И.П. Ашмарин, А.А. Каменский, Г.С. Сухова - Руководство к практическим занятия по физиологии человека и животных (1128356), страница 47
Текст из файла (страница 47)
Наиболее часто используются формалиновый тест (/огта»и»еЯ и тест корчей (ьтйтд»ел»). Более подробно с описанием всех вышеперечисленных методик можно ознакомиться в дополнительной литературе, представленной в конце задачи. Остановимся более подробно на некоторых методах. ' Максимальное время действия стимула (си~-ой'6гпе) — это время, устанавливаемое экспериментатором, для того чтобы стимул не приводил к повреждени1о тканей. В случае отсутствия поведенческой реакции в течение этого времени тестирование прекращается и в протоколе фиксируется время, равное» . Обычно это время в 2 — 3 раза больше, чем средний ЛП для данной выборки животных.
16 — 2261 Модели острого болевого раздражения Тест отдергивания хвоста. Метод основан на оценке изменения рефлекторной реакции животного в ответ на термическое раздражение хвоста (используются мыши и крысы). Применяются в основном два вида стимулов: вода, нагретая до 55'С (1), и световой пучок, сфокусированный на хвосте (2). В первом случае хвост животного погружают в горячую воду (»= 48 — 55'С) и регистрируют время от момента погружения до отдергивания хвоста. Для эксперимента отбирают животных, у которых латентный период (ЛП) составляет не более 20 с. Максимальное время действия стимула (»,,„, си»-о~~ »»те) принимают равным 30 с*. Во втором случае наиболее часто применяют неконтактный термический раздражитель — световой пучок, который фокусируется на хвосте животного.
Для определения ПБЧ существуют Часть!1. Практические задачи по патофизиологии специальные анальгезиметры. Например, стандартный анальгезиметр фирмы "Ниао Бааз" представляет собой источник света, расположенный в металлическом кожухе. На панели прибора имеется ручка регулировки интенсивности стимула. Включение лампы синхронизировано с включением таймера на передней панели. Это позволяет регулировать интенсивность светового пучка и изменять расстояние от источника до поверхности хвоста. В ходе эксперимента животное помещается в камеру, а хвост укладывается в специальный желобок, расположенный под источником света. В некоторых случаях на хвост наносят черную краску для увеличения поглощения падающего света. Трижды, с интервалом не менее 3 мин, регистрируют ЛП отдергивания хвоста у каждого животного. Интенсивность светового пучка выбирается таким образом, чтобы в среднем ЛП составлял 3 — 4 с для мышей или 6 — 8 с для крыс.
Максимальное время действия стимула (~,,„) принимается равным 15 и 20 с соответственно. Тест горячей пластины. Метод основан на изучении поведенческих реакций животного при помещении его на пластинку, нагретую до 55'С. Здесь рефлекторные реакции животного выражаются поведенческими реакциями кусания и лизания лапы. В другой модификации метода животное помещается на прозрачную стеклянную подложку, под которой расположены подвижные источники света, а их лучи сфокусированы на внешнюю поверхность пластины. Это позволяет измерять ЛП отдергивания каждой лапы животного в любом месте камеры.
Реакция отдергивания хвоста обеспечивается, по-видимому, только рефлекторными механизмами, реализуемыми на уровне спинного мозга, тогда как в тесте горячей пластины наблюдается комплексная реакция животного, которая включает также и поведенческие реакции, обеспечиваемые через вышележащие структуры головного мозга. Модели тупого (хронического) болевого раздражения Как уже упоминалось выше; 6 качестве источника хронического болевого раздражения применяют химические раздражители. Приведем два, наиболее распространенных метода. Формалиновый тест.
Животному под кожу в подушечку лапы вводят 10 мкл слабого (1%) раствора формалина (мыши) или 50 мкл 5%-го формалина (крысы). Затем животное помещают в экспериментальную камеру и в течение определенных промежутков времени подсчитывают поведенческие реакции (количество кусаний и лизаний поврежденной лапы, количество касаний лапой пола).
При этом в данном поведенческом ответе выделяют две фазы: с 1-й минуты по 10-ю и с 10-й минуты по 30-ю. В первый проме- Тема Ч1. Методики оценки порогов болевой чувствительности жуток времени считают реакции в 2-минутных интервалах времени, а во второй — в 5-минутных интервалах. Затем исследуют динамику каждого акта в течение двух временных интервалов.
Показано, что через 10 мин происходит сенситизация второго звена передачи ноцицептивных сигналов — нейронов дорсальных рогов спинного мозга, и реакции животного во второй временной интервал количественно отличны от реакций, наблюдаемых в первые 10 мин. Метод корчей. Метод основан на активации висцеральных ноцицепторов слабыми растворами кислот. Как правило, используют О,б%-й раствор уксусной кислоты или раствор ацетилхолина. Животному внутрибрюшинно вводят уксусную кислоту из расчета 0,1 мл на 10 г веса тела и через 5 мин (время, необходимое для развития воспаления и ответной поведенческой реакции) производят подсчет количества корчей, т.е.
сокращений абдоминальных мышц, в течение 10 мин. Правила работы с лабораторными животными при тестировании болевого порога Гуманное обращение с лабораторными животными является обязательным условием проведения медико-биологического эксперимента. В нашей стране, как и во многих других странах, приняты "Правила проведения работ с использое»- нием экспериментальных животных", а также другие документы, определяющиф нормы проведения экспериментов над животными. В приложении 3, и. И! "Пр»- вил" (см.
с. 16 — 21) указаны нормы проведения экспериментов по изучению мф. ханизмов боли и действия анальгетиков, где подтверждается пороговый ха« рактер болевых стимулов. Существуют также "Международные рекомендации по проведению медико-биологических исследований с использованием живо. ных", утвержденные Всемирной Организацией Здравоохранения в 1985 г. ВФ® эксперименты необходимо проводить с учетом этих требований. Задача. Исследование влияния анальгина на пороги болевой чувствительности мышей в тестах с острой и тупой болью Цель работы. Сравнить влияние анальгина на пороги болевой чувствительности в тестах с острой и тупой болью.
Объяснить и©- лученные результаты. Приборы и оборудование. Любой анальгезиметр с фокусирующимся лучем и таймером; шприцы на 1 мл; О,б%-й раствор уксусной кислоты; 50%-й раствор анальгина для инъекций; физиологический раствор для инъекций; раствор фукорцина или пикРИ- новой кислоты (для маркировки животных); клетки иди прозрачные боксы для наблюдения реакций "корчей'*; пинцеты, вата.
Часть Н. Практические задачи по патофизиологии Рис. 1. Схема нумерации животных по положению окрашенных пятен на дорсальной поверхности тела. Каждое пятно обозначает определенное число, остальные номера получаются из сочетания пятен: например, чтобы получить № 3, надо поставить пятна на голове (1) и спине (2), № 5 — (1) и (4) и т.д.
ХОД РАБОТЫ Задача выполняется на мышах весом 20 — 25 г. Для значимой статистической обработки требуется не менее 16 животных. Животных метят фукорцином или другим красителем, нанося пятна на определенные участки тела (рис. 1). У каждого животного трижды измеряют ЛП отдергивания хвоста (см. ниже). В начале измерений интенсивность светового пучка устанавливают таким образом, чтобы в среднем ЛП отдергивания хвоста составлял 3 — 4 с.
В эксперимент отбирают тех особей, у которых разница между значениями ЛП в каждом из трех измерений составляла не более 1 с. Рассчитывают среднее значение ЛП по трем измерениям у каждого животного. Ранжируют и делят животных на опытную и контрольную группы таким образом, чтобы среднее значение ЛП в обеих группах было одинаковым. Опытным животным вводят внутрибрюшинно раствор анальгина из расчета 100 мг/кг (0,1 мл на 10 г веса тела). Контрольным животным вводят эквивалентный объем физиологического раствора. Через 10 мин после введения раствора однократно измеряют ЛП отдергивания хвоста. Сразу после измерения ЛП реакции отдергивания хвоста животному вводят внутрибрюшинно О,б%-й раствор уксусной кислоты из расчета 0,1 мл на 10 г веса тела. Через 5 мин после введения подсчитывают количество корчей в течение 10 мин. Далее тестируют следующее животное.
Следует чередовать животных из контрольной и опытной групп и вводить растворы таким образом, чтобы интервал времени с момента введения до окончания теста был у обеих групп приблизительно одинаков. ОБРАБОТКА И ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ Для оценки действия препаратов в разных тестах используются различные способы обсчета полученных результатов. Основным критерием для применения статистических методов является характер распределения полученных данных*. ' Для более подробного ознакомления с существующими статистическими методами см.: Гпанц С. Медико-биологическая статистика.
М., 1999. Тема И. Методики оценки порогов болевой чувствительности При нормальном распределении, которое, как правило, и наблюдается в опытах с измерением латентного периода реакции отдергивания хвоста, можно использовать параметрические критерии (например, критерий Стьюдента). Если сравниваются ЛП внутри одной группы до и после введения препарата, то необходимо использовать парный критерий Стьюдента.
При неясном характере или в случае большого разброса данных внутри выборки применяют непараметрические методы (например, критерий Манна-Уитни). Для оценки выраженности анальгетического действия рассчитывают процент от максимально возможного эффекта (МВЗ). Для этого используется следующая формула: Л'7после Л ~до МВЭ = " ' "' х100, ~~пах Л'Удо где ЛП, — ЛП отдергивания хвоста до введения препарата; ЛП ЛП отдергивания хвоста на фоне действия анальгетика; ~ — максимальное время действия стимула (см. выше).
При тестировании разных доз препарата рассчитывают также ЕО5О Действие препарата на ЛП отдергивания хвоста можно оценить двумя способами; 1) по достоверности различий среднего значения ЛП отдергивания хвоста в опытной и контрольной группе до и после введения препарата (критерием проявления анальгетической активности вещества в данном тесте будет отсутствие достоверных различий среднего значения ЛП после введения физиологического раствора и наличие достоверной разницы в опытной группе); 2) по разности (Ь) ЛП реакции до и после ведения веществ— этот способ, на наш взгляд, является более корректным.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
