Н.А. Юрина, А.И. Радостина - Гистология (1135282), страница 55
Текст из файла (страница 55)
Вместо стеклянных линз в электронном микроскопе используются электромагнитные линзы (электромагнитные катушки). Напряженность магнитного полн регулируют, изменяя силу тока в катушках. Под действием электромагнитных полей расширяется или суживается поток электронов.
Пройдя через отверстие в аноде, поток электронов конденсируется и направляется на объект конденсорной электромагнитной линзой (в световом микроскопе эту роль выполняет конденсор). При прохождении пучка электронов через объект электроны, попавшие на электронно-плотные участки объекта, рассеиваются и не попадают в маленькое отверстие — апертуру, расположенное над линзой объектива. Назначение апертуры — увеличить контраст изображения. Роль объектива в электронном микроскопе выполняет электромагнитная линза объектива, формирующая увеличенное первичное изображение объекта. Конечное увеличенное изображение объекта формирует проекционная линза, соответствующая окуляру светового микроскопа.
Конечное изображение проецируется на экран, покрытый люминофором. Поток электронов, взаимодействуя с люминофором, вызывает его свечение в видимой части спектра. Вместо светящегося экрана изображение может проецироваться на фотопластинку (для получения электронных микрофотографий). При работе на электронном микроскопе ультратонкие срезы, смонтированные на специальных сеточках, помещают в особый держатель, который вставляют в микроскоп. Прежде чем включить катод, получить электронный пучок и начать изучение объекта, необходимо создать высокий вакуум.
Увеличение можно варьировать, изменяя электрический ток в проекционной линзе. Фокусировку изображения производят, изменяя электрический ток в линзе объектива и наблюдая за изображением на флюоресцирующем экране. Микроскоп снабжен приспособлениями, позволяющими перемещать объект. Для получения пространственного (трехмерного) изображения 244 объекта используются р а с т р о в ы е (сканирующие) электронные микроскопы. Они как бы «ощупывакгг» электронным пучком (электронным микрозондом), скользящим по поверхности объекта, отделы~ые точки поверхности. Регистрируются не электроны, проходящие сквозь объект, как в просвечивающем микроскопе, а электроны, выбитые из атомов образца потоком электронов микро- зонда.
Изображение выводится на телевизионный экран. Глава 24 НЕКОТОРЫЕ МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ МИКРОСТРУКТУР При исследовании гистологических объектов методами световой н электронной микроскопии для объективной оценки полученных результатов используются количественные показатели. Основными количественными показателями микроструктурявляютсяморфометрические (число структур, их размеры и форма) и денситометрнческие — определение концентрации (оптической плотности) химических веществ в микроструктурах. В настоящее время все большее распространение получают автоматизированные системы обработки изображений, которые не только резко повышают производительность труда исследователя, но и позволяют получить новую информацию, которую невозможно получить другими методами. Однако использование автоматизированных систем обработки изображений требует специального оборудования и обученного персонала, а ручная морфометрия доступна каждому.
Морфометрические методы позволяют определить с помощью специальных сеток (Е. Вейбеля, А. Глаголева, С. Б. Стефанова) число структур, их площади, диаметры и т. д. Простейший метод определения диаметров структур или толщины каких-то слоев— использование окулярной измерительной линейки. Окуляры с окулярной измерительной линейкой прилагаются к некоторым типам исследовательских микроскопов. Для определения абсолютных площадей структур на микрофотографиях, полученных с помощью светового или электронного микроскопа или на фотопластинках, можно воспользоваться, в частности, сеткой Вейбеля.
Эта сетка состоит из линий постоянной длины, расположенных на равном расстоянии друг от друга таким образом, что получается сетка из равносторонних треугольников (рис. 84). При таком расположении каждая тестовая точка равнозначна Ъ~3 абсолютной величине площади (а): а = †. 22, где х — длина 2 тестовой линии.
Тестовыми точками являются концы тестовых линий. Сетку накладывают на электронную микрофотографию (желательно 3 раза и потом берут средний результат) и подсчитывают число тестовых точек, приходящихся на интересующую струк- 245 Рис. 84. Морфометрнчсския сетки Вейбеля, наложенная ни электронную мнкрофото- грифию микрофиги. и — ллащодь, соогистстиующия одной тссгоиой точке; Х вЂ” длина тестовой линни. туру, например на митохондрии. Предположим, что а=7 мм. Тогда . 1~З каждая тестовая точка равнозначна площади, равной — х 2 х7э=42,43 ммл.
Допустим, что в данной клетке на митохондрии приходится 20 тестовых точек. В этом случае площадь всех митохондрий клетки на фотографии будет равна 42,43 20=848,6 ммт. Чтобы получить истинные размеры структуры в микрометрах, нужно умножить полученный результат на 10о (число мкмэ в 1 ммз) и разделить на квадрат увеличения, учитывая и увеличение при печатании. Если клетка была снята при увеличении микроскопа в 10 000 и при печатании увеличена еще в 2 раза; нужно разделить 848,6 ° 104 полученный результат на 20 000' или на 400 10е: 400 104 =2,122 мкмт. Следовательно, суммарная площадь митохондрий в нашей условной клетке равна 2,122 мкмт. В числителе и в знаменателе 104 взаимно уничтожаются, следовательно, мы в данном случае делим просто на 400. Таким же способом можно определить площадь ядра, цитоплазмы, любой органеллы и вообще любой структуры. Стереометрические исследования можно проводить с помощью 246 любой сетки, в которой тестовые точки лежат на равном расстоя- Р, нии друг от друга по формуле У .= — ' 100, где Ч .
— доля объ- $ ема, который занимает изучаемый компонент структуры от общего объема в процентах; Р,. — число тестовых точек, приходящихся на данный компонент; Р, — общее число тестовых точек, приходя- щихся на всю структуру. Например, в нашей условной клетке на до- лю митохондрий приходилось 20 тестовых точек. Предположим, что на всю цитоплазму клетки имелось 120 текстовых точек. Извест- но, что отношение объемов структур равно отношению приходя- щихся на этн структуры тестовых точек.
Следовательно, митохонд- 20 рии занимают в данной клетке †. 100=16,667% объема цито- 120 плазмы. Ми к рос п е кт рофото метр ия позволяет по оптической плотности установить количество определенных химических компонентов структуры. Применение етого метода требует специальной подготовки и наличия специального прибора — микроспектрофотометра. Рекомендуемая литература Г и с т о л о г и я/Под рвд. Ю. И.
Афанасьева, Н. А. Юриной — Мс Медицина, 1989.— 679 с. Меркулов Г. А Курс патогистологичвской техники. — Лх Медицина, 1969.— 406 с. 16еувг 6.) Гайвр Г. Электронная гистохимия. — Мс Мир, 1974 (перевод с немецкого). — 448 с. (Ревгве Е) 17нрс Э. Гистохимия: Пер. с англ. — Мс Иэд-во иностр. лиг. 1962 — 293 с.
гйогпе)в ВЭ Рсмвйс Б. Микроскопическая техника: Пер. с нем. — М,: Иэд-во иностр. лиг., 1963, — 718 с. 114геа11Геу В.) уняли Б. Электронная микроскопия для начинающих". Пер. с англ.— Мс Мир. 1976. — 319 с. ПРЕДМЕТНЫЙ УКАЗАТЕЛЬ Дситин 72, 150 Деятгшобимсты 151 Дсрма 175, 177 Десмосома 90 Диктиосома 19 Дискоциты 48 Днффсрон 37 ДИК 27 Долька печеиочная 162 Дофамин 61, 62 Иммуноглобулин 136 Иммрищит ! 36 Инсулин 167 Иитеро)мцепторы 100 волокон Пур- Агумнулоцнты 49 Аденогипсфиз 140 Актнн 84 Анщтомозы вдтсриовснознме 124 Аиафазз 30 Ацарощн 146 Аор 122 Аргсрии тшм мышечною 1:2 — — смешанною (мьпиечно-эластического) 122 — — эластического 122 Аутолнзосомы 20 Ациноцит 166 Ацииус леючный 171 — панкреатическлй 166 Базофилы 49 Балки печеночные 162 Бласгы 52 Бляшю) моторные 88, 99 Бр 171 Бровзиолы 171 Бугорок яйцеишмый 195 Булава обонятельная 115 Бюксы 201 Вал лсйкоцнтарный 68 Вены типа волокнистого (бсзмышечиого) 123 — — мышечною 123 Веретено(а) дсленгш 29 — мьллечные 88 — нервно-мышечные !00 — неренос7момввьные 102 В .р срчс 8242 — мнкрометрический 209, 242 Волокна 57, 63 — кол!пописаем 63 — мышечные 86 — нервные 94 — преколлагсиовьм 63 — ретикулярные 63 — собственно коллашновые 63 — эластические 63 Волосы!78 Гастрнн 156 Гемокапилляры 123, 135 Гемопоэз52 — эмбриональный 52 — посззмбрианальньгй 52 Гепарин 61, 62 Гепатоцигы 162 Гетсрокроматнн 27 Гиаломер 51 Гяалогшаэма 10, 16 Гидрокортнзои 145 Гипоталамус 140 Гнпофиз 140 Гистамин 61 Гистогенез 37 Г ду ц ылг,!92,194 Гликокаяикс 13 Глиоцнты 93, 142 Гранулы 49 — азурофвльные (неспецифические) 49, 50 — спсцифнческне 49 Грануломер 51 Граиулопиты 49 Гранулоцитопоэз 52 Гребешки ампуларные 116, 118 Железа(ы) 42 — ачьвсолярис-трубчатые 44 — альвсолярные 44 — зпокринные 44 — бульбоуретрэльньм 192 — голокрииные 44 — мсрокринные 44 — молочные 198 — околощлтовидные 143 — истовые 178 — прадстапщьная 192 — простьм 44 — сальные 179 — сложные 44 — слюнгмм 152 — трубчатые 44 Каемка щеточная 41, 182 Кзльцитония 73, 143 Каналы пслукружные 115 Капсула кзубочка 182 — зрягцевых клеток 71 Кардиомиоцнты про водзщве кинзе 90 — — умов 90 — секрсториые 90 — сократитсльные 89 К р ц выййИ Кератииоцяты 175 Ксратопшлни 177 Квиоцилия 117 Клетки адвентицнальньм 124 — батальные 41 — бокэловидиые 41, 159 — юднтели ритма 125 — асгавочные 41 — гладкомышсчные 85 — лендрнтиые 81, 137 — дсцидуальные 195 — иммунокомпетснтвые 80 — интсрдигитирующне 137 — интерспщиальные 185, 194 — крови сгволовые 52, 131 — Лангергвнса 177 — Лейдига 192 — мпозпвтглнальные 86, 153, 179 — нейроэндакрвнные 146 — нервные 92 — нейраглпв 92 — нейроаенсорные 111 — опорные 115 — поддержпвалвцве 115 — полнпатентные 37 — палустаоловыс 37, 52 — пршматвчшкнс с рссначкамн 41 — аекреторные 153 — стаоловые 37 — столбы 115 — светлые 179 — сперматогенные!89, 191 — тсвоглвальные 99 — темные 179 — тучные 61 — унапотентные 37 — эпвтелв» эндакрваные 159 — эффсктарные 79, 81 — юкагааюжулзрные 185 — юкстагломерулзрные 185 Клубочек капилляров 182 Кажа 175 Колбочка 112, 113 Коллагсн 63 Комплекс Гол ьджн 19 — поры оболочка ядерной 26 Контакты межклеточные И вЂ” шелевш!ные 90 Кортизон 145 Картнкастерон 145 Крнасшт 2М Кранты 159 Крнсталлнзаторы ЗЛ Кровь 46, 47 Лабнрннт шстпбулврный 1! 5 — перепончатый 115 — улатковьб! 115 Ла у 72 Лейкоциты 49 Лнбернлы 140 Лвзасомы З« Лвмфа 46, 51 Лнмфжввы 82 Лнмфацаты З«, 80 Лнпоцвты первсвнусондальные 165 Луковица воюклназ 178 Макрпвнв 93 Макрофюп 58, 79, 81 Макроцлты 48 Марквравка стекол 215 Мсзаксов 94 Мсзензнма 45 Мезателнй 127, 150 Мсйоз 30 Мелюккамы 177 Меланоцвты 177 Мелатанпн 142 Мембрана(ы) базальназ 124 — матазонлрвн внутревнаа 21 — — наружназ 21 — отолатоваа 117 — пасгсннаптнчсскаа 98 — прссннаптнческав 98 — эластические огсопчатые 122 — элемсптарнал бнолагпческаа 11 Мешочек альвеаллрный! 72 — сфернческвй 115 — эллиптический 115 Мрор к!4 Мнкрапгна 93 Мнкроскоп 240 Микроскопия электронна» 244 Микро спектрофстомегрля 247 Мнкротомы ЗУ« Мвкротрубочкн 23 Мнкрофвбрнллы 25 Мпкрофнламемпа 25 Мвкроцнты 48 Мпнервлокартпковдм 145 Мпознн 84 Миокард !Ю Мяасателлвтоцлт 88 Мнофнбрнллы 84 Мнафпламелты 85 Маоцнты гладкве 85 — сердечные щюводзщпе 125 — — сократнтсльные !М Матов 28 Мнтохондрнв 21 Мозг головной 107 — костный 130 — спинной 107 Мозвсечок 107 Моноцаты 51 Марфометрнз автоматазврошннал 9 — ручная 9 Мукоцаты 156 Надкостница 74 Надпочечнюг 144 Надкрюцншп 70 Нейрапюафнз 140 Нейраглнз 93 Нелролсммацвт 94 Нейроны 92 — бнполврные 92 — мультапаларные 92 — пнрамидныс 109 — псевдауннпазшрные зс, 106 — рсцглторные 92 — секретарные 93 — уннполарные 92 — Фоторецептарные 112 — эффекюрные 93 Нейрофнбрнллы 93 Н йрофн мен 93 Недр пшы 92 Нейтрофпль! 49 Нексуаы 90 Н,фр, 182 корковые 184 — юкстамедулларные 183 Ногт» 178 Ножн мнкротомные 211 Нормоцнты 48 Нуклеосома 27 Оболочка белачнаа семенника 189 — мышечная матки 195, 196 — — пнщеварвтельного тракта 150 — наружнш пищевода 155 260 серознвя матки 195 — пшцеварительиого тракта 150 сстчата» 111 слизистая матки 195 — пшцеаарительного тракта 149 озсудистю 111 ядерная 25 Объектодерхытсль З)9 Объекты исследоввниа гвстологии б Овогснез 193 Оаоцит 193 Овуляция 195 Окостеневие перихондральное 75 — зндохоидральпое 75 Окснтоцин 141, 198 Озвподещроциты 94 Органеллы мембранные 11, 18 — немембраяные П, 23 О ою под 178 — яодслюнстав 150, 156, 159, 160 Осгеогеиез непрямой 75 — прямой 75 Остеобласты 72 Осгеоклвсты 72 Остеоциты 72 Островки поджелудочной железы 167 Отолнты Н7 Пвнкреознмин 159 Пр р а195,197 Паратгормон 73 Паратирин 144 Пешжн 156 Периневрнй 106 Перициты 124 Перехваты узловые 95 Пер й 88 Пероксисомы 21 Пииеюоцвты 142 Пииосомы 13 Пиноцитоз 13 Питунциты 141 Пвазма 48 Плазмолеммв 11, 13, 48 Плазмоциты 79, 81 Пластинка(и) костнав 74 — мпозпвкардиальна» 89 — мьппечвэя 149, 156, 158, 160 — псченочные 162 — собственная сммисгой оболочки 149, 156 — — — матки 195 Падоциты 182 Препарат гистологический 7 Прехоидроблвсты 69 Приготовление красителей 216 — пленок коллоднеаых 239 — срезов гнсгопогичесхю 209 — — замороженных 210 — — парэфиновых 213 — — ультратоякнг.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
