Ю.А. Овчинников - Биоорганическая химия (1128694), страница 23
Текст из файла (страница 23)
м звони. На лучшие результаты достигаются при использовании С нтвэ ес а од фчьвц б г ое .е т до к Рл Ф л (1т62) тщ (1тв() л а' к — нн .сн. ( Г р,ОСС1 ( сн- 02 сн — ссю- сн рг ! к сн— -сн -ооон 2,Г( г р (С-«Ь)Н П Стьеоам СН,С(г х. ннлн л«р, ню сгзсоон) р, д а 1 1 ын — сн— —.сн- к — Снз-.бйй) е ( х-мн-сн спо — сн -'~уг а н. -гн-спп сы, Рй ) а ~х нн — сн--ооо ( — сн — соо -сн,— рб. а 1 Вос-, Врос- и Рюю з» ютиых груг п, матово» имм р ин х нгн лр дов д »налоге сил»арба» и диого. успешное праведен е синтею на те рло гюя мере требует приме е ия высо по»пшенных реве т в раствор лелей а всех стадиях пр песш Первы» тм:рдофази г си тез шрмо а брадикинина был провед Р Ыерр ф ло с обнг и аыхопом 70'б В акестве нос и:л» »вибо ее шг р ко споль уст м ропор сз й лор ез л рованньги сопол мер ст рол» дивили б нзол».
«ор г о набухающ й в орган смс их ра«тяор телах и об.юдаюший х м ксскои м ха ой про о т ю. Нагруз а оол мера ра туп(ими пептндиыми и пям . а« пра ило, не елн а и сос валяет В,( - В,З ммоля пептил» на ( г пол ера. П лы та реа ции ацилироюн я оцеи влетел а основан» реа ции с н нщдр но и и флу рес амином (сы. 3( и ЗИ ли фи»и о х мизес нмн методами С целью повышен я к слотоус ойк вост я орных групп роно, свизыюющнх епт д с пплимером, в настоящее время при- еняюгся о м р е с юлы ф:ни ацета «до ег л ы груп па (Р щ.по меры). » — С вЂ” Π— СН СН вЂ” СО- НН- -СН ~З О * " " лг пу« н Отще лен е гщптипа пг смгщы провед тся с помоги ю ид«о о НР рисутствии а изола, раствора НР в пир д н, тр фтор гпин- су. ьф о, реакг а Плесси ((Ср СОО) наср ОООН(, а а юо гвзк ., сшлг 147 С нез гне«кан од ф иац» 6 гго е ~до М вЂ” НΠ— Сыгсы,!и-ОСΠ— Мы Ыь ММ вЂ” СΠ— (,— ОСГВСН Оы СЫ.
С! Жцггкпфазный способ синтеза лепт дов использ!е ся в некпторых типах автоматических сияю»атаров лля получения относительно небольших пептилных молекул (в слрчве вьюокомолекулнрных пептщюв си пез нередко ослпгкн»ется из-эа итменени раствор»- мост пол мера). Эа»ерша» обсумл ние методов синтеза лепт дп» на полиг ерном носителе, отметим возрастающую (юль по. имер ыл реагентов. В »отнести, чисто применяются полимерные ак гивмрованные эфи- НВг(СР,СООН н други» реа, иногда римеияетс» аммоижиз, гидразмнолиз, омылеиие г.
п Автомат»чаек й теердпфазный синг»э пептидов осуществляете» на специальных прибора», называемых инт заторам (рнс. 78]. В послециие годы создан «олоночный шриант таердофазнпго с иге»в пептидов. В качеств матринм аиа але использовалась шглярн»я пшшамидная смола. Этот г«елатинообразныи полимер хорошо проницаем и сольштируетс» мног и растворителями, включая воду и димет лформвмид.
Мяг.ие полимерм та«иго зива а олоно но варианте имели неудо»легиоритель ые фнзи о-хиеск е и еханические свой с ва. Р. (Неппард и сотр. предло«кили и.польтомпь м т «й макроп >рис!ма н органически» ипситель— с л кагель, в порах которого заполимеризован пол дн ет лакрнлам дный ~тль Этот носитель, сач тающий в себе свойств» гкесзкой ма Пыцы и хорошо наб1«ающега ор аничес ого сели, нашел успеш нпе применение в колоночном твердофазном с нтеэе. На его основе создан синтезатор кало»очно о типа жид«феэные сносов с »тета лепт»лов предгсматрн»ает мспольэо»ание в качеств» носителей раст»прямых пол еров (М. М Н! ми ин,!965! Одюмиз иедостат«о»тнердофазногос нгез» »власте» вменен е ст пенн набухании пал мера по мере !юс ц й и .
Ро. ет при»оп т к периодичесиомт меси ров»пню конневых НН«-групп рвет(щеи пептидной цеп». Э о, » свою очередь вызывает неполно протекание реакций онденсации н» тон ил иной ст»лии, и в резхльтате абра»уюте» логкные пептиды, т. с. п птицы с пропуском отдельных аминокислот. ных остатков. Разделение смеси пептидов иа «онечном этапе син теза в этом слрчае оказывается затруднител мзм.
Пр гкид офиэном способе пептидио!'о синтеза нв ппл» ер кима с некоторые осло нен и, выем »смыв гетерогенное. ью среды, В качестве рвстворимог э подимера испальзрется полис сироп (молекулярная масса о оло 200 0001, в избыток реа сигов удаляется осв аением полим ра эоргиничесиоп раствора с последующим фильтрованием. Лучшие р зультгпы получены при пр менен в «ачестве носителей ппл этиленгликплей с молекул»рной ассой 2000 — 20 000 и бло«-сопел»мероэ полиэт ленгликоля с диизоцианатами (Э.
Вай р, 197В!. ры зкшишениык аминокислот типа юнробмнилоаых, Н- идро«сисукцминмндных, !.гндрокс бенэотриазоловых (й Патчорни, т.й аш. ! —.сн — сн <, Ф н — осо — снй — нн — х "шм ! — сн Сн <е О со — снй — нн — х Принципы метода излол сны на рисунке 79. анино омпонент «ропус аегс» через колонки с полимерными актмаированным эфреми различных эашищенных анинокнслот в заданной последпвателыюсти.
определяемой 'труктурей сиитеэируемого пепт лз. бели в качестве носителя используется пплнмер иа основе полиатиленгликоля, получаются ратюримме полимерные активмроввнные эфиры (М. Муттер. <977!. Полимерные репшиты применякпс» н е синтезе никличес нк п пт дпв, побочная севкина ол гомеризадии, прс гекаюшан обычно вследствие межмолекуляриой конденсации, в з ик условияк не проискодит: вж ®фоки Ф н7йлфс сОьи й й й ! ! х — нн — сн — со — (- -нн — сн — со — ! мн сн . со..
о — ( уатт=;~', й й й О,ы 1 ! ! н.н †-со-< †-сн-со-<„ мн-сн-со-о-~~ й й й О,н ! ! нн — сн — со — < — нн — сн-со — <е — нн — сн-. со .ь но — ~~ тр-ф" 7т. Пп н е': . и е" Оштез полнвминпиислог. Как уже отме алесь <с. <27<, дл» синтеза полаем иокнслот лучше всего спальэоиать Н-карбо сиан- гъшриды.
Если последние являютс» дсстаточнп стабильными, лли ускорения реакции применяют инициа «ры (спирты, ам иы и др.), например. Сиез ческаз модификации белков пещ«до нм — -~ й и ) 1,к' нтн — сн — Сонм — Сн — СΠ— н й' й й' н,н — сн — со — н й' "1 1 й й и Фо. о~, 1 ! и * Е случае смеси двух Н-карбоксиащмдридов образуется сополнмер аминокислот.
Распр деление амин экислот в цец» при ятом оказываемянестат стическ м,вопред ляетсяприродойаминпкислот. Не основе тех же принципов могут быть получены полимеры, сосюяшме из повторяющихся корот нх пшщдовательиостеи аминокислот. Е частнпсти, при поликонденсацин с ппмощью рвтлмчных методов линейных дн-, три-, тетра- и пеивзпептмдов образуются сои геетствующне регулярныа полипептипы из Зц — 50 певторяю~цихся еди им й й' й' Н( — нН вЂ” СН вЂ” СΠ— НН вЂ” СН вЂ” СΠ— НН вЂ” СН вЂ” СΠ— ),ОН Ферменгатнвный синтез пептидов и белков.
С к жность и трудоемкость синтез» пептидов с помощью к мичы:ких методов насгоятельио побуждают искать орииципиальнп иные подходы к синтезу пептидно-белковмх веществ. Олины из та и» подходов является синюз пеп Пов с испо ьзоеаннем в а т катализаторов ферментов, Еще в (937 г. Рй Берпеанн.
Г. Френкель.дохнат Дж. Фрутон впервые сообщ ли о возможности обращения п)ютеол тической реакции е сторону образощния пептилнай связи. однако лишь недавно Емли проведены первые иссяелован я оо ферментати ному Фигезу пептидов. й и' й нн — ( НН ! ,й' нт 1 1 ООС вЂ” НН вЂ” СН-СΠ— и й од' о "ьо Установлено, что п)ютеолит ческие ферменпг — химщрипсин пацхам термплизин и лр. в специфических бубмрных растворах, чаще всего в водил-органических смесях, в принцип способны ката. лизироють пбразование и пгилных свяый мемду аминокислотами и пеп"гидами. Схеметич ски атэлизируемую бмрментами реакцию гмеролиза-аминол за могкно представить следунвцим обрезом: Беп«и »гиды я' л" г.
' ! — сΠ— и --см — сΠ— мм- .м — сООм т гьзч — см — сΠ—. В водно» среде равном:си такай реакции обычнп сдвинуто е сто рону гидролизз, однако направленное изменение успоний реакции )ее термолннемических и кинетнчески» параметров> позволяет смеет«ь равновесие в сторону сиищза. В частнпст». ннгбходимо обеспечи низ ую растворимость синщзируемого лепт да и!или высокую концентрацию скопин» ко»вонзится. Дли этого используют соответствующие комб нации защитных групп. смеши»аюшиев ли несмешивающиеся мщно.органические смеси (такие, кв ДМФА -- вола, лиоьсан .. вщм, хлороформ — вона, зтилацетвт— вола), рН-контролем иммобилизовеиные ферме)мы В качсс ае нр мер» рассмотрим синтез дипептида Ас- Рае— А)ар-МН под действием х мотРипсина.
Известно. чю химотРипс и расцмцляет амианые и слогкнозфирныс сав')и. образован ые карбоксильнымн руппамн ароматических аминокислот Рпе, Туг, Тгр. Реакция пргпекает через промемуточиую стадию образования ацилфермеите, который далев )Юэцнл русте» с учас ием воды кек ну лгофила. В прнсутствми другик нуклеофилов — аминокислот, их амидов и пептидов молгио получить продукты как гищзолизв, так амииолизэ. л -гь -Оег т х р г л' яг' а — - * ° -СΠ— Ый — Сй — СΠ— ММ вЂ” СМ-СΠ— ММ вЂ” СМ вЂ” -СΠ—"- )' дг 1Н Соотношение к нстантскоросгейгнлрол з» (8,) и ам полива Ос,) определяет иаир«шпике реакц и н зависит от концентрации нуклепфилод Наидсно, что при РН 10,9 и 1 и концентрации ЯННг(А(а КН,> вмход п«птида Ас — Рйс — А(а-- ННг состаеляет 959 .
С помощью такою опхола в настоям«е нре я о но и псзирь. нать неболь не пептнлы. На ример, при использовании и качестве катализаторов химотрипсина. терм«лизина и папани» бьш получен гексе ептид послсдоштелыежти 6 1! »лед«нэнни. Вес . АЬ— Рйе -!Ю вЂ” О1У ).ес Мег ННг (Х. Як>бке). ПРеимУществами синтеза с участием ферментов являются отс)тстане рацемнзацни, во о ость раб ты нимальны числом защитных группироюа, аысокая скорость прот«кани» рсэкц й. Однако не исключены поб нные реакции трап«не тидаппи, гищюлнза.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
