Диссертация (Клиническое значение эндотелиальной дисфункции в развитии акушерских и перинатальных осложнений), страница 18

отклонение,±m0,8418101,6112,698,59,47180,010,0300,006180,0030,010,0010,0013* Данные опубликованы в статье – Оценка степени тяжести эндотелиальной дисфункции приосложнениях беременности /А.В.Миронов, А.М.Торчинов, М.М.Умаханова и др.//Трудныйпациент. – 2018. - Т.16, №8-9. – С. 30-36.112В основной группе показатели состояния эндотелия оценены у 33беременных. Показатель С-реактивного белка составил 3,3 мг/мл.

Диапазонколебания показателя 0,4-10,3 мг/мл. Стандартное отклонение концентрации Среактивного белка в сыворотке крови составило ±2,12 мг/мл.ИзмерениефакторафонВиллебранда продемонстрировалосреднийрезультат 120,0%. Диапазон колебания показателя составил от 97,5% до 165,8%,стандартное отклонение ±20,18%.При исследовании уровня микроальбуминурии у беременных основнойгруппы получен средний показатель 0,02 мкг/мл, диапазон колебания 0,01-0,04мкг/мл, стандартное отклонение этого показателя составил ±0,011 мкг/мл.Коцентрация белка р53 в сыворотке крови у женщин несостоявшимсявыкидышем в I триместре беременности составил 0,01±0,016 Ед/мл. Диапазонколебания данного показателя 0,011-0,069 Ед/мл.

Стандартное отклонениеконцентрации в сыворотке крови белка р53 в основной группе составило ±0,011Ед/мл . Результаты исследования внесены в таблицу 22.Таблица22–Биохимическиемаркерыфункцииэндотелияубеременных основной группы.ПараметрС-реактивныйбелок, мг/млФактор фонВиллебранда (%)М/альбуминурия(мкг/мл)Белок р53 (Ед/мл)КоличествоизмеренийСреднее,ММахMin+m333,310,30,42,1233120,0165,897,520,18330,020,040,010,011330,010,06900,011Таким образом, при изучении биохимических маркеров нарушения функцииэндотелияпродемонстрированоувеличениевсехизучаемыхпоказателейсыворотки крови и мочи в основной группе.

Результаты сравнения представленыв таблице 23. Расчет достоверности различий исследуемых признаков проведен спомощью критерия Манна-Уитни.113Таблица 23 – Сравнительная характеристика биохимических параметров висследуемых группахГруппаПоказательУровеньС-реактивный белок, мг/млОсновная(n=33)3,3±2,12Контрольная(n=18)1,8±0,840,0056Фактор фон Виллебранада,%120,0±20,18101,6±9,470,0005Микроальбуминурия, мкг/мл0,02±0,0110,01±0,0060,0003Белок р53, Ед/мл0,01±0,0110,003±0,00130,0009рСредний показатель выскочувствительного С-реактвиного белка составил3,3± 2,12 мг/мл в основной группе, и 1,8± 0,84 мг/мл – у беременных контрольнойгруппы (р=0,0056) (рисунок 20).С-реактивный белок, мг/мл12,5107,552,50Основна яКонтрольнаяГруппаРисунок 20 – Высокчувствительный С-реактвиный белок в исследуемыхгруппах.Средний показатель параметра фактора фон Виллебранда у беременныхосновной группы также превысил соответсвующий результат в контрольнойгруппе: 120,0±20,18% в группе с неразвивающейся беременностью, и 101,6±9,47%- в контрольной группе (р=0,0005) (рисунок 21).114Фактор фон Виллебранада,%1801601401201008060Основна яКонтрольнаяГруппаРисунок 21 – Фактор фон Виллебранда в исследуемых группах.Показатель микроальбуминурии был почти в 2 раза выше в основнойгруппе: в группе с неразвивающейся беременностью этот показатель составил0,02±0,011 мкг/мл, и 0,01±0,006 мкг/мл – в контрольной группе (р=0,003)(рисунок 22).Микроальбуминурия, мкг/мл0,050,040,030,020,010Основна яКонтрольнаяГруппаРисунок 22 – Микроальбуминурия в исследуемых группах.Маркер апоптоза белок р53 сыворотки крови в основной группе составил0,01±0,011Ед/мл, и 0,003 ± 0,0013 Ед/мл в контрольной группе (р=0,009) (рисунок23).1150,09Белок р53, Ед/мл0,0750,060,0450,030,0150Основна яКонтрольнаяГруппаРисунок 23 – Белок апоптоза р53 в исследуемых группах.Такимобразом,осуществленанализтрадиционныхбиохимическихмаркеров эндотелиальной дисфункции – высокочувствительного С-реактвиногобелка, фактора фон Виллебранда и микроальбуминурии, а также маркера апоптоза– белка р53.

Полученные данные продемонстрировали статистически достоверноеотличие изученных параметров в сравниваемых группах беременных. Упациенток с неразвивающейся беременностью зафиксировано повышениетрадиционныхбиохимическихмаркеровэндотелиальнойдисфункции–высокочувствительного С-реактивного белка, фактора фон Виллебранада имикроальбуминурии.Увеличениеконцентрациибелкар53вгруппеснесостоявшимся выкидышем подтверждает участие апоптоза не только впатогенезе неразвивающейся беременности, но и в механизме пораженияэндотелия.

Проведенное исследование биохимических маркеров эндотелиальнойдисфункции демонстрирует участие данной патологии в инициации процессовнарушения гестации, а также актуализирует изучение дисфункции эндотелия вракурсе поиска новых путей снижениязаболеваемости.материнской и перинатальной116ГЛАВА IV.

СРЕДНИЙ ЭКВИВАЛЕНТНЫЙ ДИАМЕТРДЕСКВАМИРОВАННЫХ ЭНДОТЕЛИОЦИТОВ В ДИАГНОСТИКЕЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ У БЕРЕМЕННЫХ4.1. Анализ показателей биомаркеров дисфункции эндотелия убеременныхДоказано, что основным механизмом поражения эндотелиоцитов приэндотелиальнойдисфункцииморфологическимиявляетсякретериямиапоптозкоторого[27;являются33;40;88;уменьшение123],объемацитоплазмы и ядра с последующей фрагментацией клетки и формированиемапоптозных телец [71]. В ходе этого процесса изменяются геометрическиепараметры пораженной клетки.

В случае выраженной степени дисфункцииэндотелия большая часть десквамированных эндотелиоцитов фиксируется примикроскопии в стадии блеббинга или формирования апоптозных телец, чтоотражается на изменении морфометрических параметров изучаемых клеток. Внашемисследованиипоказаностатистическидостоверноеуменьшениеморфометрических параметров ДЭК периферической крови в основной группе.Все изученные геометрические параметры циркулирующих ДЭК: среднийэквивалентный диаметр, средний периметр, средняя площадь, поляризация ифактор формы продемонстрировали меньшие значения, чем аналогичныепоказатели контрольной группы. В нашем исследовании при денситометриипрепаратов десквамированных эндотелиоцитов сегментация позволяла выделятьоптические зоны ядер клеток, в которых фиксировались компактизация,фрагментация и маргинация хроматина, что также потверждает участие апоптозав поражении эндотелиальных клеток (рисунки 24а-24г).117а)б)в)г)Рисунки 24а-24г – Десквамированные эндотелиоциты в камере Горяева.Окраска метиленовый синий.

Стрелками указаны скопленияконденсированного хроматина. Увеличение 600×.В группе с несостоявшимся выкидышем отмечено увеличение изученныхнами биомаркеров апоптоза. Так, индекс апоптоза эндотелиоцитов сосудовворсинчатого хориона плода в группе с неразвивающейся беременностьюпревысил показатель контрольной группы почти в 2 раза: в группе снеразвивающейся беременностью этот показатель составил 7,1±2,49%, вконтрольнойгруппе3,9±1,49%(р<0,0001).Такжепродемонстрированоувеличение концентрации белка апоптоза р53 в сыворотке крови у беременных восновной группы: концентрация белка р53 у беременных основной группысоставила 0,01±0,011 Ед/мл, и 0,003±0,0013 Ед/мл в контрольной группе (р=0,009).Генерированиеполученныхданныхпозволилосистематизироватьразработанные морфометрические параметры ДЭК. В основу диагностического118метода был положен показатель среднего эквивалентного диаметра ДЭК(СДДЭК), как достоверный и наиболее простой в определении морфометрическийпараметр поражения эндотелиальных клеток (рисунки 25а-25г).а)б)в)г)Рисунки 25а-25г – Десквамированные эндотелиоциты в камереГоряева.

Окраска метиленовый синий. Увеличение 600×.В группе пациенток с физиологическим течением беременности этотпоказатель в I триместре составил 43,9 мкм. Диапазон колебаний среднихзначений диаметра ДЭК контрольной группы составил от 35 мкм до 50 мкм.Стандартноеотклонениеданногопоказателясоставило±3,99.Среднийэквивалентный диаметр ДЭК у беременных основной группы составил 29,5 мкм.Диапазон колебаний составил 11-49 мкм. Стандартное отклонение данногопараметра ±9,40 (р<0,0001).Для подтверждения правильности используемой гипотезы о достоверностивыбранного геометрического параметра в оценке поражения эндотелия былиизученыкорреляционныеотношениямеждуновымморфометрическим119параметром и классическими маркерами эндотелиальной дисфункции.

Анализосуществлялся с помощью метода ранговой корреляции Спирмена.Определены вероятностные связи между традиционным цитологическиммаркером эндотелиальной дисфункции – количеством ДЭК (J.Hladovec с соавт.,1978 г), и разработанным нами параметром среднего эквивалентного диаметраДЭК (СДДЭК). Анализ проводился для основной группы, так как разбросзначений переменной в ней был существенно выше, чем в контрольной группе.Построенамодельдвумернойнормальнораспределеннойгенеральнойсовокупности.

Расчет коэффициента Спирмена показал высокий уровенькорреляциимежду исследуемымипоказателями.Корреляционныйанализпродемонстрировал обратную зависимость количества ДЭК и их среднегоэквивалентного диаметра: с количеством ДЭК эквивалентный диаметр ДЭКкоррелирует сильно и отрицательно (rs=-0,95). То есть, увеличение количестваДЭК в периферической крови сопровождалось уменьшением их среднегодиаметра.Создана модель нормально распределенной двумерной генеральнойсовокупности. Диаграмма рассеивания морфоцитотометрических показателейДЭК периферической крови представлена на рисунке 26.60СДДЭК, мкм5040302010005101520253035КДЭК, х10^4 кл/100 млРисунок 26 – Диаграмма линейной корреляции среднего эквивалентногодиаметра ДЭК (СДДЭК) и среднего количества ДЭК (КДЭК).Исследованы вероятностные связи между биохимическими маркерамипораженияэндотелияиСДДЭКпериферическойкрови.Показательвысокочувствительного С-реактвиного белка в сыворотке крови показал сильную120отрицательную корреляционную связь с СДДЭК и составил rs= - 0,91.Коэффициент корреляциимикроальбуминурии и СДДЭК также показалудовлетворительный результат минус 0,72.

Коэффициент корреляции факторафон Виллебранда и СДДЭК составил минус 0,69. Диаграммы корреляционныхотношений СДДЭК и концентрацией высокочувствительного СРБ, фактора фонВиллебранда, белка р53 и микроальбуминурии продемонстрированы на рисунках27-30.60СДДЭ, мкм50403020100024681012hsCRP, мг/млРисунок 27 – Диаграмма линейной корреляции среднего эквивалентногодиаметра ДЭК (СДДЭК) и высокочувствительного С-реактвиного белка(hsCRP).60СДДЭК, мкм504030201006080100120140160180vWf, %Рисунок 28 – Диаграмма линейной корреляции среднего эквивалентногодиаметра ДЭК(СДДЭК) и фактора фон Виллебранда (vWf).12160СДДЭ, мкм5040302010000,010,020,030,040,05МАУ, мкг/млРисунок 29 – Диаграмма линейной корреляции среднего эквивалентногодиаметра ДЭК (СДДЭК) и микроальбуминурии (МАУ).60СДДЭ, мкм5040302010000,010,020,030,040,050,060,07Белок р53, мг/млРисунок 30 – Диаграмма линейной корреляции среднего эквивалентногодиаметра ДЭК (СДДЭК) и концентрации белка р53.Изменения морфоцитометрических параметров эндотелия сосудов хорионаплода также согласуются с введенной системой объективизации пораженияэндотелия.

Исследованы вероятностные связи между полученными намиморфоцитометрическим показателями эндотелиоцитов у матери и плода. Созданамодельдвумерной нормально распределенной генеральной совокупности.Диаграмма распределения параметров СДДЭК и толщины стенки капиллярахориона плода (СТс) представлена на рисунке 31. Анализ показал сильную122положительную корреляцию показателейэндотелиальной системы матери иплода в нашем исследовании rs=0,99.60СДДЭК, мкм504030201000,30,7СТс, мкм1,0Рисунок 31 – Диаграмма линейной корреляции среднегоэквивалентного диаметра ДЭК (СДДЭК) и средней толщины стенки сосудаворсинчатого хориона (СТс).При определении корреляции между СДДЭК у матери и индексомКерногана сосудов ворсинчатого хориона у плода также получена сильнаяположительная связь (rs=0,90) (рисунок 32).60СДДЭК, мкм504030201000,020,030,040,050,060,070,080,09Индекс КерноганаРисунок 32 – Диаграмма линейной корреляции среднего эквивалентногодиаметра ДЭК (СДДЭК) и индекса Керногана сосудов ворсинчатого хориона.С индексом апоптоза эндотелиоцитов сосудов ворсинчатого хориона плода(ИАЭ)показатель эквивалентного диаметра ДЭК коррелирует сильно иотрицательно (rs=-0,75): чем больше СДДЭК, тем меньше индекс апоптозаэндотелиоцитов (рисунок 33).12360СДДЭК, мкм504030201001357911ИАЭ, %Рисунок 33 – Диаграмма линейной корреляции среднего эквивалентногодиаметра ДЭК (СДДЭК) и индекса апоптоза эндотелиоцитов сосудов ворсинхориона (ИАЭ).Меньший индекс корреляции Спирмена выявлен при анализе показателейсреднего диаметра сосудов хориона (rs=0,37) и средней площади сосудовворсинчатого хориона плода (rs=0,40).