Автореферат (1091662), страница 4
Текст из файла (страница 4)
Использование сополимерасовместносвакцинойвбольшемразведениитакжепозволилоподнятьуровеньвируснейтрализующих антител до 1:4 на 21 сутки у 50 % особей в 5 и 6 группах (Рисунок 12).% гибели животных в группе1008060402001.2.3.4.Однократное Однократное5.6.Однократное ОднократноевведениеОднократноевведениеОднократноевведениевведениевакцины в вакцины ввведениевведениевакцины вразведении разведении вакцины ввакциныввакцинывразведенииразведении1:50разведении1:100разведении1:50 с1:50 с1:100 с1:100 ссополимером сополимеромсополимеромсополимеромв дозе 50в дозе 150 в дозе 50 мкг/в дозе 150мкг/кгмкг/кгмкг/кг7.КонтрольнаягруппаРисунок 12 – Выживаемость кроликов, зараженных вирусом ГБК, после иммунизацииинактивированной вакциной в комбинации с сополимером N-винилпирролидона и 2-метил-5винилпиридина или без него.ИспользуяразличныекомбинациисополимераN-винилпирролидонаи2-метил-5-винилпиридина с инактивированной вакциной против вирусной геморрагической болезникроликов, было показано, что максимальная активация иммунитета у кроликов была достигнутаоднократным введением вакцины в разведении 1:50 с сополимером в дозе 150 мкг/кг и спасало отгибели 100 % животных опытной группы.21 3.3 Определение иммуностимулирующего действия сополимера на цыплятахпри птичьем гриппе подтип H5N1Для подбора оптимального состава вакцины цыплят разбили на 8 опытных групп по 7животных в каждой.
Сополимер и антиген вируса птичьего гриппа (ВГП) вводиливнутримышечно в область внутренней стороны бедра в объеме 0,5 мл и 1 мл соответственносогласно схеме, приведённой в Таблице 8.Через 21 день после иммунизации у всех привитых цыплят определяли в крови уровеньспецифических к вирусу гриппа А птиц антител в реакции задержки гемагглютинации (РЗГА).Результаты определения титра антигемагглютининов в сыворотке крови цыплят на 21-е суткипосле введения антигена ВГП представлены в Таблице 8.4 Одновременноевведение вакциныи сополимера вдозе 2 мг/кг иантигена ВГП вразведении 1:404,85 Введениеантигена ВГП висходнойконцентрации1,296 Введениеантигена ВГП вразведении 1:101,867 Введениеантигена ВГП вразведении 1:200,578 Введениеантигена ВГП вразведении 1:4012345671234567123456712345671:321:161:1601:161:16000000000000001,40000000Средний Титр (log2)№ группы(вакцинированныхантигеном ВГП)Средний титр (log2)1:161:321:161:2561:1281:81:41:401:160001:81:801:161:1601:400000001:16Титр антител вРЗГА в сывороткахкрови цыплят 21 сут3 Одновременноевведение вакциныи сополимера вдозе 2 мг/кг иантигена ВГП вразведении 1:201234567123456712345671234567№ животного2 Одновременноевведениесополимера в дозе2 мг/кг и антигенаВГП в разведении1:10Титр антител вРЗГА в сывороткахкрови цыплят 21 сут1 - Одновременноевведениесополимера дозе 2мг/кг ипротивогена ВГП висходнойконцентрации№ животного№ группы(вакцинированныхантигеном ВГП ссополимером)Таблица 8.
Титр антител в РЗГА к ВГП через 21 день после вакцинации.3,000,29022 В результате проведенных исследований установлено, что в группах цыплят, которымвводили сополимер в дозе 2 мг/кг, титр антигемагглютининов был в 2,3 – 10,9 раз выше, чем вгруппах животных, иммунизированным только вакциной. Таким образом, использованиекомпозиции сополимера и вакцины позволяет снизить дозу вакцины, необходимую длядостижения необходимого уровня иммунизации, в несколько раз (Рисунок 13).Средний титр (log2)5Введение только антигена4В композиции с сополимером3210Исходнаяконцентрацияантигена ВГПРазведениеантигена ВГП 1:10Разведениеантигена ВГП 1:20Разведениеантигена ВГП 1:40Рисунок 13 – Титр антител в реакции задержки гемагглютинации к вирусу птичьего гриппаподтип H5N1 через 21 день после вакцинации только антигеном или в композиции с сополимеромN-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина.***Все представленные данные, полученные как в опытах на модельных системах, так и внатуральных экспериментах на животных свидетельствуют о выраженном адъювантном действии,при этом в ходе экспериментов у животных не проявлялись реактогенные эффекты привакцинации.23 ВЫВОДЫ1) Синтезированы водорастворимые сополимеры N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина, содержащие от 25 до 55 моль% 2М5ВП.
Исследованы их физико-химическиесвойства в широком интервале значений рН, температур, концентраций и вспомогательныхсоединений. Установлено, что по физико-химическим свойствам для использования в составеветеринарных вакцин пригодны сополимеры, содержащие от 25 до 35 моль% 2М5ВП.2) Усовершенствована автоматизированная установка, позволяющая осуществить синтези контроль состава реакционной массы, а также методология синтеза сополимеров. Разработанановая методика ВЭЖХ, позволившая сократить время анализа состава реакционной массы болеечем в два раза, что позволило за счёт более частых коррекций уменьшить колебания концентрации2М5ВП в реакторе с 10 до 5 %.
Создана база эмпирических значений изменения расходовмономеров в зависимости от состава РМ и конверсии. Также успешно внедрён алгоритм расчётаобъемакорректирующеймономернойсмеси,учитывающийизменениявкинетикесополимеризации за последний час синтеза. Это позволило получать сополимеры с узкимраспределением по мономерному составу и молекулярной массе с отклонением мономерногосостава от заданного не более чем на ± 0,7 моль% 2М5ВП.3) Изучены иммуностимулирующие свойства синтезированных иммуноадъювантов всоставе ветеринарных вакцин. Представленные данные, полученные в опытах in vivoсвидетельствуют о выраженном иммуностимулирующем действии сополимеров.
Введениеморским свинкам сополимера как одновременно, так и за 14 дней до вакцинации повышалоэффективность вакцины из штамма 55-ВНИИВВиМ B. anthracis против возбудителя сибирскойязвы в 2,0 – 2,9 раза. Использование комбинации сополимера с инактивированной вакцинойпротив вирулентного вируса геморрагической болезни кроликов штамм «В-87» позволилосущественно активировать иммунитет в сравнении с консервативным использованием вакцин иувеличить титр специфических антител в 4 раза по сравнению с животными, вакцинированнымитолько вакциной.
В результате проведенных исследований установлено, что в группах цыплят,которым вводили сополимер и антиген вируса птичьего гриппа титр антигемагглютининов был в2,3 – 10,9 раз выше, чем в группах животных, иммунизированных только вакциной.4) Разработаны и обоснованы дозировки иммуноадъювантов, полученных на основесополимеров 2М5ВП и N-ВПД с вакцинами. Показано, что оптимальная схема вакцинацииморских свинок является совместное введение вакцины и адъюванта в дозе 2 млн.
спор/мл и 1мг/кг соответственно. Максимальная активация иммунитета у кроликов была достигнутаоднократным введением вакцины ВГБК в разведении 1:50 с сополимером в дозе 150 мкг/кг.24 Одновременное введение сополимера дозе 2 мг/кг и антигена ВГП с исходным титром 1:512 ГАЕ50/см3 позволило создать наиболее высокий уровень специфических антител у цыплят.СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИРаботы, опубликованные в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях,определенных ВАК1. Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Сакаева И.В., Кочкина (Черта) Ю.В., Суслов В.В.«Синтез и молекулярно-массовые характеристики сополимеров N-винилпирролидона и 2-метил-5винилпиридина. // Химико-фармацевтический журнал.
– 2012. – Т. 46. - № 8. – С. 19 – 22.2. Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Сакаева И.В., Кочкина (Черта) Ю.В., Суслов В.В.,Зайцев М.А. Количественное определение в водных растворах физиологически активныхсополимеров N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина. // Химико-фармацевтическийжурнал. – 2013. – Т. 47. – № 10. – С. 54 – 56.3. Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Кочкина (Черта) Ю.В., Суслов В.В., Иванова Т.Е.,Малиновская Г.О. Влияние различных факторов на растворимость сополимеров N-винилпирролидона и2-метил-5-винилпиридина в воде. // Химико-фармацевтический журнал. – 2013.
– Т 47. – № 6. – С.33 – 34.4. Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Кочкина (Черта) Ю.В., Суслов В.В., Жаворонок Е.С.КоличественноеопределениесоотношениямономерныхзвеньеввсополимерахN-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина методом спектрофотомерии. // Вестник МИТХТ. –2014. – Т. 9. – №1. – С.
64 – 67.5. Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Кочкина (Черта) Ю.В., Ярцев Е.И., ЯковлеваТ.А. Модификация противоопухолевого действия цитостатических препаратов сополимером Nвинилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина. // Химико-фармацевтический журнал. – 2017. – Т.51. – № 7. – С. 3 – 7.6. С.А.Еремин Д.В., Панов А.В., Кочкина Ю.В., Селянинов Ю.О., Зубаиров М.М., КедикИммуностимулирующеевинилпиридинапридействиявируснойсополимерагеморрагическойN-винилпирролидонаболезникроликов.и//2-метил-5Российскийаллергологический журнал. – 2017. – №1. – С.
39 – 41.Патенты1. Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Сакаева И.В., Кочкина (Черта) Ю.В.Установка для получения сополимеров на основе N-винилпирролидона. Патент на полезнуюмодель №110743 от 27.11.2011.25 2. Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Сакаева И.В., Кочкина (Черта) Ю.В., КотоваЮ.А. Установка для очистки сополимеров на основе N-винилпирролидона № 110744 от27.11.2011.3. Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Сакаева И.В., Кочкина (Черта) Ю.В.,Применение сополимера на основе N-винилпирролидона в качестве средства, потенцирующегоанальгетический эффект морфина гидрохлорида № 2471491 от 19.10.2011.Тезисы докладов1.
Еремин Д.В., Кедик С.А., Панов А.В., Малиновская Г.О. Синтез и исследование сополимераN-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина с различным мономерным составом дляопределения оптимальных характеристик при создании готовой лекарственной формы. //Международнаянаучно-практическаяконференция«Фармацевтическиеимедицинскиебиотехнологии». – г. Москва, 2012 г.
– С. 98.2. ЕреминД.В.,КедикС.А.,ПановА.В.,Кочкина(Черта)Ю.В.Модификацияпротивоопухолевого действия цитостатических препаратов сополимерами N-винилпирролидона и2-метил-5-винилпиридина.//Международнаянаучно-практическаяконференция«Фармацевтические и медицинские биотехнологии». – г. Москва, 2012 г.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
