ув. х2003.4.8.

Микрокристаллическая целлюлоза в монокомпонентных и комплексныхпрепаратах.Микрокристаллическая целлюлоза, широко используемая в качестве вспомогательноговещества при производстве лекарственных препаратов, наряду с растительным компонентомформирует диагностическую картину при микроскопии монокомпонентных и комплексныхрастительных средств. Из общей картины диагностических признаков частички МКЦ позволяетвыделить микрохимическая реакция с хлор-цинк-йодом:Методика проведения гистохимической реакции на МКЦ в таблетках толокнянки.Небольшое количество сухой просветленной таблеточной смеси помещают на предметноестекло в каплю хлор-цинк-йода, накрывают покровным стеклом, слегка надавливают обратнойстороной препаровальной иглы и рассматривают в микроскоп. Наблюдают кристаллы МКЦ,окрашенные в сине-фиолетовый цвет (рис. 60).136Рис 60.

Характеристики

Список файлов диссертации