Автореферат (Патофизиологическое обоснование применения малатсодержащего раствора для профилактики повреждений печени и почек при острой кровопотере (экспериментальное исследование)), страница 2

По теме диссертации опубликовано 12 работ, в том числе 3– статьи в журналах, рекомендованных ВАК, получен 1 патент на изобретение.Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 5глав (обзора литературы и описания собственных исследований), заключения,выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 235источников (из них 129 отечественных и 106 зарубежных). Работа изложена на141 странице компьютерного текста, содержит 10 таблиц и 30 рисунков.7Общая характеристика материалов и методов исследованияИсследование имело проспективный рандомизированный характер ивыполнялось на базе Центральной научно-исследовательской лабораторииФГБОУ ВО «НижГМА» Минздрава РФ. Выбор препарата для коррекциигиповолемии осуществлялся методом «конвертов».Эксперименты проводились на 120 половозрелых крысах самцах линииWistar, массой 220-250 г.

Содержание животных, оперативные вмешательства ивывод из эксперимента осуществляли в соответствии с нормативами, данным вруководстве Guide for care and use of laboratory animals. ILAR publication, 1996,National Academy Press. и с требованиями Приказа Минздрава России № 267 от19.06.2003 «Об утверждении правил лабораторной практики в РоссийскойФедерации». Животные содержались в виварии при свободном доступе к пище,воде, естественной смене дня и ночи.

Эксперименты проводились в условияхспонтанного дыхания и температуры окружающей среды 24-250C. Наркозосуществлялся внутрибрюшинным введением нембутала в дозе 45 мг/кг. Сцелью инвазивного контроля гемодинамики, забора и реинфузии крови, введенияисследуемых инфузионных растворов катетеризировались хвостовая артерия ивена.

После рассечения стенки сосуда с помощью сосудистых ножниц в вену иартерию вводились катетеры 30 G, которые ежечасно промывали с помощью 0,1мл раствора нефракционированного гепарина (50 ЕД/мл). Подключался монитордля инвазивного измерения артериального давления, датчик давления фирмы«Моторола» МРХ 5050DP и устройство аналогово-цифрового преобразователяL-card 14-440 (Россия). Полученные данные регистрировались с помощьюпрограммного комплекса «PowerGraf» V3.3.Эксперимент проводился в несколько этапов:1. Оценка исходного состояния, наркотизация животного, катетеризацияхвостовой артерии и вены.2. Кровопотеря из хвостовой артерии в объеме 30% ОЦК со скоростью 2мл/мин. Использовалась модель острой фиксированной по объему кровопотери,позволяющей оценить динамику постгеморрагических повреждений внутреннихорганов и влияние на них исследуемых препаратов.

Данная модель, по мнению8многих авторов, отражает эффективность применяемых компонентов леченияострой кровопотери (Рыжков И.А., 2015; Fulop A., 2013; Lomas-Niera J.L., 2005).ОЦК крысы рассчитывался как 70 мл/кг массы тела. Кровь забирали в шприцсодержащий 0,5 мл раствора гепарина (50 ЕД/мл).3. Гиповолемия в течение 1 часа после кровопотери.4. Коррекция гиповолемии внутривенным введением растворов. Вконтрольной серии экспериментов (60 животных) через 1 час после кровопотерикоррекция гиповолемии проводилась с помощью раствора Рингера в объеме200% от объема кровопотери следующим образом: ½ расчетной дозы раствораРингера вводилась болюсно в течение 5 минут, затем в течение 55 минут спомощью инфузомата вводилась ½ от расчетной дозы препарата.

В опытнойсерии (60 животных) коррекция гиповолемии проводилась с помощью растворастерофундин изотонический (B/Braun, Германия) по такой же схеме, как и уживотных контрольной серии. Затем в обеих сериях с помощью инфузомата втечение 1 часа осуществляли реинфузию 70% крови, забранной на 2-м этапеэксперимента.5. Выведениеживотныхизэкспериментаосуществлялипослевнутривенного введения нембутала (150 мг/кг) через 24 и 72 часа послекровопотериспоследующимизъятиемвнутреннихоргановдляморфологических исследований.Забор крови на анализ проводили из хвостовой вены перед началомэксперимента, через 1 час после окончания реинфузии крови (через 4 часа послекровопотери), через 1 сутки и 3 суток после кровопотери.Исследовали следующие параметры:1. Клинико-биохимические показатели крови (гемоглобин, гематокрит,концентрация глюкозы, лактата, пирувата, билирубина, мочевины, креатинина,активность АсАТ, АлАТ, ЩФ, ГГТП) на биохимическом анализаторе «Konelab60i»(Финляндия)спомощьюнаборовреактивов«Thermoscientific»(Финляндия).2.

Уровень веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНиСММ)в плазме и эритроцитах определяли по методике С.В. Оболенского и соавт.9(1992),основаннойнаопределенииспектрапоглощениябезбелковогосупернанта крови в ультрафиолетовой области (238-302 нм). Измерениепроводили на спектрофотометре СФ-46 (ЛОМО, Россия).Катаболический пул ВНиСММ плазмы и эритроцитов, рассчитывался поформуле А.И. Карпищенко (2002): (Е 238 + Е242 +…+ Е258) х 4.3. Определение уровня ЛПС в венозной крови проводилось с помощьюдиагностического набора МАЧ-endotox.spp.теста (ГОУ «НЦССХ им.А.Н.Бакулева РАМН, ООО НПФ «РОХАТ», Россия), пресепсина –наборомреактивов «PATHFAST Presepsin» (Mitsubishi Medience Corporation, Япония).4.Светооптическая микроскопия. Препараты приготавливали после 24-72 ч фиксации в 10% растворе нейтрального формалина, обезвоживания вспиртах восходящей концентрации и заливки в парафин.

Срезы толщиной в 7мкм изготавливали на микротоме Leica SM 2000R (Германия) и окрашивалигематоксилин-эозином.Просмотр гистологических препаратов, регистрация изображений иподсчет морфометрических показателей проводился на микровизоре μVizo-103(ЛОМО, Россия). Поля зрения на срезе выбирались по методу случайных чисел(Автандилов Г.Г., 1984). Исследовали следующие показатели в препаратахпечени: диаметр синусоидов, диаметр артерии и площадь ее сечения в триаде,диаметр вены и площадь ее сечения в триаде, диаметр и площадь сеченияцентральной вены.

В препаратах почек животных контрольной и опытной серийсравнивали площадь капиллярных петель в клубочке и ширину свободногопространства в капсуле Шумлянского-Боумена.Статистическая обработка результатов исследования осуществлялась спомощью пакета прикладных программ Microsoft Exel 2007 и StatSoft Statistica6.0. В работе приведены средние значения и их стандартные отклонения. Также встатистическом анализе использовались непараметрические методы сравненияМанна-Уитни и Уилкоксона. Значения считали достоверными при заданномкритерии вероятности p ≤ 0,05.10Результаты собственных исследований.В исходном состоянии значения показателей, отражающих направленностьметаболических процессов, не отличались у животных основной и контрольныхсерий.Через 1 час после реинфузии крови в контрольной серии отмеченыдостоверные изменения исследуемых показателей относительно исходногосостояния: значения глюкозы крови выросли на 121,4%, лактата – на 251,1%,индекса лактат/пируват – на 238,3% (рис.

1). Индекс глюкоза/лактат снизился на37,5%. Уровень пирувата остался неизменным.35у.е.30#25#*20Контрольная серияОпытная серия##*15##*105ИсходныезначенияЧерез 1 час послереинфузииЧерез 1 суткиЧерез 3 сутокРис. 1. Динамика индекса лактат/пируват у исследуемых животных.Примечание: # – статистическая значимость различий относительно исходных значений;*– статистическая значимость различий относительно значений в контрольной серии наодинаковых этапах исследования.Уже в раннем постгеморрагическом периоде выявлены положительныеэффекты малатсодержащего раствора стерофундин изотонический.

В опытнойсерии глюкоза выросла на 117,2%, лактат – на 226,1%, индекс глюкоза/лактатснизился на 33,2%. Но вследствие роста пирувата относительно исходныхзначений на 19,5% индекс лактат/пируват увеличился в меньшей степени посравнению с животными контрольной серии – на 174%,За счет более высоких темпов регресса метаболических нарушений уживотных опытной серии, по сравнению с контрольной, через 1 сутки выявлена11статистическая значимость различий по глюкозе – на 13,1%, лактату – на 14,6%,пирувату – на 12,3%, индексу лактат/пируват – на 23,7%.Через 3-е суток после кровопотери положительные эффекты отприменения стерофундина изотонического для коррекции гиповолемии привеликувеличениюстатистическизначимойразницызначенийизучаемыхпоказателей в контрольной и опытной сериях: по глюкозе – 16,1%, лактату –26,8%, пирувату – 11,4%, индексу глюкоза/лактат – 15,4%, индексулактат/пируват–восстановления33,5%.балансаНо,несмотряанаэробногоинаположительнуюаэробногодинамикуметаболизмаприиспользовании малатсодержащего раствора, на третьи сутки сохранялисьповышенные значения лактата в венозной крови.Свидетельством цитолиза печеночных клеток в постгеморрагическомпериоде явилась высокая активность ферментов в сыворотке крови (рис.