Автореферат (1139567), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Оценивались показатели общей минерализации,общей жесткости и содержания 24 химических соединений. Исследовано 2157 пробводы. Определение риска воздействия на здоровье населения исследуемыхтерриторий факторов среды обитания проводилась на основе «Руководства пооценке риска для здоровья населения при воздействии химических веществ,загрязняющих окружающую среду» Р 2.1.10. 1920-04.Экспериментальное исследование выполнено на 80 самцах мышей инбреднойлинии C57BL/6 в возрасте 6 – 7 недель с исходной массой 15 – 17 г, разделенных насемь опытных и одну контрольную группу, по 10 животных в каждой. Исследованиевыполнено с соблюдением норм, регламентированных Приказом МЗ СССР №755 от912.08.1977 г.
и Приказом МЗ РФ №267 от 19.06.2003 г. Длительность экспериментасоставила 35 суток, в течение которых животные получали в качестве питьевойводы затравку водными растворами солей тяжелых металлов и хелаторыэссенциальных микроэлементов. Концентрация солей тяжелых металлов в растворахв пересчете на металл составила 10 ПДК (СанПин 2.1.4.1074-01.). I опытная группаполучала раствор сульфата цинка, II опытная группа – раствор сульфата никеля, IIIопытная группа – раствор бихромата натрия двухосновного, IV опытная группа –раствор ацетата свинца (трехводный). Мышам V опытной группы ежедневновнутрибрюшинно в дозе 100 мг/кг вводился хелатор железа дефероксамин (NovartisFarma S.p.A., Италия).
Хелатор меди тетратиомолибдат аммония (ТТМ) («Sigma»,США) вводился мышам VI опытной группы перорально через зонд в дозе 30 мг/кг.Животным VII опытной группы внутрибрюшинно ежедневно инъецировалсяхелатор цинка N,N,N`,N`-тетракис (2-пиридилметил) этилендиамин (ТПЭН)(«Sigma», США) в дозе 8 мг/кг в транспортной среде (Fukuyama S., 2011). Мышиконтрольной группы получали плацебо.
На 17-е сутки эксперимента животным всехгрупп под эфирным наркозом была проведена индукция анагена путем депиляциистержней волос с кожи спины (Paus R., 1994) восковыми мини-полосками WaxStrips«Beauty formulas» (Drammock International LTD., Великобритания). На 9-е суткипосле индукции анагена 50% животных из каждой группы выводились изэксперимента путем декапитации под эфирным наркозом с последующимвыполнением гистологического и иммуногистохимического исследования1.Материалом для гистологического исследования являлись образцы кожи спины,подвергнутой депиляции, которые после забора помещали в 10% нейтральныйформалин, фиксировали при комнатной температуре в течение суток, послестандартной гистологической проводки заливали в парафин. Гистосрезы толщиной5 мкм окрашивали гематоксилином Майера и эозином и по Ван-Гизону.Определение пролиферативной активности кератиноцитов основывалось наизучении характера экспрессии ядерного антигена Ki-67, выявляемогоиммуногистохимическим методом с применением кроличьих моноклональныхантител к Ki-67 (clone SP6) (Cell marque, США).
Апоптотические клетки выявлялисьпутем идентификации каспазы-3 с использованием первичных антител Human CPP32 (caspase-3) Clone JHM62 согласно протоколу фирмы-производителя (SpringBioScience, США). Подсчет клеток проводился не менее чем в 15 полях зрения приувеличении × 600. Для каждого поля зрения рассчитывали индекс пролиферации ииндекс апоптоза (Яровая Г.А., 2011). На 19-е сутки после индукции анагена изэксперимента выводились оставшиеся 50% мышей каждой группы.
Забор и1Исследование выполено при консультировании заведующей кафедрой патологической анатомии ФГБОУВО ОрГМУ МЗ РФ доктора мед. наук профессора В.С. Поляковой10подготовка образцов кожи для окрашивания гистологических препаратовгематоксилином Майера и эозином и по Ван-Гизону проводился описанным вышеспособом. Иммуногистохимический метод в данном случае не использовался.Клинической базой исследования явилось ГАУЗ «Оренбургский областнойклинический кожно-венерологический диспансер». Обследовано и находилось накатамнестическом наблюдении 105 взрослых пациентов с ГА (39 мужчин и 66женщин, средний возраст 29,4±1,01 лет). Включение всех обследуемых висследование проводилось после подписания ими «Информированного согласия научастие в исследовании».
Диагноз ГА выставлялся в соответствии с классификациейOlsen E. et al. (2004). При площади облысения до 25% диагностировалась легкаястепень тяжести болезни, 25 – 50% - средняя степень тяжести ГА, свыше 50% тяжелая степень тяжести (Адаскевич В.П., 2000). Диагностика ГА дополняласьобнаружением дерматоскопических признаков заболевания с использованиемкамеры «Aramo GS» (ARAM HUVIS Co., Ltd, Южная Корея). Лабораторноинструментальное обследование больных ГА включало микроскопическоеисследование чешуек кожи и волос на наличие патогенных грибов; серологическоеисследование для исключения сифилиса; клинический анализ крови; биохимическийанализ крови; определение сывороточных концентраций тиреотропного гормонагипофиза (ТТГ), тироксина свободного (Т4 своб.), трийодтиронина свободного (Т3своб.) и антител к тиреопероксидазе (АТ к ТПО); ультразвуковое исследование(УЗИ) внутренних органов и щитовидной железы, фиброгастродуоденоскопию(ФГДС) в сочетании с морфологическим и биохимическим методом обнаруженияHelicobacter pylori (H.
pylori). Иммунологическое обследование включалоопределение клеточных популяций лейкоцитов и субпопуляционного составалимфоцитов периферической крови в реакции иммунофлюоресценции с помощьюмоноклональных антител производства ООО «Сорбент»; фагоцитарной активностисегментоядерных нейтрофилов периферической крови (Меньшиков В.В., 1987);содержания сывороточных иммуноглобулинов (IgA, IgM, IgG) методом радиальнойиммунодиффузии; концентрации общего IgЕ методом ИФА с использованиемнаборов ООО «Алкор Био»; уровня циркулирующих комплексов (ЦИК) в сывороткекрови в реакции преципитации с раствором полиэтиленгликоля2. Частотный анализиммунограмм с определением степени иммунных расстройств выполнен всоответствии с методикой Земского А.М.
(1999). Выраженность окисидативногостресса и активность антиоксидантных систем оценивалась исходя изсывороточного уровня малонового диальдегида (МДА) (Ohkawa H., 1979),активности супероксиддисмутазы (СОД) эритроцитов (Сирота Т.В., 1999) и2Исследование выполнено при консультировании заведующего Проблемной научно-исследовательскойлабораторией по изучению механизмов естественного иммунитета ФГБОУ ВО ОрГМУ МЗ РФ докторамед.
наук профессора А.И. Смолягина11активностикаталазыэритроцитов(ZuckH.,1963),определяемыхспектрофотомерически на приборе «Genesys 5» (США)3. Оценка содержания 11микроэлементов (цинка, железа, меди, кобальта, хрома, марганца, никеля, стронция,кадмия, висмута и свинца) в волосах и цельной крови 100 пациентов с ГА и 100здоровых лиц группы сравнения (39 мужчин и 61 женщина, средний возраст26,7±1,3 года) выполнена методом атомно-адсорбционной спектрофотометрии всоответствии с методическими указаниям МУК 4.1.776-99 и МУК 4.1.777-99.Материалом для молекулярно-генетического анализа явились образцы крови 105пациентов с ГА и 100 здоровых лиц группы сравнения. Генотипированиепроводилосьметодомаллель-специфическойгибридизациивформатеполимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режимереального времени (ТaqMan) на амплификаторе детектирующем «DTlite» (ООО«НПО ДНК-Технология»).
Выделение ДНК из лейкоцитов крови проводилось сиспользованием комплекта реагентов для выделения ДНК Проба ГС (ООО «НПОДНК-Технология»). ПЦР-амплификация ДНК выполнена с использованием наборовдля определения однонуклеотидных полиморфизмов, разработанных ипроизведенных научно-производственной компанией «Синтол».
Функциональнаяаннотация генов выполнена в биоинформационном ресурсе Database for Annotation,Visualization, and Integrated Discovery (DAVID). Анализ взаимодействия белковыхпродуктов генов проведен в ресурсе Search Tool for Retrieval of InteractingGines/Proteins (STRING). Анализ молекулярных путей выполнен с использованиембазы данных Kioto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG).Анализ и моделирование статистической информации проводилось спомощью пакетов прикладных программ SPSS 22.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA),Statistica 10.0 (StatSoft Inc., USA), Stata/SE 11.1, интерактивной программы расчетакритерия 2 для таблиц сопряженности (Preacher K.
J., 2001), стандартного пакета«Microsoft Excel». Во всех процедурах статистического анализа критическоезначение уровня значимости принималось равным 0,05. Предварительный анализколичественных признаков включал проверку гипотезы о нормальном законераспределения с применением критериев Колмогорова-Смирнова и Шапиро-Уилка.При несоответствии выборочного распределения нормальному, рассчитывалисьнепараметрические числовые характеристики – медиана (Ме) и интерквартильныйразмах [Q25; Q75], а при анализе связи двух признаков – ранговый коэффициенткорреляции.
Проверка гипотезы об однородности распределения двух независимыхсовокупностей выполнена с помощью критерия Манна-Уитни, для сравнения болеедвухгрупписпользовалсякритерийКраскела-Уоллиса.Показатели3Исследование выполнено при консультировании заведующего кафедрой химии и фармацевтическойхимии ФГБОУ ВО ОрГМУ МЗ РФ доктора мед. наук профессора С.И.
Красикова12распространенности АИЗК представлены в виде количества случаев на 10000населения и 95% доверительного интервала, рассчитанного по методу Уилсона. Дляхарактеристикиуровнейзаболеваемостипримененметодтертильногораспределения. При анализе данных модельного эксперимента количественнаяоценка меры сходства (различия) каждой опытной группы мышей с контрольнойгруппой по двум одинаково важным и некоррелированным признакам (индексампролиферации и апоптоза), проведена путем расчета евклидова расстояния (АйвазянС.А., 2001). Для построения схожих в смысле выбранной метрики групп мышейиспользовались методы кластерного анализа – иерархический метод Варда иитерационный метод k-средних (Жамбю М., 1988).
Обработка статистическойинформации по качественным признакам состояла в группировке данных в формедвухфакторных таблиц сопряженности, на основе которых проверялась гипотеза онезависимости двух номинальных признаков с помощью критерия Пирсона χ2 иликритерия χ2 с поправкой Йейтса и Бонферрони (для таблиц 2×2). Содержательнаяинтерпретация связи осуществлялась на основе значений стандартизированныхостатков (Бююль А., 2005) и карт соответствия категорий признаков, построенныхметодом анализа соответствий (Benzecri J.-P., 1973).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
