Автореферат (Сравнительная оценка гемостатической активности нового соединения на основе фибрин-мономера и его композиций при системном и локальном применении (экспериментальное исследование)), страница 2

Состоит извведения, трёх глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы.Содержит 19 таблиц и 16 рисунков. Список литературы включает 73 отечественных и 98 работзарубежных авторов.ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериалы и методы исследованияЭкспериментальная часть работы выполнена на 128 кроликах породы «Шиншилла»обоего пола массой 3,0–4,5 кг, которые были распределены по сериям и группам в соответствиис задачами исследования. Все эксперименты проводились в соответствии с Европейскойконвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иныхнаучных целях (ETS № 123) от 18.03.1986, Страсбург.

Животные приобретались в филиале«Электрогорский» ФГБУН НЦБМТ ФМБА России. Приём животных в биоклинику производилипри наличии ветеринарного свидетельства.В серии острых экспериментов на животных исследовалась и сопоставлялась зависимостьгемостатической активности от массовой доли соединения на основе фибрин-мономера привнутривенном введении в дозах 100; 250; 500; 1000; 2500; 5000 мкг/кг. Исследоваласьгемостатическая активность при совместном применении соединения на основе фибринмономера и ε-аминокапроновой кислоты при их внутривенном введении в дозах 250 мкг/кг и0,75 мл/кг соответственно.

Проводилась сравнительная оценка гемостатической эффективностисоединения на основе фибрин-мономера и препарата эптаког альфа активированный при ихвнутривенном введении в дозах 250 мкг/кг и 90 мкг/кг соответственно.Следующим направлением данной работы было изучение влияния соединения на основефибрин-мономера на гемостатическую активность в условиях экспериментальной кровопотери(5–7 % и 7–20 % от ОЦК) и при замещающей инфузии 0,9 % раствором хлорида натрия в объёме7 % от ОЦК.Задачей следующих острых экспериментов было изучение локального применениякомпозиций на основе фибрин-мономера в форме порошка и губки на экспериментальной моделираневой поверхности.В качестве основных критериев эффективности гемостатического вещества были принятыгемостатическая активность (ГАt) по времени остановки кровотечения (ВОК) и гемостатическаяактивность по объёму кровопотери (ГАv).7Гемостатическую активность по времени остановки кровотечения определяли поформуле:ГА = (1 − 2) × 100 %, где1t2 — ВОК при наложении марлевого тампона на раневую поверхность (экспериментальнаяточка), с,t1 — ВОК при наложении марлевого тампона на раневую поверхность (контроль), с.Гемостатическую активность по объёму кровопотери определяли по формуле:ГА = (1 − 2) × 100 %, где1V2 — объём кровопотери при наложении марлевого тампона на раневую поверхность(экспериментальная точка), мл,V1 — объём кровопотери при наложении марлевого тампона на раневую поверхность(контроль), мл.Оба параметра определяли для каждой опытной точки (0 (контроль), 30, 60 и 120 минутпосле начала эксперимента).

За окончательный результат испытаний принимали среднееарифметическое каждой из опытных точек исследования. Оценка достоверности полученныхрезультатов производилась в программе Prism 6 (GraphPad Software). Статистический анализполученных данных проводили в соответствии с общепринятыми методами вариационнойстатистики с использованием t-критерия Стьюдента. Различия между сравниваемымивеличинами считали достоверными при уровнях значимости не менее 95 %.Определение гемостатической активности соединения на основе фибрин-мономера привнутривенном введении кроликам проводили по методике, представленной в рекомендованномФармкомитетом для доклинической оценки гемостатического действия потенциальныхлекарственныхсредств«Руководствопопроведениюдоклиническихисследованийлекарственных средств» (Миронов А.

Н. 2012).В экспериментах in vitro исследовалось влияние порошка фибрин-мономера на значимыепараметры сосудисто-тромбоцитарного гемостаза. Сосудисто-тромбоцитарный гемостаз изучалиспомощьюактивированного(отражающегопротромбиновогоинтегральноевремени —парциальногосостояниеПВтромбопластиновогогемостаза(отражающегопослевремени —контактнойсуммарнуюактивностьАПТВактивации),факторовпротромбинового комплекса, продуцируемых печенью), тромбинового времени — ТВ иконцентрации фибриногена (отражающих уровень фибриногена и состояние финального этапафибринообразования).

Исследована агрегационная способность тромбоцитов по методу G. Born(характеризующая способность тромбоцитов образовывать конгломераты) и определена8концентрация D-димера в плазме крови (классический маркер фибринообразования ифибринолиза).Результаты исследованияПервым направлением данной работы являлось экспериментальное изучение зависимостигемостатической активности от массовой доли соединения на основе фибрин-мономера привнутривенном введении в дозах 100; 250; 500; 1000; 2500; 500 мкг/кг дозы и определениеD-димеров в плазме крови. В результате анализа полученных данных была выбрана оптимальнаядоза для дальнейшего изучения (250 мкг/кг).Второе направление работы заключалось в оценке гемостатической активностисоединения на основе фибрин-мономера у интактных кроликов при внутривенном введении ввыбранной дозе; исследовании гемостатической активности при совместном применениисоединения на основе фибрин-мономера и ε-аминокапроновой кислоты при их внутривенномвведении в дозах 250 мкг/кг и 0,75 мл/кг соответственно в условиях эксперимента на животных;сравнительной оценке гемостатической эффективности соединения на основе фибрин-мономераи препарата эптаког альфа активированный при их внутривенном введении в дозах 250 мкг/кг и90 мкг/кг соответственно.Следующим направлением данной работы было изучение влияния соединения на основефибрин-мономера на гемостатическую активность в условиях экспериментальной кровопотери(5–7 % и 7–20 % от ОЦК) и при замещающей инфузии 0,9 % раствором хлорида натрия в объёме7 % от ОЦК.Задачей четвёртого направления данной работы было изучение локального применениякомпозиций на основе фибрин-мономера в форме порошка и губки на экспериментальной моделираневой поверхности.

Определение влияния фибрин-мономера на значимые параметрыгемостаза (ТВ, ПВ, АПТВ, концентрация фибриногена, агрегация тромбоцитов).Сравнительная оценка гемостатической активности соединения на основе фибринмономера в условиях экспериментальной геморрагии у интактных кроликов при еговнутривенном введении в различных дозах. Выбор оптимальной дозыВ ходе анализа результатов экспериментов выявлены две дозы соединения на основефибрин-мономера, при внутривенном введении которых показатели гемостатической активностибыли наиболее выражены. При внутривенном введении соединения на основе фибрин-мономерав дозах 250 мкг/кг и 2500 мкг/кг гемостатическая активность по времени остановки кровотечениячерез 30, 60 и 120 минут наблюдения составляла 69,79±7,68; 56,90±7,35; 63,70±6,60 и 55,82±2,97;54,65±3,26; 40,64±0,83 % соответственно.

Аналогичная картина прослеживалась у показателейгемостатической активности по объёму кровопотери. Так, при внутривенном введениисоединения на основе фибрин-мономера в дозах 250 мкг/кг и 2500 мкг/кг гемостатическая9активность по объёму кровопотери составляла через 30, 60 и 120 минут наблюдения 67,06±9,02;68,49±9,87; 81,42±7,85 и 62,33±8,06; 75,95±6,72; 39,36±4,09 % соответственно.Для уточнения выбора дозы соединения на основе фибрин-мономера, совместно сАлтайским филиалом ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России (директор филиалад. м. н., профессор Момот А.

П.) мы провели оценку концентрации D-димеров в плазме кровипосле внутривенного введения соединения на основе фибрин-мономера в различных дозах вэксперименте на кроликах.Таблица №1Оценка концентрации D-димеров в плазме крови после внутривенного введения соединения наоснове фибрин-мономера в различных дозах в условиях экспериментальной геморрагии, (Х±m)Концентрация D-димеров в плазме крови, нг/млСоединение наСоединение Соединение Соединение СоединениеСоединение наВремя,основена основена основена основена основеоснове фибринминутфибринфибринфибринфибринфибринмономерамономерамономерамономерамономерамономера250 мкг/кг100 мкг/кг500 мкг/кг 1000 мкг/кг 2500 мкг/кг 5000 мкг/кгn=11n=4n=5n=5n=5n=6Через 60166,7212,5133,3175,01255,61150,0минут±12,1*±27,9*±15,2*±19,57±98,6*±102,3* — статистически достоверное различие между данными по отношению к контролюпри р < 0,05.Анализ результатов показал, что наиболее эффективными дозами соединения на основефибрин-мономера для статистически значимого уменьшения кровопотери являются 250 мкг/кг и2500 мкг/кг.

В то же время, дозы соединения на основе фибрин-мономера выше 1000 мкг/кгобладают значительной тромбогенностью, которая оценивалась по нарастанию концентрацииD-димеров в плазме крови, являющихся классическим маркером фибринообразования ифибринолиза.

Таким образом, в качестве наиболее эффективной и безопасной для дальнейшихэкспериментов была выбрана доза соединения на основе фибрин-мономера 250 мкг/кг.Определение гемостатической активности соединения на основе фибрин-мономера уинтактных кроликов в условиях экспериментальной геморрагииДля определения гемостатической активности соединения на основе фибрин-мономеравыделили 2 группы кроликов. Контрольной группе животных внутривенно вводили 0,9 %раствор хлорида натрия в объёме, равном объёму соединения на основе фибрин-мономера,кроликам экспериментальной группы внутривенно вводили соединение на основе фибринмономера в дозе 250 мкг/кг массы тела.Результаты исследования показали, что при внутривенном введении 0,9 % растворахлорида натрия было отмечено незначительное увеличение гемостатической активности повремени остановки кровотечения через 30, 60 и 120 минут, которое составляло 17,49±2,22;1019,85±1,63; и 17,89±1,98 % соответственно.

При внутривенном введении животным соединенияна основе фибрин-мономера в дозе 250 мкг/кг было зафиксировано значительное увеличениегемостатической активности по времени остановки кровотечения на протяжении всего периоданаблюдения,значениякоторойсоставляли69,79±7,68;56,90±7,35и63,70±6,61 %соответственно.Достоверное увеличение гемостатической активности по объему кровопотери послевведения соединения на основе фибрин-мономера было выявлено на всех временныхпромежутках. Так, через 30 мин после введения соединения на основе фибрин-мономерагемостатическое действие увеличилось и составило 67,06±9,02 %, в то время как у контрольнойгруппы оно было 10,54±1,68 %. После 60 мин наблюдения за экспериментальными животнымигемостатическоесоответствующийдействиепараметрсоставлялобылужеравен68,49±9,87 %,34,60±5,34 %.аКу120контрольнойминутамгруппынаблюдениягемостатическая активность по объёму кровопотери у контрольной группы была равна54,98±7,26 %, в то время как у группы, которой вводилось соединение на основе фибринмономера, она составляла 81,42±7,85 %.Сравнительная оценка результатов данной серии экспериментов продемонстрировалавысокую гемостатическую активность при внутривенном введении соединения на основефибрин-мономера в дозе 250 мкг/кг.