В.Л. Быков - Цитология и общая гистология (Функциональная морфология клеток и тканей человека) (1120985), страница 3
Текст из файла (страница 3)
ог»)»оэ — правильный и сЬгоша - краска). Кислые красители (например, эозин, эритрозин, оранж О, лихтгрюн) связываются с различныии структурами, несущими положительный заряд. Способность окрашиваться кислыми красителями называется оксифилией, или ацидофилией (ог греч.
охуэ или лат. асана - кислый и»реч. р!пйа - любовь), а структуры, связьвающие эти красители - пксифильными, или ацидофильными. Оксифилия свойственна цитоплазме клеток (в особенности, при высоком содержании в ней митохондрий и некоторых белковых секреторвых гранул), эритроцитам (благодаря высокой концентрации в них гемоглобина). Оксифильно окрашивается питоплазма мышечных клеток сердца (кардиомиоцитов), мьппечных волокси скелетной мускулатуры. некоторые компоненты мсжклеточного вещества (например, ко»иагеновые волокна). - 1б- Комбинированное окрашивание препаратов основано на использовании как основных, так и кислых красителей.
обладавлцих контрастирувяцнми цветами. Наиболее распространенная обшеобзорная окраска гистолопг»еских преваратов сочетает гемшлоксиэин (основной краси- гель) с эпзином (кислым красителем). Избирптельное (элективнпе, специальное) окрпшивпние препаратов, в отличие от пбщеобзпрных методов, выявляет не общую морфолоп»ческую картину, а какие-го конкретные структуры, обладающие высоким сродством к определенным красите»»ям.
Так, для избирательного выявления в тканях эластических элементов (волокон, мембран) применяют окраску ирсеинпм: жировые клетки и липидные включения в различных клетках окрашивюот судпном 111 или четырехпкисью огмил; ретикуллрные волокна, нервные и некоторые эндпкринные клетки - импрегнацией (от лат. ппргедпайо - пропнтьвание) солями серебро. Способы избирательного вь»явления отдельных ткавевых и клеточных структур тесно смыкаются с цито- и гистпхииическими методами„обладающими более высокой специфичностью вьивленвя конкретных ве»цеств (см. ниже). б.
Заключение (монтирование) срезов в прозрачную застывающую консервирующую среду — смолу хвойных деревьев (бальзам) нли синтетические среды - осуществляется после их обезвоживания и просветления. На постоянном гистологическом препарате срез ткани располагается на предметным стекле, сверху закрьгг вокровным стеклом <см. рис. 2-1) и окружен заливочной средой, обладающей коэффициентом преломления световых лучей, близким к таковому у стекла. Взятие материала для диагностического цигологического исследования обычно осуществляется путем получения мазка, ,т»скоба, отпечатка или смыва с поверхности доступных слизистых оболочек (например, полости рта или влагалища) и кожи.
а при испольювании современных клинических методов эндоскппии - и с поверхности глубоко лежащих слизистых обояочек (налример, пищевода. же»удка, мочевого пузыря). Материал может быть получен также методом ппнкпигпльнпй аспирационнпй биопсии - пушм пункции тонкой иглой л отсасывания (аспирации - от лат. а»1 - к и эр(гаге - дуть) клеточного .убстрата из определенного органа или его участка (например, пвполщной железы или лимфатического узла).
В некоторых случаях пользугся толстой иглой (например, для получения костного мозга). Подготовка материала к цитологическому исследоеанию включает. "его нанесение тонким слоем нп предметное стекло, ,ьиксацию, пкрашивание и заключение (при необходимости приготовле- ния постоянного препарата). Указанные этапы аналогичны таковьш при приготовлении гистолопргеского препарата (см.
выше), однако благодаря тонкости мазка обычно требуют значительно меньше времени. ЦИТОХИМИЧЕСКИЕ И ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Цито- и гистохимичгскиг методы исследования направлены на выявление в клетках и тканях конкретных химических веществ (например, железа, кальпия, белков, липидов, нуклеиновых кислот, гликогена, ферментов) или химических групп (на)ример, альдегвдных.
сульфгидрильных, амвнсярупп). Они основаны на специфичгскаи связыватщи красителей с определенными химическими соединениями (например, РНК и ДНК) или образовании окрашенных продуктов из неокрашенных в участке расположения искомого вещества (например„фермента) в результате пютохимической реакции его выявления. Материал, предназначенный для изучения цито- и гистохимическими методами, следует фиксировать способом, максимально сохраняющим выявляемое вещество; предпочтительно в этих пезгях использовать замороженный нефнксированньй материал.
Методами пито- и гистохимии изучавп распределение и оценивают содержание в клетках и неклеточных компонентах тканей веществ, относящихся к различным грусшам - ДНК и РНК, белков, аминокислот, липидов, углеводов, минеральных веществ, оценивают активность ферментов. ШИК- ияи (РА$)-реакция - пример одного из наиболее широко используемых гистохимических методов. Название метода происходит от сокращения терминов Шиффа (реактив) - Иодная Кислота (по англ. Репосйс Ас)д ЯсИй). Метод используется вля вьгявления соединений, богатых углеводными группами - тпикогена, гликопротеинов. Мукопротеипов, протеоыппанов и др.
Он основан на окисленви водной кислотой пгароксильиых групп сахаров до вльдегидных, с которыми связывается бесцветный реактив Шиффа (содержащий фуксин), преврмцаясь в стабильное соединение красного цвета. ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКИЕ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Иммуноцитохимичгекив и иммуногистохимичгские методы обеспечивавп наиболее специфическое выявление веществ в клетках и тамгах. Они основаны на обработке мазков или срезов маркированны- -)8- ми специфическими антитглами к выявляемому веществу, которое служит антигеном. При использовании прямого метода происходит реакция специфического связыванвя маркированных антител непосредственно с искомым веществом (рис.
2-2). При непрямом (более чувствительном) методе пемаркироваивъю первичные антитела взаимодействуют с искомым аюпигенам. а далее их выявляют с помощью вторичных меченых антител (для которых первичные служат антигенами). Маркировка антител производится путем их коньюга)щи с флюоресцентными красителями (родамином, флюореспеином), ферментами (пероксидазой хрена, гпелочвой фосфатазой, которые далее выявляются питохимически) или злгктронно-плотными частицами (ферритином, коллоидным золотом). )иО ~ у((т мо г влт ) ~-~ Х Т,,Р;~Р ( ))")М~ =( м= ~ — Яà — ~ гв В Рис. 2-2.
Нммуноцитокимическсе выявление веществ в «лвгквк и тквнлк. 1 - прямой метой: специфические антитела (АТ) к исследуемому веществу - ентигену (АГ) - канъюгируют с маркером (М), получая маркированные АТ (МАТ), которые специфически свявьмеются с искомым АГ. 2 - непрямой метоК (в) клетки (ткань) обрабатывают первичными (немечеными) АТ (ПАТ), ПАТ специфически связываются с АГ, после чего клетки обрябетыееют вторичными мечеными АТ (ВМАТ), полученными путем конъюгвции вторичных (немеченык) АТ (ВАТ) с М (б). Поскольку Лля ВАТ роль АГ играют ПАТ, они специфически свявыевются с ними (в), тем самым косвенно выявляя и искомый АГ. Чувствительность непрямого методе выше, чем прямого, твк квк он обеспечивает связывание большего количестве маркера с выявляемым веществом.
Очевидно, что фиксация и проводка материала должны обеспечить сохранность искомого вещества. С помощью описанных методов производвтся идентификация клеток различных типов по их маркерным признакам, изучаются синтетические и сгкргторные процессы, выявляются гормоны и их рецепторы. МЕТОД ГИБРИДИЗАЦИИ 1И 31Т0 Метод гибридизации т ппг позволяет выявить определенную последова>пельность нухлеотидов в молекуле РНК или ДНК и благодаря эюму изучить локализацию генов и продуктов их транскрипции. Он основан на специфическом связывании (гибридизации) участков ДНК или РНК с соответствуюшими маркированными фрагментами РНК или ДНК (зондами), кспорые содержат последовательности нуклеотидов, комплвментарные искомым.
Суправитальная окраска основана на связывании некоюрых красителей с компонентами живых клеток, извлеченных из организма. Так, митохондрии окрюпиваются янусом зеленым, нервные клетки и волокна - метиленовыми синим, фюосомы нейтрофильных гранулоциюв крови- нейтральным красным. Незрелые эритроциты (ретикулоциты) идентифицируются путем суправитальной окраски крезиловым или метиленовым синим (см. ~лаву 7).
Метод применяется в специальных це>их. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ КЛЕТОК, ТКАНЕЙ И ОРГАНОВ ВНЕ ОРГАНИЗМА МЕТОД АВТОРАДИОГРАФИИ Метод авторадиографии (или радиоавтографии) основан на выявлении локализации в тканях введенных в них веществ, меченных радиоактивными изотопоми. Меченое всшеспю вводится непосредственно в организм экспериментального живопюго или в инкубационную среду ш ч(по, в которую помешают свежеудалспный кусочек ткани (в последнем варианте допустимо использование тканей человека). Срезы материала, содержашего меченое вешество, в темноте покрывают фогпоэмуяьсией, которая после определенной экспозиции оказывается засвеченной в уча>стхах расположения Радиоактивного изотопа.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
