Автореферат (1139553), страница 3
Текст из файла (страница 3)
А.Ф. Цыбаи МНИОИ им. П.А. Герцена – филиалы ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России 5июня 2018 года.9Личный вклад автораАвтору принадлежит основная и ведущая роль в выборе направления исследования и темы исследования, определении задач и поиске методов их решения, а также анализе теоретических данных, проведении экспериментов, интерпретации, статистической обработке и обобщении полученных результатов. Осуществлено планирование и проведение экспериментов, разработка метода активации лимфоцитов и внедрение новых способов лечения онкологическихбольных с использованием АИТ активированными лимфоцитами.
Автором обозначены дальнейшие перспективы внедрения результатов работы.Внедрение результатов диссертации в практикуРезультаты работы внедрены и используются в практической деятельности Медицинского радиологического научного центра им. А.Ф. Цыба – филиал ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр радиологии» Минздрава России, в лаборатории молекулярной иммунологии ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии имени Дмитрия Рогачева»Минздрава России и в учебно-методической работе со студентами и магистрами отделения биотехнологии на кафедреядерной медицине в Обнинском институте атомной энергетики НИЯУ МИФИ.Соответствие диссертации паспорту научной специальностиНаучные положения диссертации соответствуют паспорту научных специальностей:14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология, конкретно пунктам 1, 2, 6, 8, 11, 14 и 16области исследования, паспорта специальности.
Также результаты диссертационной работысоответствуют специальности 14.01.12 – онкология, конкретно пунктам 2, 4, 5 и 6 областиисследования, паспорта специальности. Большую часть в работе занимают иммунологические аспекты, которые оцениваются на достаточном клиническом материале онкологическихбольных.ПубликацииПо теме диссертации опубликовано 103 работы, среди которых 27 статей в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, в том числе 17оригинальных работ, 8 обзоров, 2 статьи в иностранных журналах. Получены 2 патента Российской Федерации на изобретение, издана новая медицинская технология.Объем и структура диссертацииДиссертация изложена на 297 страницах машинописного текста, содержит 33 таблицы и61 рисунок. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания клинического материала иметодов исследования, четырех глав с результатами собственных исследований, обсуждения,заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 91 отечественную и 307 зарубежных работ.10ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫХарактеристика клинического материалаВ основе работы лежит анализ клинико-диагностических данных и результатов лечения339 пациентов.
В частности, в исследование включены 279 больных с онкологическими заболеваниями, контрольную группу составили 60 условно здоровых добровольцев (доноров) старше18 лет. Все пациенты проходили обследование или находились на лечении в Медицинском радиологическом научном центре им. А.Ф. Цыба – филиал ФГБУ «Национальный медицинскийисследовательский центр радиологии» Минздрава России с 2006 по 2017 гг. (далее Центр). Исследование проводили в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной ассоциации«Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека».Так как работа состояла из нескольких этапов, то больные были разделены на группыв соответствии с дизайном исследования (рис.
1).IВыявление дисбалансапоказателей иммунитета(MICA,субпопуляционный составлимфоцитов, маркерыактивации, цитокины)(n=200, контроль n=60)IIIПроведениеадоптивнойиммунотерапиицитотоксическимилимфоцитами(n=79)IIСоздание клеточноймодели активациилимфоцитов (IL-2, IL-15,жизнеспособность,функциональнаяактивность)(n=25, контроль n=10 )IVИммуномониторингпоказателей до и после АИТ(MICA, субпопуляционныйсостав лимфоцитов,маркеры активации,цитокины) (n=79)Рисунок 1 - Дизайн исследованияI – На первом этапе проводили выявление дисбаланса показателей иммунитета у 200онкологических больных до проведения специфического лечения основного заболевания.Для сравнения показателей использовали кровь 60 здоровых доноров. Среди злокачественныхновообразований диагностированы: рак молочной железы (n=11), щитовидной железы (n=19),предстательной железы (n=16), гортаноглотки (n=11), тела или шейки матки (n=12), мочевогопузыря (n=10), почки (n=5), толстой кишки (n=53) или желудка (n=19).11II – Для разработки метода активации лимфоцитов использовали периферическуюкровь 25 онкологических больных, которым в последующем была проведена адоптивная иммунотерапия (АИТ) и 10 здоровых доноров (n=35).III – Для проведения АИТ активированными лимфоцитами в исследование включены79 онкологических больных на различных этапах противоопухолевой терапии (n=79).IV – С целью проведения мониторинга иммунологических показателей осуществлялсязабор крови у этих же 79 онкологических больных с различными злокачественными новообразованиями на этапах до и после АИТ (n=79).Первоначально оценивали уровень сывороточных молекул MICA у 200 первичныхбольных с солидными опухолями.
Субпопуляционный состав лимфоцитов периферическойкрови и уровень цитокинов среди них были оценены у 83 пациентов из двух различных поиммуногенности нозологических групп. В первую группу включены 45 больных меланомойкожи IIа-IV стадии в возрасте от 26 до 75 лет (медиана 56 лет), 30 женщин и 15 мужчин.
Вовторую группу были включены 38 первичных больных с диагнозом – колоректальный рак (КРР)в возрасте от 42 до 88 лет (медиана 63 года), 18 женщин и 20 мужчин (таблица 1).Таблица 1Распределение больных по стадии заболевания для выявления дисбалансапоказателей иммунитета№Стадия1234IIIIIIIVИтогоМеланомаабс.–831645%–17,868,913,4100Колоректальный ракабс.61410838%15,836,826,321,1100Всегоабс.622411483%7,226,549,416,9100У всех 83 больных были оценены иммунологические показатели клеточного звена иммунитета (субпопуляционный состав лимфоцитов, фенотип В-, Т-лимфоцитов, Treg, NKT-и NKклеток периферической крови и маркеры активации (HLA-DR, CD38, CD69, CD314 (NKG2D),CD25, CD95). В дополнение к этому для характеристики гуморального звена иммунитета уэтих же больных в работе оценен уровень цитокинов (TNF-α, IFN-α, IFN-γ, IL-2, IL-10).В клиническое исследование по применению АИТ активированными ЦЛ были включены 79 больных с подтвержденным онкологическим заболеванием, которые дали согласие научастие в исследовании и подписали информированное согласие.
Протокол утвержден этическим комитетом Центра.12Метод АИТ был первоначально апробирован у 15 больных с различными солиднымиопухолями в возрасте от 25 до 79 лет (медиана 57 лет). Женщин было 6, мужчин – 8 человек(таблица 2).Таблица 2Характеристика больных, у которых проводили апробацию адоптивнойиммунотерапии№123456789101112131415Больные,возрастВ., 60Т., 50Е., 79Ш., 59Л., 55С., 66Б., 57А., 53Ш., 47А., 45Ч., 79В., 25И., 63Ч., 46Л., 59ЗаболеваниеПолСтадияРЛРМЖРМЖПКРПКРПКРПКРРПЖРПЖРПЖРПЖРЖРЖРПРПжжжмммжммжжммммIVIVIIIbIVIVIVIVIIbIVIVIVIIbIIbIVbIIIbПроведенноелечениеПХТЛТ, ХТ, ФДТНе былоОООО, ХТО, ПХТО, ПХТПХТЛТО, ПХТ, ФДТПХТО, ЛТ, ПХТЛТВремя наблюдения, мес.2012222828241221518242127Примечание: РЛ - рак легкого, РМЖ - рак молочной железы, ПКР - почечно-клеточный рак,РПЖ - рак поджелудочной железы, РЖ - рак желудка, РП - рак пищевода.О – операция, ЛТ – лучевая терапия, ПХТ – полихимиотерапия, ФДТ – фотодинамическаятерапия.На следующем этапе работы были оценены результаты проведения АИТ.
В даннуючасть исследования по АИТ были включены 64 больных: 13 больных колоректальным раком(КРР) (рак прямой кишки у 9 больных, сигмовидной у 3, анального канала у 1 больного) и 51больной меланомой кожи (таблица 3).Общее состояние больных данной части исследования, было оценено как ECOG-0 у 5(7,8%), как ECOG-1-2 у 58 (90,6%) больных и только у 1 больного КРР было оценено какECOG-3.Оценка результатов лечения проводилась в соответствии с критериями irRC(Immunerelated Response Criteria), которые были опубликованы в 2013 году с целью обеспеченияболее точной оценки эффекта иммунотерапевтических агентов [Nishino М. et al. 2013].
Оценивали частичный ответ (ЧО), стабилизацию болезни (СБ), прогрессию болезни (ПБ), объективный эффект (ОЭ) – совокупный показатель частичной и полной регрессии опухоли, контрольнад опухолью (ОЭ и СБ) и время до прогрессирования болезни (ВДП) от начала АИТ.13Таблица 3Характеристика больных, принимающих участие в исследовании с включением АИТактивированными цитотоксическими лимфоцитамиНозологияХарактеристикаКоличество больных, (%)Женщины / МужчиныМедиана возраста, интервал, летСтадия заболевания, абс. / %IIIIIIIVНаличие метастазов или первичногоочага, абс. / %Предшествующее лечение: абс. / %ХирургическоеХТКомплексноеКомбинированноеНе проводилосьСреднее время наблюдения, мес.(интервал)Медиана времени наблюдения, мес.ВсегоКРР13 (37,8)1,6 / 154 (40–78)Меланома51 (62,2)1,4 / 153 (26–82)64 (100)38 / 2653 (26–82)1 / 7,72 / 15,46 / 46,24 / 30,809 / 17,636 / 70,66 / 11,81 / 1,611 / 17,242 / 65,610 / 15,69 / 69,235 / 68,644 / 68,8001 / 7,711 / 77,01 / 7,719,4±13,2(3-37)253 / 5,92 / 3,935 / 68,611 / 21,6021,9±13,3(1-51)243 / 4,72 / 3,136 / 56,322 / 34,41 / 1,620,6±13,2(1-51)24Методы исследованияОбъектом исследования служила периферическая венозная кровь.
Мононуклеарныеклетки (МНК) выделяли на градиенте плотности Hystopague-1077 по общепринятойметодике.Проточная цитофлуориметрия. Субпопуляционный состав лимфоцитов и маркеры активации оценивали при помощи иммунофенотипирования лимфоцитов периферической крови.Использовали антитела против CD3, CD4, CD8, CD11c, CD14, CD16, CD19, CD45, CD56, CD80,CD86; маркеров активации лимфоцитов: HLA-DR, CD25, CD38, CD69, CD95, CD314 (NKG2D) иантигенов дифференцировки CD45+RO и CD45+RA, конъюгированные с флуоресцентными красителями РЕ, FITC, Alexa Fluor488 или PE-Cy5.5. Анализ флуоресценции и подсчет клеток осуществляли на проточном цитофлуориметре FACScan (Becton Dickinson, США) или Cytomics FC500 MPL (Beckman Coulter, США).Методы культивирования клеток. Все манипуляции с культурой клеток (К562),CHO и МНК проводили с соблюдением требований стерильности и безопасности.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
