Автореферат (1139553), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Для группы больных КРР характерно повышенное содержание NK-клеток и активированных NK-клеток, больным меланомой свойственно увеличениедоли активированных субпопуляций Т-лимфоцитов. Общепринятая панель CD маркеров лимфоцитов дополнена рецепторами активации и малыми субпопуляциями лимфоцитов. Выявленоувеличение поверхностной экспрессии как ранних, так и поздних активационных молекул, а также маркера апоптоза лимфоцитов, что свидетельствует о хроническом угнетении иммунитета уонкологических больных различных по иммуногенности нозологических групп.Используя рекомбинантный белок MICA, полученный в результате работы, экспериментально доказано, что sMICA может взаимодействовать с рецептором NKG2D и блокироватьконтактный цитолиз, опосредованный NK-клетками, что выражается в снижении цитотоксической активности NK-клеток.В результате исследования разработан оригинальный метод длительного культивирования и активации цитотоксических лимфоцитов in vitro.
Данный способ активации лимфоцитовзащищен патентом РФ на изобретение. Он даёт возможность проводить АИТ в течение нескольких месяцев без дополнительного забора крови. Метод отличается упрощенной процедурой активации лимфоцитов, без разделения мононуклеарных клеток (МНК) на фракции и без использования фидерных клеток. Благодаря низкой концентрации и совместному применению двухцитокинов (IL-2 и IL-15) в питательной среде, а также отсутствию опухолевых антигенов, использование аутологичных активированных лимфоцитов и бесклеточного продукта для АИТонкологических больных является безопасным.Разработан алгоритм персонифицированной АИТ онкологических больных с использованием активированных in vitro цитотоксических лимфоцитов. Данный способ лечениязащищен патентом РФ на изобретение.
На основе данного алгоритма методика персонифицированной АИТ была апробирована у больных раком желудка, пищевода, поджелудочнойжелезы, молочной железы, почки, легкого, КРР и меланомой. Проведение АИТ позволило участи больных устранить нарушения в иммунной системе за счет увеличения содержанияиммунореактивных клеток и снижения иммуносупрессивного влияния Treg и sMICA налимфоциты и привести к контролю над опухолевым процессом. Предложенный способ лечения может дополнить стандартные схемы лечения онкологических больных с различнымисолидными новообразованиями.6Впервые проведен мониторинг уровня молекул MICA в сыворотке крови онкологическихбольных и субпопуляционного состава лимфоцитов на фоне АИТ активированными цитотоксическими лимфоцитами.
Комплексное и регулярное мониторирование изменений показателейиммунитета и уровня sMICA позволили выявить несостоятельность противоопухолевого иммунного ответа и явились дополнительными критериями в оценке эффективности АИТ.Теоретическая и практическая значимостьВ результате диссертационной работы значительно расширен набор параметров диагностики и мониторинга состояния иммунной системы за счет комплексной оценки дисбаланса показателей иммунитета с учётом изменений в субпопуляционном составе лимфоцитов и уровнеэкспрессии маркёров ранней и поздней активации лимфоцитов периферической крови, а такжеопределения количества молекул MICA в сыворотке крови больных. Полученные данные могутбыть использованы для улучшения результатов иммунодиагностики у онкологических больных,как дополнительные факторы прогноза, а также для проведения мониторинга изменения иммунологических показателей на фоне лечения.В результате работы получен рекомбинантный человеческий белок MICA (rhMICA), который можно использовать при выполнении НИР для изучения взаимодействия лиганда с NKклетками в системах in vitro и ex vivo и его влияния на их активность, а также для получения анти-MICA антител и разработки диагностической тест-системы для оценки сывороточного уровня молекул MICA у онкологических больных.Итогом данного исследования явилась разработка оригинального метода длительногокультивирования и активации лимфоцитов in vitro за счет низких доз интерлейкинов.
Полученные в работе данные позволяют рекомендовать предложенный метод активации лимфоцитовдля длительного культивирования МНК и их дальнейшего применения в схемах сопроводительной АИТ у онкологических больных.Определены критерии отбора пациентов для АИТ, а также выявлены параметры, которыемогут свидетельствовать о благоприятном или неблагоприятном исходе основного заболевания.Разработан и апробирован в клинической практике способ лечения онкологическихбольных, основанный на введении активированных цитотоксических лимфоцитов и клеточногосупернатанта.
За счет использования данного способа персонифицированной АИТ в схемах лечения онкологических больных был усовершенствован и оптимизирован метод усиления противоопухолевого иммунитета, который у части больных привел к стабилизации процесса и регрессу злокачественных образований.7Основные положения, выносимые на защиту:1.Дисбаланс показателей иммунитета у онкологических больных происходит за счет изменения количества Treg, NKT-, NK-клеток и CD25+лимфоцитов, а также уровня экспрессии маркёров активации лимфоцитов в сочетании с повышением в сыворотке крови концентрации молекул MICA, что может рассматриваться как длительная иммуносупрессияи являться неблагоприятным фактором прогноза у онкологических больных.2.Совместное использование двух цитокинов IL-2 и IL-15 в низких концентрациях придлительном культивировании лимфоцитов является эффективным и позволяет увеличитьжизнеспособность, пролиферативную и противоопухолевую активность лимфоцитов.3.Адоптивная иммунотерапия активированными in vitro лимфоцитами является высокотехнологичным, оригинальным и безопасным методом клеточной иммунотерапии, который при длительном применении у определённой части онкологических больных позволяет добиться контроля над ростом опухоли.4.Оценка исходного дисбаланса показателей иммунитета у больного (содержание Treg исывороточных молекул MICA, экспрессия CD25, HLA-DR, CD38, CD69, NKG2D и CD95на лимфоцитах) и регулярное его мониторирование позволяет выявить несостоятельность противоопухолевого иммунного ответа и является дополнительным критерием воценке эффективности адоптивной иммунотерапии.Степень достоверности и апробация результатов диссертационной работыНаучные положения, описанные данные, выводы и рекомендации, сформулированные вработе, базируются на достаточном клиническом материале.
Дизайн исследования включал лабораторные методы анализа, разработку метода клеточной терапии, клиническую оценку пациентов, экспериментальные и современные методы исследования. Полученные данные были обработаны методами вариационной статистики с использованием параметрических и непараметрических методов с помощью программ Microsoft Excel 2003, Statsoft Statistica 6.0(StatSoft, USA) и пакета статистических программ SPSS® Statistics Subscription (IBM, USA).Диссертационная работа являлась составной частью НИР Центра на 2007-2009 гг.
«Изучение противоопухолевого иммунного ответа, процессов активации и ингибирования NK(T)клеток при взаимодействии с поверхностной и растворимой формой опухоле-ассоциированноймолекулы MICA, как нового маркера злокачественного роста» в рамках госзадания (№ гос. регистрации 01200501319) подтемой №7 «Изучение опухолеассоциированных молекул MICA/B вкачестве маркёров для диагностики и биотерапии онкологических заболеваний» на 2011-2013гг.и НИР «Разработка методов иммунотерапии, позволяющих повысить эффективность леченияонкологических больных» на 2012-2016гг. в рамках государственного задания «Изучение меха8низмов физической, химической и биологической модификации радиационных эффектов» (№гос.
регистрации 01201262734). По заявленной теме выполнена совместная работа по грантуРФФИ № 08-04-01772-а «Распознавание опухолевых клеток и регуляция цитолитической активности натуральных киллеров. Роль стресс-индуцируемой молекулы MICA» 2008-10 гг. и государственному контракту № 16.740.11.0200 «Механизмы и регуляция экспрессии белка MICA,лиганда активирующего рецептора цитотоксических лимфоцитов человека, в норме и при опухолеобразовании» в рамках ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационнойРоссии».
Выполняется работа по гранту РФФИ № 16-04-01867 «Роль аллельных групп белкаMICA, лиганда рецептора NKG2D, в регуляции противоопухолевой активности клеточного иммунитета» на 2016-18 гг.Материалы диссертации доложены на международных и всероссийских научныхконференциях, научных школах, сессиях и конгрессах: FEBS advanced course: “Chemistrymeets biology” (Greece, Island of Spetses, 2005); IV международной научно-практическойконференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине» (Санкт-Петербург, 2012 г.); заседании научно-технического совета департамента инновационной политики и науки Минздрава России (Москва, 2012); научнойсессии НИЯУ МИФИ-2013 (Москва, 2013 г.); междисциплинарной конференции «Патологияклетки» (Москва, 2013 г.); всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Противоопухолевая терапия: от эксперимента к клинике» (Москва, 2014 г.);школе-семинаре с международным участием «Клеточные и генные технологии: от эксперимента к практике» (Светлогорск, Калининградская область, 2014 г.); конгрессе Российскойассоциации радиологов (Москва, 2014 г.); VI всероссийской школе по клинической иммунологии «Иммунология для врачей» (Пушкинские Горы, Псковская область, 2015 г.); XIX Российском онкологическом конгрессе (Москва, 2015 г.); XII, XIII, XIV всероссийской научнопрактической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевыепрепараты» (Москва, 2015 г., 2016 г., 2017 г.); I-ом Калининградском научном иммунологическом форуме – 2016, (Калининград, 2016 г.); The I and II International Symposium “Physics,Engineering and Technologies for Bio-Medicine” (Moscow, 2016, 2017); III Петербургском международном онкологическом форуме «Белые ночи 2017» (Санкт-Петербург, 2017 г.); IIIнациональном конгрессе по регенеративной медицине (Москва, 2017 г.).Результаты работы апробированы на совместной конференции МРНЦ им.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
