Диссертация (1139676), страница 49
Текст из файла (страница 49)
В результате исследования представленной группы соединений мыустановили следующее, что 6 соединений на основе замещенных 4-, 6-, 7аминоиндолов являются потенциальными противомикробными агентами – этоциклические амиды 5D, 7D, HD, нециклический амид S3 и пирролохинолоны39D, 4D.
Были показаны преимущества исследуемых соединений по сравнению страдиционноприменяемымиантимикробнымипрепаратаминапримереантибиотикоустойчивых штаммов микроорганизмов.Наряду с этим, при исследовании зависимости биологической активностииндолиламидов, енаминокетонов, пирролохинолинов от их элементного состава истроения нами доказано, что полученный и исследованный новый класспротивомикробных соединений весьма перспективен, поскольку их основойявляютсяструктурыметаболитов,встречающиесявнекоторыхживыхорганизмах. Известно, что индольная и пирролохинолиновая системы являютсяструктурными элементами молекул многих природных соединений.
Былопоказано, что противомикробная активность соединений, на основе замещенных4-,5-,6-,7-аминоиндолов,зависитотструктурымолекулыихарактеразаместителей в исследуемых индолиламидах и пирролохинолонах.Для дальнейшего углубленного изучения спектра противомикробнойактивности, механизмов антимикробного действия, эффективности на моделяхэкспериментальных инфекций в опытах in vivo с помощью функциональныхвозможностей метода бинарной логистической регрессии, на основании расчетапоказателей отношения шансов для коэффициента предикции активности (Ра),значения среднего межгруппового показателя ЛД50 (среднее значение для самцовисамокмышей),грамотрицательныхактивностивмикроорганизмовотношенииграмположительныхнамиотобраныбыл4инаиболееперспективных соединения – циклические амиды 5D, 7D, HD и нециклическийамид S3.
Эти соединения сочетают высокую антимикробную активность и низкую359токсичность, они довольно доступны, их можно синтезировать, по разработаннымнами методикам, с хорошими выходами и высокой степенью чистоты.В процессе исследования разработан новый способ определения типапротивомикробного действия новых соединений с антимикробной активностью.Новый способ определения противомикробного действия (бактериостатическоеили бактерицидное) основан на вычислении коэффициента оптической плотностикультуральнойсредывходекультивированиямикроорганизмовспротивомикробными соединениями в жидкой питательной среде. Преимуществаспособазаключаютсявбыстромикачественномопределениитипапротивомикробного действия биологически активных соединений, использованиенебольшого количества питательной среды при достаточно коротком временноминтервале, составляющем 24 ч.Установлено, что исследуемые соединения в минимальных подавляющихконцентрацияхустойчиваяоказываюттенденциякбактериостатическоезадержкеростаидействиеиразмножениянаблюдаетсятест-штаммовмикроорганизмов в их присутствии.Выявлено отсутствие токсического воздействия исследуемых соединенийна клетки прокариот и эукариотические клетки in vitro.Определена дозозависимая SOS-индуцирующая активность исследуемыхсоединений in vitro, что определяет один из механизмов их биологическогодействия на прокариотическую клетку – воздействие на ДНК.Было показано, что местное лечение исследуемыми соединениями,приводило к сокращению числа жизнеспособных микроорганизмов в ранахзначительно раньше, чем можно было бы ожидать при естественном заживлениинеобработанных ран, что приводило к элиминации бактерий из инфицированнойткани.
Исследуемые соединения эффективно препятствовали распространениюмикроорганизмов в подлежащие ткани и генерализации инфекционного процессаи значительно ускоряли заживление зараженных ран.На доклиническом этапе исследования разработаны методы получения исинтезирован новый класса синтетических лекарственных средств, на основе360замещенных 4-, 6-, 7-аминоиндолов, способных оказывать противомикробноедействие на прокариотические микроорганизмы и обосновано безопасноеиспользование выявленной противомикробной активности индолиламидов дляповышения эффективности противомикробной химиотерапии.361ВЫВОДЫ1. Реализованы синтетические возможности использования в качестве исходныхсоединений 16 замещенных 4-, 5-, 6-, 7-аминоиндолов и синтезирована серия из32 индолиламидов, енаминов и пирролохинолонов, для 18 (соединения слабораторными шифрами 17, 6D, 5D, 39D, 2D, 3D, 32D, 64D, 43D, 235D, 66D,243D, 7D, S3, HD, 1D, 4D, ТФПХ) из которых внеэкспериментальный прогнозналичия противомикробной активности в фармакологическом спектре составилболее 50 % (Ра более 0,500 вне зависимости от вероятности и прогнозной степенитоксичности).2.Полученныеновыесоединения,наосновезамещенного2-фенил-4-аминоиндола (циклический амид с лабораторным шифром 5D), замещенных 5аминоиндолов (нециклические амиды с лабораторными шифрами 43D, 66D, 235Dи пирролохинолон 39D), замещенных 6-аминоиндолов (нециклические амиды слабораторным шифром 243D, S3 и циклический амид 7D) и замещенных 7аминоиндолов(циклическийамидслабораторнымшифромHD,пирролохинолоны 1D и 4D), способны оказывать в диапазоне МПК 3,9-1500мкг/мл неблагоприятное воздействие на рост и размножение прокариотическихмикроорганизмов.3.
Выявлены амиды и пирролохинолоны, полученные на основе замещенных 4-, 5, 6-, 7-аминоиндолов (лабораторные шифры 5D, 39D, S3, 7D, HD, 4D),обладающие противомикробной активностью в диапазоне МПК 3,9-1000 мкг/мл ишироким спектром антимикробного действия.4. Наиболее активные амиды, полученные на основе замещенных 4-, 6- и 7аминоиндолов (лабораторные шифры 5D, S3, 7D, HD) являются практическинетоксичными соединениям (класс токсичности III-IV) при различных путяхвведения в условиях in vivo (диапазон LD50 596-1753 мг/кг при внутрибрюшинномвведении, 751-1994 мг/кг – при внутрижелудочном, при накожном – более 5000мг/кг).3625. Исследуемые соединения (лабораторные шифры 5D, S3, 7D, HD) вминимальных подавляющих концентрациях в диапазоне 20-100 мкг/мл оказываютбактериостатическое действие (показатель плотности культуральной среды (D):5D – 0,01-0,12; S3 – 0,07-0,38; 7D – 0,05-0,27; HD – 0,05-0,46 в течение 5-ти дней).6.Разработанныйиописанныйвработеспособопределениятипапротивомикробного действия, подтверждает бактериостатический тип действияисследуемых соединений (коэффициент плотности культуральной среды (КD): 5D– 2,275; S3 – 1,325; 7D – 2,65; HD – 1, 625).7.
Соединения с потенциальной противомикробной активностью – производные4-, 6-, 7-аминоиндолов (лабораторные шифры 5D, S3, 7D, HD) в диапазонеконцентраций 50-1000 мкг/мл не оказывают токсического воздействия на клеткипрокариот(индексмутагенностии<2)эукариотическиеклетки(доляжизнеспособных клеток HeLa 70,4-112 %) in vitro.8. Синтетические производные 4-, 6-, 7-аминоиндолов (лабораторные шифры 5D,7D,HD)вдиапазонеконцентраций500-1000мкг/млдемонстрируютдозозависимый SOS-индуцирующий эффект in vitro (IF 5D – 3,1; IF 7D – 3,2; IFHD – 6,7).9. Соединения с лабораторными шифрами 5D, S3, 7D, HD при орошении ран,инфицированных S.aureus и S3, HD – P.aeruginosa, раствором 10 мг/мл вглицерине2разавсуткиэффективнопрепятствуютраспространениюмикроорганизмов в подлежащие ткани (S.aureus – 5,39-6,89 Log КОЕ/рана;P.aeruginosa–5,98-5,99LogКОЕ/ранак2-мудню);генерализацииинфекционного процесса (S.aureus в крови не обнаруживается, 30-40 %обнаружение в печени, почках, селезенке; P.aeruginosa в крови, печени, почках,селезенкенеобнаруживаетсяна3-йдень);ускоряютзаживлениеинфицированных ран (S.aureus – 2,87-3,88 Log КОЕ/рана; P.aeruginosa – 3,86-3,91Log КОЕ/рана на 7-й день) на модели экспериментальной хирургической раневойинфекции in vivo.10.
Противомикробная активность соединений, на основе замещенных 4-, 5-, 6-, 7аминоиндолов, зависит от структуры молекул и характера заместителей в363исследуемыхиндолиламидахтрифторметильныйзаместительипирролохинолонах.вамиднойчастиАмиды,имеющиемолекулы,обладаютпротивомикробным действием (5D, HD, 235D, 43D, S3, 7D, 66D, 243D, 4D –диапазон МПК90 62,5-250 мкг/мл). Наиболее активны циклические амиды,имеющие в своих молекулах одновременно закрепленные спиртовую и амиднуюфункции (НО- или О=С-NH-) 5D, 7D, HD (диапазон МПК90 62,5-125 мкг/мл).11. Активность нециклических амидов зависит от характера замещения вбензольном и пиррольном кольцах индольной системы, а также от местарасположения амидной группировки. Соединение S3, в молекуле которого амиденольная форма дополнительно стабилизирована фенильным заместителем,обладает наибольшей активностью среди нециклических амидов (S3 – МПК9062,5-125 мкг/мл; 243D 235D, 43D, 66D – диапазон МПК90 125-250 мкг/мл; 2D, 3D,32D, 64D – МПК ≤ 1000 мкг/мл).364ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ1.Полученныеновыесоединения,наосновезамещенного2-фенил-4-аминоиндола (циклический амид с лабораторным шифром 5D), замещенных 6аминоиндолов (нециклический амид с лабораторным шифром S3 и циклическийамид 7D) и замещенных 7-аминоиндолов (циклический амид с лабораторнымшифром HD) рекомендуются в качестве противомикробных средств длявнедрения в клиническую практику, для лечения ран, инфицированных S.aureus иP.aeruginosa.2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
