Osnovy_biokhimii_Nelson_i_Kokh_tom_3 (1123315), страница 36
Текст из файла (страница 36)
Праймер 2: (5') — ССТТОООТОССТТТА — (3') ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! (3')...САОАОАССААААООААСССАСООАААТАСОТСОТТССТАСОСТАТАААОСООТТС-(5') фекции, она, скорее всего, окажется инертной или просто расщепится клеточными рибонуклеазами. Репликация этой РНК и распространение вируса возможно лишь в том случае, если в клетки вместе с матричной РНК ввести интактную РНК- репликазу (РНК-зависимую РН К-пол имеразу). 5. (1) В качестве матрицы используют последовательность нуклеиновой кислоты; (2) синтез происходит в направлении 5' 3'! (3) в качестве субстратов используют нуклеозидтрифосфаты и образуют фосфодиэфирные связи с вытеснением РР, Полинуклеотидфосфатаза образует фосфодиэфирные связи, но отличается от остальных ферментов по всем остальным пунктам. 6.
Обычно две: одна для расщепления фосфодизфирной связи на одном стыке интрона и экзона, а вторая — для связывания освободившегося конца экзоиа с экзоном с другой стороны от интрона. Если в качестве нуклеоф ила в первой реакции выступает молекула воды — это стадия гидролиза, и тогда для осуществления сплайсинга требуется липгь одна реакция трансэтерификации. 7. В интронах закодированы многие мякРНК, необходимые для модификаций рРНК. Если не происходит сплайсинга, мякРНК не образуются.
8. Эти ферменты не имеют корректирующей 3' 5'-экзонуклеазной активности и поэтому допускают значительное количество ошибок. Прн этом вероятность ошибок при репликации, приводящих к инактивации вируса, в маленьком геноме намного ниже, чем в больцшм. 9. а) 4зз = 1,8 10'а; б) 0,006%; в) Для осуществления «неестественного отбораь используйте хроматографическую смолу со связанными молекулами, которые представляют собой аналоги переходного состояния в реакции гидролиза сложного эфира (например, подходящий фосфонат; см. Дополнение 6-3).
10. а-Аманитин останавливает синтез РНК, и когда через несколько дней все существующие молекулы мРНК и белков в печени расщепляются, возникает дисфункция печени и наступает смерть. 11. а) После ливиса клеток и частичной очистки белковый экстракт следует подвергнуть изоэлектрнческому фокусированию. Для идентификации 8-субъединицы можно использовать антитела. Различие в аминокислотных последовательностях нормальной 8-субъединицы и мутантной формы (а именно разные заряды аминокислотных остатков) отразится на электрофоретической подвижности белков в геле. б) Прямое секвенирование ДНК (по Сенгеру).
12. а) 384 п, нз б) 1620 и. нз в) Большинство иуклеотидов расположено в нетранслируемых участках на Зч и 5'-концах мРНК. Кроме того, значительная часть мРНК кодирует сигнальную последовательность (гл. 27) белков, которая в конечном итоге отщепляется при формировании зрелого функционального белка. 13. в) кДНК синтезируется в процессе обратной транскрипции мРНК; таким образом, мРНК, повидимому, имела последовательность ССС. Поскольку геномная ДНК, на основе которой сиитезирована мРНК, имела последовательность САС, первичный траискрипт, вероятно, имел последовательность САС, а в процессе посттранскрипционной модификации превратился в ССС. б) Нередактированная последовательность мРНК совпадает с последовательностью ДНК (за исключением замены Т на ()). Нередактированная последовательность мРНК имела следующий вид (* указывает место редактирования): Краткие решения задач и ответы на вопросы ДНК-нояимсрвзв добавляет нуклеотиды к зчканиу првймерв.
Двигаясь сяенв направо, онв встраивает Т, О, С и Л. Однако поскольку Л из 33АТР не имеет нв зчконне ОН.груольь необходимой двя орнсселинения следующего нукяеотнлз, день лвлыле не удлиняется. Это Л выделено курсивом, в новая ДНК подчеркнута: Првймер 2; (5') — ССТТОООТОССТТТАТОСА ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! (3')...САОАОАССААААООААСССАСООАААТАСОТСОТТССТАСОСТАТАААОСООТТС-(5') В результате образуется нередзктиронвнный трввскринт из 19 нуклеотилов.
В трвнскри~зте пасло редактирования *Л звиеняется нз О; в оослсловвтельностн кДНК зто соответствует С. Начинается ствлия 3: Прзйнер 2: (5')-ССТТОООТОССТТТА-(3') ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! (3')...САОАОАССААААООААСССАС66АААТАСОССОТТССТАС6СТАТАААОСООТТС-(5') В лвнном случае ДНК-нолимераза может продвигаться зв ззиененныи основвннси и останавливается у слелующего Т в ооследонвтельностн кДНК Дидезокси-Л вылечено нурсивоьь новая ДНК подчеркнута Првйиер 2: (5') — ССТТОООТОССТТТАТОСООСА ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! (3')...САОАОАССААААООААСССАСООАААТАС6ССОТТССТАСОСТАТАААОСООТТС-(5') Глава 27 В результате образуется продукт, состоящий из 22 нуклеотидов, в) Факторы, нарушающие функцию белка (протеазы, тепла), ингибируют редакционный процесс, а те, что не влияют на функцию белков (нуклеазы), практически никакого действия не оказывают.
Основной недочет этого аргумента заключается в том, что факторы, нарушающие функцию белка, не вызвали полной остановки редактирования. Возможно, некоторое редактирование или расщепление мРНК происхолит даже без фермента или какая-то часть фермента сохранила свою активность. г) В полинуклеотиды включается только а-фосфат ХТР. Если бы исследователи использовали другие типы [чтр[)т)ТР, не было бы меченых продуктов. д) Поскольку модификация затрагивает только основание А, нас интересует только судьба всех А в последователыюсти. е) Поскольку метка содержалась только в АТР, нри удалении целого нуклеотида из мРНК исчезла бы вся радиоактивность, и на хроматографической пластинке был бы обнаружен лишь немодифицированный ["Р[АМР. ж) Если бы основание было удалено или заменено на другое, исследователи обнаружили бы только [тН[АМР.
Наличие [зН[!МР указывает, что произошла замена А на! без удаления Н в положениях 2 и 8. Наиболее вероятным механизмом модификации при замене А на!является гидролитическое дезаминирование (см. рис. 22-34). з) САС меняется на С!С. Этот кодон читается как ССС. 1. а) Яу — Яп — 8ег-Ееп — 1еп- Пе;б) 1.еп — Азр — А!а — Рго; в) Нгз — Азр — А!а — Суэ — Суч-Туг; г) Мес — Азр — Яп у эукариот; ГМес — Азр — С!и у бактерий. 2. Ы)АА()СБА(), ()()СА()С()А(), СП()А()С()А(), С() СА() Сз()А(), С ()АА() С()А(), С() СА() С()А (), Б()АА() С()АС, () () СА() СПАС, СБ()А() С()АС, С()СА()СПАС, С()АА()СПАС, С()САНС()АС 3.
Нельзя. Почти все аминокислоты кодируются несколькими кодонами (например, существует шесть вариантов колонов для лейцина), и поэтому каждый полипептид может быть закодирован несколькими способами. И все же для некоторых аминокислот существует лишь один кодов. Кроме того, несколько кодонов, кодирующих одну аминокислоту, часто имеют олни и те же нуклеотилы в лвух из трех позиций. Таким образом, некоторые участки последовательности мРНК, кодируюшие белки с известной аминокислотной последовательностью, можно определить с достаточно высокой точностью. 4.
а) (5') ССАСССССССААС() САСССС() С(Л)ААС(3'); б) Агд-Агд-Агд-С!и-'тга)-Агд-С!у-Ча)-Еуз; в) Нет. Комплементарные антипараллельиые нити в двойной спирали ДНК не идентичны в направлении 5'- 3( Из дуплекса РНК считывается лишь с одной конкретной нити. РНК-полимераза узнает только «правильную» нить и связывается с пей. 5.
Для переноса метионина существует два тина молекул тРНК: тРНКштг, инициирующая синтез, и тРНКьм'. которая может встраивать остаток Мес внутри полипептилной цепи. Только (МеС-тРНКшн распознается инипиаторным фактором 1Е-2 и подходит к инициаторному кодону АСС, находящемуся в Р-сайте рибосомы в инициаторном комплексе, Кодоцы АСС внутри последовательности мРНК могут связывать только Мес-тРНКм". (3)(! Приложение Б 6. Взять смесь !Л)Р и !Л)С, скажем, в соотношении 5: 1 и подействовать на нее полинуклеотидфосфорилазой. В результате должен получиться полимер, содержащий много триплетов П(Л) (Рйе), меньше ()()С (Рйе), ()С() (5ег) и С(Л) (Ееп), значительно меньше ()СС (5ег), С()С (1.еп) и СС() (Рго) и совсем мало ССС (Рго).
7. Минимум 583 эквивалента АТР (по 4 на каждую присоединенную аминокислоту, но с учетом того, что происходит лишь 145 транслокаций). Для исправления каждой ошибки нужно 2 зквивалснта АТР Для синтеза гликогена нужно 292 эквивалента АТР Дополнительная энергия, затрачиваемая на синтез В-глобина, отражает стоимость информационного содержания белка, Для синтсза белка из аминокислот клетке потребуется как минимум 20 активирующих ферментов, 70 рибосомных белков, 4 рРНК, 32 или более тРНК, одна молекула мРНК и 10 или более вспомогательных ферментов. В синтезе цепи (а1 4)-гликогсна из глюкозы участвуют лишь 4 или 5 ферментов (гл. 15).
8. Колоны глнцнна Антнкодоны (5')ОО() (5')ООС (5')АСС, ОСС, 1СС (5')ОСС, 1СС (5')ОСА (5')ПСС, 1СС (5')ООО (5')ССС, ()СС а) Зчконцевой и среднии; б) спаривание с антикодонами (5')ОСС,!СС и ()СС; в) в парах с антикодонами (5')АСС и ССС. 9. Только (а), (в), (д) и (ж); (6), (г) и (е) не могут быть результатом однонуклеотидной замены: для (6) и (е) требуется замена двух нуклеотидов, а для (г)— замена всех трех нуклеотидов. 1О. Для О!ц существует два кодона (ОАА и ОАО), а для 'га! — четыре кодона (ОТТ, ОТС, ОТА и ОТО).
Однонуклеотидная замена ОАА на ОТА или ОАО на ОТО могла бы привести к замене Сйц на На! в серповидном гемоглобине. Гораздо менее вероятны замены двух нуклеотидов: превращение ОАА в ОТО, ОТТ и ОТС или превращение ОАО в ОТА, ОТТ и ОТС, 11. Изолейцин по структуре напоминает некоторые другие аминокислоты, особенно валин. Чтобы отличить изолейцин он валина в процессе аминоацилирования, нужсн второй этан проверки. Гистидин не похож ни на какую другую аминокислоту, и его структура обеспечивает достаточную специфичность аминоацилирования и связывания тРНК.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
