Osnovy_biokhimii_Nelson_i_Kokh_tom_3 (1123315), страница 34
Текст из файла (страница 34)
Следовательно, ему нужно похудеть на 43 кг (95 фунтов). 18. Секреция инсулина понизится. Валиномицин оказывает такое же действие, как открьпие К'- каналов, позволяя ионам К' выходить из клетки, что вызывает гиперполяризацию. 19.
Печень не получает сигнал инсулина и, следовательно, продолжает поддерживать высокий уровещ глюкозо-6-фосфата и глюконеогенеза, повышая уровень глюкозы крови как при голодании, так и после приема сахаросодержащей пищи. Повышенный уровень глюкозы крови вызывает высвобождение инсулина 9-клетками поджелудочной железы, несмотря на высокий уровень инсулина в крови. 20. Следует учесть несколько аспектов. Какова вероятность возникновения сердечных приступов, связанных с приемом препарата. Как эта вероятность соотносится с вероятностью сердечных приступов у людей с хроническими осложнениями диабета 2 типа. Существуют ли столь же эффективные методы лечения, вызывающие меньше нежелательных побочных эффектов.
21. При отсутствии глюкозидазной активности кишечника замедляется всасыванис глюкозы из пищевого крахмала и гликогена, что снижает обычный подьем концентрации глюкозы крови после приема пищи. Нерасщепленные олигосахариды ферментируются бактериями в толстой кишке, а выделяющиеся при этом гизы вызывают дискомфорт. 22.
а) Закрыл ие АТР-зависимых К'-каналов приводит к деполяризации мембраны и усилению секреции инсулина. 6) Диабет 2 типа вязан с понижением чувствительности клеток к инсулину, а не с недостаточным синтезом инсулина. Повышение концентрации циркулирующего инсулина ослабляет симптомы заболевания, в) У больных диабетом 1 типа повреждены 0-клетки поджелудочной железы, поэтому глибурид таким больным не поможет.
г) Иод, как и хлор, который иод замещает в меченом глибуриде, — галоген, но его размер больше и он имеет ыесколько иные свойства. Поэтому возможно, что иодированный глибурид не связывается с 5ПК. Если же вместо этого он связывается с другой молекулой, в результате эксперимента будет клонирован ген другого белка. д) Хотя белок очищачи, но «очищенный» препарат мог представлять собой смесь нескольких белков, выделяющихся одновременно в одних и тех же экспериментальных условиях. В таком случае аминокислотная последовательность могла бы соответствовать последовательности такого сопутствующего белка. Вероятность этого события исключили с помощью антител, показавших, что данные пептидные последовательности присутствуют в 5ПК.
е) Хотя клонированный ген действительно кодирует 25-аминокислотную последовательность, обнаруженную в ЯЗВ, в принципе, возможно, что этот ген кодирует такую же последовательность в другом белке. В таком случае этот другой ген с большой верояпюстью должен экспрессироваться в других клетках, чем ген Ясй. Экспериме~сты по гибридизации мРНК доказали, что кДНК предполагаемого гена 5(сй действительно кодирует 5()К.
ж) Избьпок немеченого глибурида конкурирует с меченым глибуридом за связывание с 5(!й. В результате наблюдается связывание гораздо меньшего количества меченого глибурида, и поэтому в белке с массой 140 кДа практически не обнаружено радиоактивности. з) В отсутствие избытка немеченого глибурида меченый белок с массой !40 кДа обнаружен только в присутствии предполагаемой кДНК 5ПК. Избыток немеченого глибурида конкурирует с меченым глибуридом, и меченного "П 140-кДа белка обнаружено не было. Это показывает, что кДНК кодирует связывающийся с глибуридом белок точно такой же массы, как и ЯЗ — строгое доказательство того, что клонированный ген кодирует белок ЯЗВ. и) Возможны дополнительные эксперименты.
(1) Осуществить !пзь~ Приложение Б экспрессию кДНК предполагаемого 5(ГВ в клетках СНО (клетки яичников китайского хомячка) и показать, что трансформированные клетки обладают активностью АТР-зависимых К'-каналов. (2) Показать, что клетки Н!Т с мутациями в предполагаемом гене Я/Я теряют активность АТР-зависимых К'-каналов. (3) Показать, что экспериментальные животные или лк>ди с мутациями в предполагаемом гене 5(ГВ не способны секрети ровать инсулин.
Глава 24 1. 6,1 10" нм; в 290 раз длиннее головки фага Т2. 2. Число остатков А не равно числу Т, а число С не равно числу С. Это означает, что зта ДНК пе двойная спираль, образованная при спаривания оснований. На самом деле фаг М13 имеет однонитевую ДНК. 3. М,=3810";длина200мкм; Ыэ= 55200;ЕЕ=51900. 4.
Экзоны содержат 3 п.гь/аминокислоту х 192 аминокислоты = 576 и. и. Оставшиеся 864 п. н. составляют последовательности интронов, возможно, лидирующук> или сигнальную последовательность, а также другие некодирую1цие участки ДНК. 5. 5000 п. н, а) Не изменяется; Е4 не может изменяться без разрыва одних и образования других ковэлентных связей в ДНК. б) Становится неопределенной.
По определению кольцевая ДНК с разрывом в одной нити не имеет И. в) Снижается. В присутствии АТР гираза раскручивает ДНК. г) Не изменяется, если при нагревании в нитях ДНК пе произошло разрывов. 6. Чтобы ЕЕ не изменилось, топоизомераза должна вводить одинаковое число положительных и отриг!ательных витков. 7. о = — 0,067; вероятность >70;4. 8. а) Неопределенное; нити никированной ДНК могут бьжь разъединены и, следовательно, не имеют Ы б) 476; в) 476; ДНК уже релаксирована, так что топоизомераза не вызывает никаких изменений.
г) 460; каждое действие ДНКч иразы в присутствии АТР снижает Е)г на две единицы. д) 464; эукариотическая топоизомераза ! повышает ЕЕ слабо закрученной или имеющей отрицательные супервитки ДНК на одну единицу. е) 460; связывание с нуклеосомой не приводит к разрыву нитей ДНК и поэтому не влияет на значение Ея. 9. Основная структурная единица хроматина повторяется примерно каждые 200 п. н; ДНК доступна для нуклеазы только через интервалы 200 п. н. Краткой обработки недостаточно для расщепления ДН К во всех доступных точках, поэтому возникает лестница фрагментов ДНК, масса которых кратна 200 и. н.
Толщина полос ДНК говорит о некоторой вариабельности расстояний между участками расщепления. Например, не все фрагменты в самой нижней полосе имеют размер точно 200 п. н. 10. Правая спираль характеризуется положительным значением Е(г, левая спираль (как в Х-ДНК) — отрицательным значением. Снижение Е4 замкнутой кольцевой В-ДНК путем введения отрицательных витков облегчает образование участков Х-ДНК в некоторых последовательностях.
(О последовательностях, способствующих образованию Х-ДН К, говорится в гл. 8.) 11. а) Обе нити должны быть замкнуты ковалентпыми связями в кольцо, либо ограничены на концах каким-либо другим образом. б) Образование крестообразных структур, левозакрученной Х-ДНК, плектонемических или солепоидальных структур, а также раскрученных молекул ДНК. в) Топоизомераза П или ДНК-гираза Е. со!й г) Фермент связывается с ДНК в точках пересечения двунитевой последовательности, расщепляет обе нити одного из пересекающихся сегментов, протягивает другой сегмент через разрыв, а затем зашивает разрыв. В результате значение Е/г уменьшается на 2.
12. Центромера, теломеры и автономно реплицируюшиеся последовательности или точка начала репликации. 13. Вактериэльный нуклеоид организован в видедоменов длиной примерно по 10 000 п. н. Расщепление рестриктазой приводит к релаксации ДНК внутри домена, но не за его пределами. Это повлияет на экспрессию всех генов домена, зависящую от топологии ДНК, но не на гены в других доменах.
14. в) При соединении концов ДНК с образованием замкнутого релаксированного кольца, некоторыс типы ДНК полностью релаксированы, тогда как другие все же имеют некоторое количество левых или правых витков. Это и объясняет распределение топоизомеров относительно наиболее расслабленной формы. б) Положительная суперспираль.
в) ДНК, находящаяся в релаксированном состоянии даже при добавлении красителя, имеет разрыв в одной или в обеих нитях. В ходе выделения кольцевой ДНК в некоторых молекулах неизбежно появляется некоторое количество разрывов. г) Примерно — 0,05. Это значение определяется просто путем сравнения нативной ДНК с образцами с известным значением о. На обоих гелях нативная ДН К движется ближе всего к образцу с о = — 0,049.
15. а) При нерасхождении хромосом одна дочерняя клетка и все ее потомство имеют две копии синтетической хромосомы и окрашены в белый цвет. Другая дочерняя клетка и ее потомство не имеют копии синтетической хромосомы и окрашены в 103 1 ц10' о 1О-' 10-3 ЬО 10 4 5'-конец ОР-ОР-ОР- 10-4 0 о-о-о- О Н РР, Π— Р=О О ОН Н ачконец СР)-СР)пСР)- Глава 25 О Н "Π— Р=О О Н О вЂ” Р=О О Н О вЂ” Р=О О зчконец: О Н О вЂ” Р=О О 3'-конец.
красный цвет. Поэтому половина колонии белая, а половина красная. б) При потере хромосомы одна дочерняя клетка и ее потомство имеют одну копию синтетической хромосомы и окрапгены в розовый цвет. Другая дочерняя клетка и ее потомство не имеют копии синтетической хромосомы и окрашены в красный цвет. В результате получаются красно-розовые колонии. в) Функциональная центромера должна иметь размер менее 0,63 т. п. и., поскольку все фрагменты больше этого размера более стабильны при митозе, г) Теломеры нужны для полной репликации линейных молекул ДНК, кольцевая ДНК может реплицироваться без них. д) Чем крупнее хромосома, тем точнее осуществляется процесс сегрегации.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
