Ю.А. Овчинников - Биоорганическая химия (1128694), страница 26
Текст из файла (страница 26)
75), м «забевзол-2-сульфеннлбромид (А. Фонтана. )968); зк! и деисацн» Н-этнлмвленмидом, моднф юшин могут подвергвтьс» так «е остатки Нц !.уь, но пр рН 7,0 скорость реакц и с ВН-группой в )О раз выше. 5 — СН.,— СОО 5 — Н.— / ~~) — СООи ! СН г,—,,— (Г З)-.оос СН, ! (гзц -о ! НН вЂ” СН вЂ” СО эн е.ь *а -ис! () [! Дышим Для модификации дисулзфидиык групп остатков циотия» в ос«ее«ом с)ымеияэзтс». «) воссгаиоелемме тиолам».
иаиболе» широко ислользуетс» дмтиотреигол (Д'П' -- реактив Кле. лвца», !964Н образование цяклического д сульбида яри реакции с Д'ГТ термолияамическ» выгод«, скорость аналогичной реаквии с !)-меркаит эта олам в 19' раз виже) б) окислительиый сульф»то. лиз, реа«ция вротекает в присутстви окисляюшик агс тов (От иод»зобе»вой»а» «»слота т. и.) и «ага»из»русте» цисзти»ом или р-меркаотозтиламимо; в) расшеплеггие циам«лами (Р. руд, 1963), реакция обычна со»рево гдаетс» цикл«задней тиоцкаиолро«заод»ык в ацил ми«от»валид»им (см.
с. 52); г) ок саеиие ив»муравьи« й ислотои (С. Э«сер. 1949). Метиюз)иа. Для модификации остатков метко«яка яримеияютси. а)окисле» е Нлоь иадмуравьииой «ишютой или фотсок слеиие (в присутствии метилеиовшо сиз«им) до сувьфоиа; б) алкилироваиие дтксусиой к сымай, Иодацетамидом или !)-»рояиолакто ом с образованием сули!юииевмк солей. Деградаиия сульфо«ееы«сале« метис»и»а в ос»гида« ори кипячсии«в воде со»ровс»дастся расше ле е связи, образоваи- СН« 1 5- О 1 (СН».
(а' ! — Нн — СН вЂ” СО СН. 1 * 5 1 (онф 1 Нн — СН вЂ” СО СН 1 '5 — С) гСОО ! (СН.). дьгсоа. нн-с(н — со ги ),г )б) )е) си — з« 1 эн сн — он 5 — 5ОУ 5 ! СН вЂ” с и ! ! СН СН СН, С,' 1;и -)н зо, )+21- — нн — ~н — со — -! — Нн — СН вЂ” СΠ—. + ° — НН вЂ” СН вЂ” СΠ— ° лиг вз ( ! (в) - — НН вЂ” СН НС НН вЂ”" ! ! — ОС СΠ— "' 5 — Сн () И )ОН ! СН СН„ СНг тисо он ! — нн — СН вЂ” СΠ— +.
— нн — СН вЂ” СО-" + г(- — нн-сн — со — ! ной кьрбоксильмой труппой метиоиитм (аналогично тему, ккк зпт пронскодит при действии бромпиаиа, см. с. 48). Иа«луч ыкод (50'б) достигается при алкилиро внии иодапетамидом. Ири действ и на сульфонневые произиодные (1-меркапюэтаиотм проис»онат «оличествеинак регенерация метяоннти. Аспараг новзи м глутамииован «пологи. Карре»сильнее группы остатков глутамнноеой и асоарапмювой кислее обычно молифнцнруют путем превраптемия нк вело» н е эфиры (реакинн зтерификации) илн продукты вэанмодействн с зодорастиоримыми «арбодн миют и (см.
с. 131). для эгернфикации использую»сит раствор »пористого водорода э метанол», дназометаи, диазоацетам д ли борфторип трнзтилок«опия. 165 Ствпеэ ми есалл тодификаии» ба ко» пепгилов й с (носи (сн,)а , . нн — сн — со ист сиги. » т:и,пт О с 1 "Π— снт —.Со — ннт (сн,)„ нн — сн — со (снй нн — с)н--со о,т тгн ь,о, та'с т О с Π— Сги [сн,н 1 НН вЂ” СН вЂ” СО Гистиднн. Имидатольвое кольцо гистидина резгир)ет с 1-бпор- 2,4-лиинтробетттолом и а-галегенкислотами, по эти реакции маласелектнены. Лу вине результаты дмт диазотнрование с помощью дназотетраюла.
у н н н н —.и Ъ- -.-< СНт ) '~~,/ "и кс нф й сн 1 нн-сн — со ° н — сн — со ,н э,о Бели и и и гдь Н вЂ” С вЂ” ОСгн, СН СНг ГГ ОСО1Ю Тирозин. Оствткн тиразнив мопнфнцнруются достазпчно легко и селект вне. Для этого широко используются: в1 одироввине, б «ш рэл «г к э "'1 'л1, в о т иоднроев не применяется для введения тяжелого атома ср рснюе- ' 7"'Г' фГ' НН вЂ” СН вЂ” СО ° НН вЂ” СН вЂ” СО 1 н г еи е,о-в,о уР 11 Н Н ОН О НН вЂ” СН вЂ” СО НН вЂ” СН вЂ” СΠ— е-" " НН вЂ” СН вЂ” СО Гв1 11 НН вЂ” СН вЂ” С О Ф- Г Г' НН вЂ” СН вЂ” СО НН вЂ”.СН вЂ” СО Зля мод»фикации остатков ги т ядниэ в белкак, особенно в актив.
ямк ггеитунк ферментов, ренее ге«рокс примеиялссь сенснбилизиро- . ", клнюм красителями ботоокисление (В. Рой, 19671. В шюледнее не время «редпачитеют использовать диэтилп рокарбонэт, которьй прн РН 5,5 — 7,5 достэточно сгнциф чио ревгнрует с оствтказм гистидина. (э. скоффоне, !о72); г) формилнроиэ е бсэвоц ой муравьиной «попотей, нэсмщенной гэ» юбрвзнмм НС)) гО фотсокнслегме (98 .;-нэв НСООН и присутствии профлэвнна! или азоиолиз НЮО7-нв Н(Х)ОН, реэорцин). йифункцнонэльнме ревгеиш|. К бифункцноиэльнмм реашнтв отгюшгг х м ческие соепинеиня.
содержащие две (обычно одиии«овыс) пространственно рвздещниме реакционнсспособ ме группировки. бнфункционэльнме ревгентм шнроке используются для коылснгиой *сгнив«и прострэнственно сблнженнмх учпстков «ак одной бел«окой молекулы, тэк двук разных белков, функции ннрую~цих велнно компл «е.Спомощьютэкмк реэгенговизучвют тр ную н четвертичную ссруктуры белков н выясняют области «онтэктав рвзлмчнмх бслкомзх молекул между собой илн с другнмн бнополнмерэми. К бифункцнонэльнмм реегснтам отнгюятстк ппрмер, глутэроамй вложу, )гзаимодеиатвушцш) с амииогрушами, и Н-эамещениьм «роизводнме мвлеимнпэ, рсвгнруюш е с сульйтнприльнммн группа и белков, Менее специфичнм ьлкижелошиицы, сгюсобнме модифнциро«эть эмиио-, сульфпщрнльиую, э также мндвэольную группы, а рилгвлогенндм, реп гирукицие, кроме того, и с ф польем м гидро»- силом.
СООН О ( О )-см,— с--мм-~' р-и и ' -с-см,-) СООН ЭО,М п,--см,— ~~'=~~ — см,— к г т ,в* дше -г- ° г ь Ьз-д ь' е ьт- .г ь Ш рокос рвспрострэнение е качестве бифункцнонильнык реащитов входят дннмндоэфнрм, модифицирующие «миног)гунны белков: й) Ь ми. 1! $ М С вЂ” Π— С- (СМ,)„— С- -Π— СН, ..-),з ) 4 3 6 Особую группу состзелнют реагенты, содержащие д сульфидине связи или цругнс группировки (зфирнме, эю-, сульфо овмс), расщеплнемме э достаточно мягк х условиях (расщепляемые бнфу юн окольные рсаг ."нты). Ислользоелнне расщепллсмык реагентеп еблегчает процесс идентификации снгиааемык» с ик гюмощью белкое при исслелпщн н топографии миопэкомпоненткык бслкоемк систем.
Синге» кг 'кс м мод ф кацие бе кое и пегтидое г г О О У О О Биослецифицеская модификация белков Реакциониесгьхобные аналоги субстрктоь или прутик биоспеци. фнческик лигаидое (гормонагс медиаторое и т, па могут преимушестие и илн да:кс искдючигельно езаимодеастепеать с лмино«нслотными остатками, располоыениыми и актианом центре ферм~ига нл белка.рецч~торе. В общем случае такие реагснтм назы«аюгсл субстратоподобнымн. и г н~ Фм с, си снг сг н-Снг О мй г сн (,~ ~-' ""~О сн снг Так, на«ример. этилоаый эфир М-ее«ил-3:феиилала ина ннлэет- .,' сэ «убстрзтом «имотриосина: йме- фм — согзс и / ==э' аналог этого соелннеииэ —.
М-юзил-$ феннлзлзннлклорметан бьы грек«о «ен е 1«63 г. Е. Шоу э «ачестае снеииф ческого иг б тора. Оказ«лог, что этот реамнт селект ано алэ л руст остаток гнстнлина (НГ«57М располоягеиный ааг тнэном центре «имотриисина. И з ил Г«а Н й~ й фмэ . Сн, лр .и 9 — 5---ф СН СИ Иэ 99 к э 3 -999 И -Эг Активным ингнбитором трнпсина иалястсн впало»ичнмн по структуре хлормстилкетон- 15-т мил (.-лнзнлхлорметаю Сн»»таз к и. еска однфнкация ба оа н па«дов Н С вЂ” ' 5Π— НН ОН" — СОСНЦ( (СН,1 Нн Д. Фар»»н н А. Толу ((рб31 нсвользовали лля исследования актнвнага центра хим три синя феннлметилсулм(ю»»ил(мориа, хатор й избирательно реагирует с остатком сорина (Бег-19ББ Реагснт для биоссенифической модибаюапин белков часто спдернат з»юксидную и диа»огруппм. Так, Б.
Хартли (19бд) применил для молификации химотриосина феноксиметилзтилиноксид, специфично взаимодействующий с остатком метнонина (Ме(-1921. О й НН „СН *г»» а к .5 НН Ц 5» х р 5 (95 ! СН. 1 ОН„' ОН О+5 Смз-(» .ЦН. ЦН,» ». » 9» Н. 5» Т. К. Хартмаи П»63) показал, «о структуриый к»аяог глутамииа - б.диазо-5-оксо-).-иорлейцим реагирует с сульфгидрильиой группой цистеии» в фосфорибозилпирофосфат-ам»истра»сфе. разе: »ешь пепе Лы СО ! ! Нэ — СН.— СН ! ын О СН С СО 1 Р СН' СН 5 — Сн — уФ РОС вЂ” Сн — НН ! + нн ! О ! ЧСн=й=м СН ! ООС вЂ” СН вЂ” НН, Аиалогичиа метиловмй эфир Н-дивзовцетилфеиплалаиииа избирательно взаимодействуег с остатком вся»рати»свой кислоты )Аар- 2)5) в активном центре пспсииа, что «рмаодит к полной и»а тивацим фермента. Частным случаем биоспецифическпй модификации аал»етс» Фото»фри»я»» мсдпфикайи».
осмаев»и»а па использоваиии проызвошго о природ»ого лига»да, содержащего фоторсактивиую группировку. При облучеими УФ-светом происходит образо»апис свобод»ма реп»к»лов, способиых реагировать с самими различ»ыми группировками белковой молекулы )в том ч»еле и с СН-группой) а ме *так наиболее тесцых »и»тактов с лига»лом. В качестве предшествеиииков активироваииых сседияеммй пбычип п)ымеияют раз»ообраз»Не произвол»Не армлазидов м дмазососдииеиий, геиерирующие при фотолмтическом разложении »игреки и карбе»ы, «к«ветствеииог 5 Х О О ,А » — -Π— с — сн ч м а — Π— с — сн Пр имуп)сство метода заключается в возмо:к»ости провпдить молификацию гм опредслеияом зпгпе фуикциоиироеаии» системы, од»»к!г зыков целевых продуктов »за»меме»стаи», как правило, низок из-за аиугримолекулириих перегруппироаок радикалов и црупгх ко»курируювшх»рпцессов.
Поэтому при идентификации продуктов сшизок необходимо использовать радио»атис»о мечеиим фотоаффияиыс реагепты. В качест е примера фотпаффиииой модификации рассмотрим локализацию в ДНК-эависимсф РНК-полимеразе участков, ко»так. тирующих с 5'-коицевой груп ай свмтезируемои РНК. Были отработаны условя», и которых РНК-полимераза способ»а сиитсзиро. С г з ес м од фнквци» бв к «до го Топохимическне трансформации пептидных систем Общепрниятьм путь исслсдоаанин зависимости моллу ст(юсинем и био огнческим действием природина пептидое заключаетс в получении нк аналогов заменон олннк амииокислгмиы» остаткпа на другие и в сравиителыю изучении биллаги юскив слоиста сннзнроааннык соединении.
ват олигонуклеотиды определенной длины, ссдер вшие иа 5' кон. це ф тореактивную (у.азндоаннлидную) группу. После облу гение сес омтрамскрипциоиногокомплекса (РНК-гюлимераза - ДНК -. РНК) в зависим сти о длины сннесзиров нного олигорибоиу«- т огнда модифициромлнсь различные субъединици ф:рмента В частности, в случае линуклеотида главным образом модифицнро ааллсь Р-субъединица. а в слуи тетрвнуклеотнда — б'-субъедиица (рис. 83). Получеин е результаты свидетельствовали о том.
по пентр свнзыааннн проди а изме ветен а процессе снтпезл РНК (К Д. О ерллое, 19ВО). Гтд (йее )м рра(о ЮМ), Другой нодход основан иа одификации молекул с испольюваиием особ х прием ге и прнвоцит к впало ам нового тина, а «отой к прн радикальном изменении молекулы как системы в цело сохраняьмсн многие стереозлектрзн е характеристики природна. го сседниенн .
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
