Н.А. Юрина, А.И. Радостина - Гистология (1112199), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Этот индекс особенно высок в нормально растущих тканях, а также повышается в опухолях. Поэтому подсчет числа митозов является необходимым для оценки регенерации, действия различных лекарственных препаратов и др. Разновидностью мнтоза является м е й о з (схема 2) — деление созревающих половых клеток, которое приводит к уменьшению (редукции) в 2 раза числа хромосом, т. е. формированию гаплоидного числа хромосом (у человека 23 хромосомы). Мейоз включает два следующих друг за другом деления с короткой интерфазой между ними: 1 — редукционное (число хромосом редуцируется в 2 раза) и П вЂ” зквационное (обычный митоз).
Для редукционного зо деления характерна длинная профаза, состоящая из 6 фаз, когда происходит соединение гомологичиых хромосом в пары и обмен наследственным материалом. Кроме обычного митоза, существует эндомитоз, когда генетический материал ядра увеличивается в 2 раза или более, но тело клетки ие разделяется. В результате может образоваться клетка с двумя ядрами или с многими ядрами или клетки с полиплоидными ядрами, содержащими тетраплоидный (4 и) или октаплоидпый (о и) набор хромосом. Такие клетки часто встречаются в печени.
В клетках костного мозга — мегакариоцитах — имеются гигантские ядра, содержащие набор хромосом, соответствующий 32 и. В тканях и органах постоянно присутствуют отмирающие клетки, что является естественным жизненным процессом. Число разрушающихся клеток может увеличиваться с возрастом, при различных воздействиях (радиация). Для разрушающихся клеток характерны конденсация хроматина, пикноз (сморщивапие) и даже распад ядер (кариорексис), уменьшение размеров и фрагментация ядрышек, а также изменения физико-химических свойств цитоплазмы (прекращение граиулообразовапия в ответ иа введение красителя), распад эидоплазматического ретикулума, набухание митохондрий и разрыв их мембран и др.
Контропьныв вопросы 1. Дайте определение клетки и назовите ее составные части. Что такое неклеючные Структуры? 2. Каковы основные положения клеточной теории? 3. Опишите строение, химический состав элементарной биологической мембраны и плазмолеммы, способы транспорта веществ и частиц через плазмолемму. 4. Какие структуры могут быль иа свободной поверхности клеток и каковы типы контактов между клетками? Каково их строение и функция? 5. Дайте определение оргаиелл и включений клетки, расскажите об их классификации.
6. Расскажите о строении органелл, участвующих в процессах синтеза, транспорта и секреции веществ. 7. Что такое эндоцитоз н экзоцитоз и какие органсллы участвуют в ферментативном расщеплении эндогевиых веществ или вещесгв, попавших в клетку извне? Опишите их строение и классификацию. К Расскюките о строении, функции, репродукции митохондрий. 9. Каковы особенности ультраструктуры центриолей, ресничек, жгутиков? 10.
Какие микроструктуры образуют цитоскслет клетки? 11. Как устроено интерфазное ядро? Расскажите о функоии всех его компонентов. 12. Расскажите о митозе и его фазах. Дайте характеристику мейозу, эндомитозу, полиплоидгп». МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В ЦИТОЛОГИИ Выявление дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) по методу Фельтена. Метод основан иа том, что при кислотном гидролизе в ДНК освобождаются реакциоииоспособные альдегидиые группы, которые затем реагируют с реактивом Шиффа. 31 Приготовление растворов: 1.
Реактив Шиффа (фуксинсерннстая кислота) по В. В. Яглову и Л. Н. Моралеву. 1 г основного фуксина растворяют в 200 мл дистиллированной воды (комнатной температуры), тщательно взбалтывая в течение 3 — 5 мин. Раствор фильтруют через бумажный фильтр. К фильтрату добавляют 10 мл 1 н.
хлористоводородной кислоты и 1 г метабисульфита калия или натрия. Раствор в хорошо закрытой колбе помещают в темное место на 24 ч. После обесцвечнвания фуксина реактив приобретает желтоватый или коричневый цвет в зависимости от качества основного фуксина. Для окончательной очистки фуксина от примесей добавляют к нему 3 — 5 расголченных таблеток карболена, хорошо взбалтывают и отфильтровывают в склянку с притертой пробкой. Если полного обесцвечивания реактива не наступает, количество карболена можно увеличить. Реактив лучше хранить в холодильнике.
С целью проверки качества полученного реактива Шиффа наливают в бюкс 5 мл реактива и добавляют в него 1 каплю неразведенного кислого формалина. Если реактив отличного качества, то он на глазах приобретает цвет основного фуксина. 2. Сернистая вода. К 200 мл дистиллированной воды добавляют 10 мл 10'/о раствора гидросульфита натрия (СНБО ) и 10 мл 1 н. раствора хлористоводородной кислоты.
Сернистая вода готовится перед употреблением и должна обладать характерным запахом диоксида серы (сернистого ангидрида (8О ). Реакцию Фельтена можно проводить йосле любого фиксатора, за исключением жидкости Буэна. Методика проведения реакции: 1)депарафинированные парафиновые срезы (см. главу 21) из дистиллированной воды переносят для гидролиза в 1 н. хлористоводородную кислоту. Гидролиз производят в термостате при температуре 60' С в течение 8 — 15 мин (кислоту следует заранее согреть); 2) проводят обработку реактивом Шиффа при комнатной температуре в течение 40 — 80 мин.
Склянка с реактивом должна быть защищена от света черной бумагой; 3) из реактива Шиффа срезы переносят в сернистую воду (ни в коем случае не споласкивая!) — 3 — 4 порции сернистой воды по 2 мин в каждой; 4) промывают в водопроводной воде в течение 10 мнн; 5) обезвожнвают в спиртах, помещают в ксилол, заключают в бальзам (методику обезвоживания и заключения см. в главе 21). Р е з у л ь т а т: ядра окрашиваются в красньй цвет.
Метод выявления РНК окрашиванием метиловым зеленьвм— пнронииом по Ъ'иие — Панпенгейму с контролем рибонуклеазой (реакция Браше). Использовать метод окраски Унны — Паппенгейма для выявления РНК было предложено Браше. При этом из пары соседних срезов один обрабатывают рибонуклеазой для разрушения РНК. Затем оба среза окрашивают метиловым зеленым — пиронином и сравнивают. Материал, окрашивающийся в красный цвет пиронином и исчезающий на срезах, обработанных рибонуклеазой, представляет собой РНК.
ДНК ядра красится метиловым зеленым в зеленый цвет. Во многих случаях, например при работе с нервной 32 тканью, обработки рибонуклеазой не требуется, так как в ней нет других, кроме РНК, компонентов, окрашивающихся пиронином. Наилучшим фиксатором для последующей реакции Браше является жидкость Карнуа.
Фиксаторы, содержащие тяжелые металлы, негодны, так как тяжелые металлы образуют с РНК устойчивые к перевариванию рибонуклеазой комплексы. Приготовление растворов. Метиловый зеленый необходимо очистить от образующегося в нем метилового фиолетового. Для этого порошок метилового зеленого заливают хлороформом (10 — 15 мл хлороформа на 0,1 г красителя), основательно взбалтывают и оставляют на 2 — 3 ч. Затем снова взбалтывают и фильтруют. Порошок красителя на фильтре еще несколько раз промывают хлороформом. Высушенный порошок используют для приготовления раствора красителя. Можно обрабатывать метиловый зеленый хлороформом и в растворе. В атом случае раствор взбалтывают с хлороформом в делительной воронке и отделяют отслаивающийся, окрашенный в фиолетовый цвет хлороформ.
Процедуру повторяют несколько раз до тех пор, пока хлороформ не перестанет окрашиваться. Для приготовления раствора метилового зеленого пиронина 0,5 г метилового зеленого растворяют в 100 мл 0,1 М раствора ацетатного буфера (см. главу 21) с рН 4,4. К атому раствору прибавляют 0,2 г пиронина. Можно использовать и другую пропись: метилового зеленого 0,15 г, пиронина 0,25 г, спирта 96' 2,5 мл, глицерина 20 мл, 0,5'/» водного раствора карболовой кислоты 100 мл. Методика окрашивания: 1) депарафинированные срезы из дистиллированной воды переносят в метиловый зеленый— пиронин на 1 — 2 ч и более (до 1 сут); 2) срезы быстро споласкивают водой, быстро обсушивают фильтровальной бумагой.„3) быстро (10 — 15 с) обезвоживают и дифференцируют в абсолютном спирте или в безводном ацетоне; 4) помещают в ксилол, заключают в баль- Р е з у л ь т а т: ядра синевато-зеленые„РНК ядрышек и цито- плазмы розового цвета. Ф е р м е н т а т и в вы й ко н т р о л ь.
Срез обрабатывают в растворе рибонуклеазы в концентрации 0,1 — 0,5 мг/мл в термостате при 37' С в течение 4 — 8 ч. Ъ'частки клетки, содержащие РНК, после такой обработки пиронином не окрашиваются. Реакция на РНК по Браше не подходит для количественного анализа. Значительно надежнее выявление нуклеиновых кислот с помощью гаплоцианина и хромовых квасцов по Эйнарсону. Выявление нуклеиновых кислот с использованием галлоциянииа и хромовых квасцов по Эйнарсоиу. При больших значениях рН галлоцианином и хромовыми квасцами окрашиваются все базофильные структуры. Специфически нуклеиновые кислоты окрашиваются при рН 0,8 — 1,75. Метод выявляет одновременно ДНК и РНК. Если необходимо выявить только ДНК или только РНК, срез предварительно обрабатывают рибонуклеазой (как указано выше) или дезоксирибонуклеазой.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
