Д.Г. Кнорре, С.Д. Мызина - Биологическая химия (1128707), страница 110
Текст из файла (страница 110)
Схема синтеза представлена на рис. 137. Числа рядом со стрелками указывают шифр фермента, катзлизирующего соответствующую стадию. 4.5. Схема взаимопревращений одноуглеродных производных теграгидрофолата имеет вид ТНР— — — в Н 5, Н10 "СНт-ТНР— — 5 Н5-СН3-ТНР сн,— сн — соо но 1 татрепеароптвр и, О Я ттидроптернн, Н!О он Аснорба,01 Даптдраасморбат, Н!О г т '2 1 !а.17.1 но мн,' он 41! 28! с02 ° $ сн! сн ин ! т 1 но оос — сн — !сн Н-соо + оос-сн-сн — дн + оос-сн-сн-сн, 1 1, 1 ин,' ин,' ин,' сн, Ыцмста н С а-амимоаднпмнат Гич !.
2 -оос — сн- 1снН,— с ,о 1, 'мн-сн ~5!й„" мн,' ,с...сн, о" и)н —,' сн — сн ч | мн 5 оос — сн — 1сн 1,— с чсн — нс" ч сн, ин' о с — и, о~ сн соо иаопанициллнн и сн-сн,-ин, он но он нарадрвмалин 5 — Асбтма! 21,1 2а1 5 Авансу '~т ! Г г~ СН вЂ” Си!ИНСК! 1 1 но ~ ОН ! он 1 1 АДРЕНАЛИН 1 1 1 Рис. 135. К задаче 4.1 5.1. Если бы репликация протекала по дисперсионному механизму, то после первого удвоения результат соответствовал бы наблюдаемому и прн полуконсерватнвном механиз-, ме, т.е. ДНК занимала бы промежуточное положение между <тяжелой> и Слегкоа фрак- ! циямн.
Однако при втором удвоении все молекулы ДНК опять будут иметь одинаковую, 442 — — — — — — — — -с ИН2 5 сн-нс ~,гсн с, с — мч,~ сн, о" сн 1 1 1 сооб-ам»нопамнцмллан аал полота Рнс 116 )т мз! и 4 1 плотность и занимать промежуточное положение между полосой, наблюдаемой после первого удвоения, и полосой цлегкойр ДНК.
5.2. Последовательность мРНК: 5 ' — ССППСССПП1)АПССПАССПААС. Последовательность аминокислот, считывающаяся с нннциирующего кодона: Мес — Ча! — С!у — Еув. Последовательность аминокислот, оканчивающаяся кодоном-термннатором: С1у — Тгр — Ча1 — Туг — С)у — Агд. Этот фрагмент ДНК может участвовать в кодировании аминокислотных последовательностей для двух белков со сдвигом рамки считывания. 5.3. Так как синтез белка оборвался после А1а, то зто, очевидно, вызвано тем, что в мутантной ДНК вслед за кодоном А!а вместо колона Тгр !ПСС) возник кодон-терминатор (П1АС), Вероятно, прн репликации напротив профлавина, которой не комплементарсн ни одному из нуклеотидов, полнмераза случайным образом встроила аденознн между Т и С и возник кодон-терминатор. 5.4. 5 '-САПСАААСПБ — 3 '.
5.5. Так как в системе не хватает фактора транслокации С, то после синтеза первого сн, н,с НСНЕ 1 сн-со-соо з-..— но-сн,-с-со-соо н,с' ЕО '1 11 < сн, Яоя Н НОСН,-С<Си,|,-СН-СОО он о *аФ я«Ф о — з-осн,-с<си,ь-сн-соннсн,сн,соо- Р54-2=<— о он носи,— с<си,Ь вЂ” сн- сони — сн,сн,соо 1 он о-з-осн,— с<си,в-сн-соинсн,сн,— соин — сн — соо о он сн,— зн гя,з 61 се, о — з-оси, — с<си,Ь вЂ” сн — соинсн,сн,соинсн,сн,зн о он Г«ЗЗ «Ь 1 с«я н«Ф а.з.зй «ЯФ .ЯФ Я«Ф 1 НФ 111 А«д Юд мн ! -."ось Н«М + МН, СН н НМ196 / ~М-Н--О=С .М АР ~~~/ Ргг~ Н вЂ” ЕУ" нм ов,— о о — о 'с"" ! н,м +,мн, Азр166 'с" мн г А«9 <9< Риг <38.
<««з«зя |е 6.! синтезировать к этой последовательности олигонуклеотид, в котор в й узн третьем положении будет стоять Н, С или С либо в шестом положении — А, Б или С, и далее провести сайт-специфичный мутагенеэ, предварительно переклонировав этот ген в.
фаге М13. 6.7. Так как необ о и х д мо ввести липкие концы в фрагмент ДНК, который вставляется по сайту узнавания эндонуклеазы рестрикции Есор!, то первым аминокислотным остатком должен быть Аяп,ко он АА ' .. ( д ).. дон второго аминокислотнего остатка должен начинаться на <<, т.е. эго могут быть Р«е, Ееп, Нег, Туг, Суя, Тгр. И лишь третий аминокислотный остаток может быть любым. АЗФ-О- З-Π— З- Π— СН, — С<Си,|, — СН вЂ” СОННСН,СН СОН НСН,СН,ЗН -о -о он — — -1 < ° Я«Ф З 1.1.11 а "Д.> ', о-н,с~ о |О Р-О ! о о он 1 — — — — — — — — -1 ! о з-о- 1 1 О= З < н о — сн — с<си,1,— сн — соннсн сн — соннсн сн зн 1 он 1 «Ф 1 *" риг 1<7 Ь ° 44 дипептида Ме< — Р<«е трансляция прекратится, причем этот пептид будет ковалентно связан с фенилаланиновой тРНК.
5.6. Сайт узнавания эндонуклеазы рестрикции Ваза Н1 имеет последовательность ССАТСС, которая кедируег дипептид 61у — Бег. Для того чтобы нарушить сайт узнавания, достаточно заменить один из иуклеотидов. Учитывая, что С1у кодируется четырьмя кодо- нами СОН, а Бег — кодоном ОСИ, где Н вЂ” любой из четырех нуклеотидов, то достаточно 444 Глава б 6.1.
См. риг. 138. 6.2. Г ипотетическая модель р бота| активного центра триозофосфати еразь1, д лена на схеме (С!" Ар Су, н ): х — нр уз, <з ); Х вЂ” положительно заряженный аминокислотный остаток <Еуз, А ). 6. гб . .3 Зависимость о — з представлена в координатах я/о — з на рис. 139. Из графика получены значения Х = 2 10 з М, евах = 2,2 10 з М/мин. М 6.4. Зависимость 1/е — 1/я представлена на рис. !40. Ингибирование конкурентное; А' = ! 10 з М; А'г = 6,55.10 4 М. М 6.5- и = АР/<<< = )вах 1«яе — Р)/Жн + ее): ее = 11«АР/«А<) езз увезя/1«А' + ее).
М 6.6. Если инг и нгибитор является аналогом первого субстрата Я„то уравнение скорости реакции имеет вид У: н О-н:у \я« СН Сжо Н-Х СН|ОРОз 2' х н о н — х СН ! н-с-он:у 1 СН|ОРО 2 !сг Щс 1+ Ь(+(1+ — ) с Хс Хг ' 41 Зг Глана 8 Щс 1+ (1+ — + )— Хг 41 Х~ 42 Глава 9 10 и 5,55 5,0 5,0 4,5 4,0 1 2 5 сдс (мсс'мл! 4,0 Рис. 142. К задаче 7.7 Рнг. !4!. К' ыгл н 7.5 0 1,0 2,0 г' 10с,(моль/л!' 5 1О л 1Оь, мольсл Риг.. 140. К .мгь ~ 6 4 1'нс.
139. К задаче 6.3 По отношению к обоим субстратам наблюдается конкурентный тип ингибирования. В то 'случае, когда ингибитор является аналогом второго субстрата Яг, выражение для скорост реакции следующее: По отношению к первому субстрату неконкурентный тип ингибирования, ко второму субстрату — конкурентный, Таким образом, по типу ингибирования аналогом субстрата можно определить порядок связывания субстратов с ферментом. 6.7. рН 7,58; рН 6,88 — 8,27.
7.1. Первый пик соответствует имидазолиду динуклеотида, второй — исходному динуклеотиду, третий — дизамещенному пирофосфату. Выход основного продукта реакции 60%. 7.2. 4 = 118,4 10гм сом 1. 7.3. Связалось 2,4 о.е. олигонуклеотида; емкость сорбента 165 о.е./г. 7.4.
158 Ки/ммоль. 7.5.Калибровочная кривая представлена на рис. 141. Количество миоглобина в образцах: 22,4 мг/мл, 74,1 мг/мл, 870 мг/мл. 7.6. В первом случае расщепление осуществлялн гидролитическим ферментом химотрипсином, во втором случае использовали химическое расщепление бромцнаном по остаткам метионина. Белок состоит из 135 аминокислотных остатков и имеет последовательность МААЬКРЬЧКРК(ЧКККИКР1КНЦЗНКЧЧК(ККХИКРКС19ХКЧКККРКСЦЬЬМРХ1СЧСЯХККИНМЬККСЕКК РЬЧНХЧКЕЬЕЧЬЬМСХКЯЧСАЕ1АНХЧЕВКХККА1ЧЕКААЦЬА1КЧЧХРХАК!.КЯЕЕХЕ. При расщеплении трипсином образуются 26 пептидов и 10 свободных аминокислот.
7.7. Калибровочная кривая представлена на рсис. 142. По ней определяем молекулярную массу: первая субъединнца 38 кДа, вторая субъеднннца 95,5 кДа. Фермент состоит из четырех субъединнц. двух первых и двух вторых. 7.8. Молекулярная масса 33,7 кДа: ///о = 1,69. 8.1. В равновесии концентрация дигидрокснацетонфосфата в 21,8 раза превышает концентрацию глицеральдегид-з-фос41ата. 8.2. 1:0,0 19. 8.3.
Цитохром с и кофермент Ц были взяты в стехиометрическом соотношении, т.е. 211. АТФ = 5,5 ° 10 4, АДФ = 4,5 ° 10 4, 1АДФ]/ЬАТФ) = 9:11. 8.4. 36,2%, 9.1. Ва синтез лейципа затрачивается 58 молекул АТФ, а при сгорании лейцина образуется 49 молекул АТФ 9.2. В результате полной деструкции триптофана образуется 44 молекулы АТФ. 9.3. 78 Ам 9гЬ 76 Им 9.5. 20 молекул АТФ. Выигрыш.
9.6. а) Радиоактивная метка не обнаружится. б) Радиоактивная метка обнаружится в 8 углеродных атомах протопорфирина: в пиррольных кольцах в а-положенни к азоту и в мегиленовых мостиках, соединяющих пиррольные кольца. Продолжение табл. ПРИЛОЖЕНИЕ ТАБЛИЦА ФЕРМЕНТОВ Катализируемая реакция Рис. 112, р-ция (2) (Ч!П.17), (ЧП!.!8) (1Х 53) 1. ОКСИДОРЕДУКТАЗЫ 1.1. Действующие на СН.ОН группу доноров 1.1.1. С 77Ав' или УА91м в качестве ахцептора Рис. 117, р-ция (46) Рис, 118, рция (7) (1Х.45) (1Ч.1) (содержит Хпт') Рис 101 р-ция (3) (!Х.17) Рис. 116, р-ция (9) Рис 114, р-ция (4) (ЧП1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
