Диссертация (Особенности изменений микроциркуляции при субкутанной имплантации скаффолдов на основе поликапролактона и гидроксиапатита), страница 9

et al., 2004;Крупаткин А.И., 2013; Александрин В.В., 2014; Иванов А.Н. и соавт., 2014).Интерпретациярезультатовпроводиласьвсоответствииизложенными в (Крупаткин А.И., Сидоров В.В., 2005).страктовками,46Типичный вид графиков, отражающих спектральные характеристикиосцилляций кровотока в микроциркуляторном русле кожи интактных крыссамцов, отображен на рис. 2.Рис. 2. Спектральные характеристики активных механизмов осцилляцийкровотока в микроциркуляторном русле кожи интактного крысы-самца2.2.2.

Гистоморфологические методы исследованияДля проведения морфологического исследования проводили забор мягкихтканей области имплантации, включающих скаффолд, единым блоком. Материалдляморфологическогоисследованияфиксировалив10%-номрастворенейтрального формалина (ООО «Биовитрум», Россия), обезвоживали в спиртахвосходящей крепости, после чего для выполнения срезов препараты заливали впарафин. Срезы толщиной 5 – 7 мкм окрашивали гематоксилином Майера (ООО«Биовитрум», Россия) и эозином (ООО «Биовитрум», Россия). Для покрытиясрезов применяли Bio-Monht («Bio Optica», Италия). Исследование препаратовпроводили при помощи микроскопа AxioImager Z2 (производство Carl Zeiss,Германия).Оценивалиструктуру,клеточныйсостав,состояниемикроциркуляторного русла окружающих скаффолд мягких тканей, динамику ихзаселения клеточными элементами и состав клеточных популяций.

При оценке47динамики состава клеточных популяций скаффолдов проводили подсчетколичества фибробластов, фиброцитов, нейтрофильных лейкоцитов, моноцитов имакрофагов, а также лимфоцитов на одно поле зрения при увеличении х 400.2.2.3. Методы биохимических исследованийОпределениеконцентрацииVEGFпроводиливсывороткекрови,полученной, как описано в разделе 2.1.6, на автоматическом микропланшетномспектрофотометре«EpochBioTekInstruments»методомтвердофазногоиммуноферментного анализа с использованием набора реактивов «VEGF Rat»фирмы RnD Systems (США).Определение концентрации С-реактивного белка (СРБ) проводили всывороткекрови,полученной,какописановразделе2.1.6,иммунотурбидиметрическим тестом DiaSys Diagnostic Systems GmbH (Германия),с помощью анализатора Sapphire-350 (Ирландия).Активность церулоплазмина определялась по степени окисления растворапара-фенилендиамина в сыворотке крови модифицированным методом Ревина ивыражалась в условных единицах (у.

е.) (Пишак В.П. и соавт., 1998).2.3. Статистическая обработка материалаСтатистическую обработку полученных данных осуществляли при помощипакета программ Statistica 10.0. Проверяли гипотезы о виде распределений(критерий Шапиро – Уилкса). Большинство наших данных не соответствуютзаконунормальногораспределения,поэтомудлясравнениязначенийиспользовался U-критерий Манна – Уитни, на основании которого рассчитывалсяZ – критерий и показатель достоверности p.48Глава 3МЕСТНЫЕ И СИСТЕМНЫЕ РЕАКЦИИ ОРГАНИЗМА В ОТВЕТНА ХИРУРГИЧЕСКУЮ ТРАВМАТИЗАЦИЮ МЯГКИХ ТКАНЕЙ,ИМИТИРУЮЩУЮ ИМПЛАНТАЦИИ СКАФФОЛДАДля оценки влияния травмы на тканевые и сосудистые реакции былвыполнен комплекс исследований, включающий функциональное изучениелокального кровотока, морфологическую оценку тканей в зоне имитацииимплантации матрицы,а также определение биохимическими методамисистемных проявлений воспалительной реакции у белых крыс, которымпроводилось оперативное вмешательство без подкожного размещения скаффолда.3.1.

Изменения перфузионного показателя и активных механизмовмодуляции микроциркуляции кожи при травматизации мягких тканейв объеме, соответствующем подкожной имплантации скаффолда (ИвановА.Н. и др., 2016; Козадаев М.Н., 2016)Для учета влияния травмы мягких тканей в объеме субкутаннойимплантации скаффолда у животных группы сравнения над зоной оперативноговоздействия была изучена динамика показателя перфузии кожи методом ЛДФ.Крометого,проводилосьизучениеактивныхмеханизмовмодуляциимикроциркуляции в соответствии с величинами пиковых частот, абсолютных инормированных амплитуд осцилляций в эндотелиальном, нейрогенном имиогенном диапазонах, определенных с помощью спектрального вейвлет-анализаЛДФ-грамм. Оценка изменений состояния микроциркуляции кожи и активныхмеханизмов еѐ модуляции над зоной хирургического вмешательства проводиласьна 7, 14, 21-е сутки (рис. 3).49АБВГРис.

3. Динамика изменения перфузии кожи при имитации имплантациискаффолдов у белой крысы. А – интактное животное (показатель перфузии – 9,8 перф.ед.); Б – 7-е сутки после оперативного воздействия (показатель перфузии – 13,2 перф. ед.); В –14-е сутки после оперативного воздействия (показатель перфузии – 12,4 перф. ед.); Г – 21-есутки после оперативного воздействия (показатель перфузии – 10,4 перф. ед.)Полученные данные свидетельствуют о том, что у животных, подвергнутыхоперативному вмешательству без имплантации скаффолда, на 7-е сутки50эксперимента происходит повышение перфузионного показателя в среднем на27% (рис.

3 А, Б).При амплитудно-частном анализе ЛДФ-грамм у ложнооперированныхживотных как на 7-е сутки эксперимента, так и в последующие сроки наблюденияне выявлено статистически значимого изменения частот эндотелиальных,нейрогенных и миогенных колебаний (табл. 1).Таблица 1Частотные характеристики ЛДФ-грамм у животных группы сравненияГруппаЧастота колебаний, Гцэндотелиальныхнейрогенныхмиогенных0,02 (0,02; 0,02)0,14 (0,13; 0,16)0,35 (0,28; 0,44)0.02 (0,02; 0,02)0,13 (0,10; 0,14)0,36 (0,32; 0,50)р1 = 0,226477p1 = 0,080585p1 = 0,8244070,02 (0,02; 0,02)0,14 (0,13; 0,15)0,31 (0,27; 0,44)р1 = 0,226477p1 = 0,304800p1 = 0,331686p2 = 0,449692p2 = 0,307490p2 = 0,2264770,02 (0,02; 0,02)0,13 (0,12; 0,14)0,42 (0,27; 0,53)21-е суткиp1 = 0,226477p1 = 0,081362p1 = 0,746886(n = 10)p2 = 0,656854p2 = 0,824212p2 = 0,929199p3 = 0,755814p3 = 0,350847p3 = 0,423902Контроль (n = 10)7-е суткивмешательстваПосле оперативного(n = 10)14-е сутки(n = 10)Примечания:1 в каждом случае приведены медиана, верхний и нижний квартили (25%; 75)2 p1 – по сравнению с контролем3 p2, p3– по сравнению с 7-ми и 14-ми сутками в данной группе.У животных группы сравнения на 7-е сутки эксперимента выявленостатистическизначимоеувеличениеабсолютныхзначенийнейрогенных и в меньшей степени – миогенных колебаний (табл.

2).амплитуд51Таблица 2Абсолютные амплитуды колебаний микроциркуляции в эндотелиальном,нейрогенном и миогенном частотных диапазонах у животных группы сравненияГруппаАбсолютная амплитуда колебаний, перф. ед.эндотелиальныхнейрогенныхмиогенныхКонтроль (n = 10)0,59 (0,34; 0,76)0,18 (0,13; 0,19)0,18 (0,14; 0,22)7-е сутки0,95 (0,57; 1,02)0,27 (0,17; 0,33)0,25 (0,17; 0,34)p1 = 0,035044p1 = 0,032713р1 = 0,0458350,53 (0,47; 0,59)0,18 (0,14; 0,23)0,22 (0,20; 0,27)p1 = 0,657216p1 = 0,437407p1 = 0,042904p2 = 0,112412p2 = 0,140466p2 = 0,7913370,48 (0,20; 0,69)0,17 (0,14; 0,20)0.18 (0,16; 0,19)p1 = 0,605577p1 = 0,477676p1 = 0,974253p2 = 0,068536p2 = 0,045590p2 = 0,083164p3 = 0,533964p3 = 0,350847p3 = 0,008764вмешательстваПосле оперативного(n = 10)14-е сутки(n = 10)21-е сутки(n = 10)Примечания:1 в каждом случае приведены медиана, верхний и нижний квартили (25%; 75)2 p1 – по сравнению с контролем3 p2, p3– по сравнению с 7 и 14-ми сутками в данной группе.Однако сдвиги нормированных амплитуд эндотелиальных, нейрогенных имиогенных колебаний при этом не достигают статистической значимости (табл.

3).Это свидетельствует о том, что повышение перфузии не сопровождаетсяизменениямибалансаактивныхложнооперированных животных.механизмовмодуляциикровотокау52Таблица 3Изменения нормированных амплитуд колебаний микроциркуляции кожи уживотных группы сравненияГруппаКонтроль (n = 10)7-е суткивмешательстваПосле оперативного(n = 10)14-е сутки(n = 10)21-е сутки(n = 10)Нормированная амплитуда колебаний, отн. ед.эндотелиальныхнейрогенныхмиогенных18,2 (14,65; 22,5)5,94 (5,15; 6,69)6,25 (5,89; 6,88)18,74 (15,46; 10,08)6,02 (5,49; 76,88)6,21 (5,02; 7,82)p1 = 0,579100p1 = 0,657216p1 = 1,016,84 (11,80; 20,32)5,48 (4,96; 6,08)7,10 (6,43; 7,84)p1 = 0,405381p1 = 0,318057p1 = 0,052205p2 = 0,820596p2 = 0,256840p2 = 0,22647718,23 (11,93; 21,67)5,56 (5,09; 6,87)6,79 (5,39; 8,57)p1 = 0,561276p1 = 0,846451p1 = 0,401388p2 = 0,722283p2 = 0,656854p2 = 0,477197p3 = 0,789810p3 = 0,722283p3 = 1,000000Примечания:1 в каждом случае приведены медиана, верхний и нижний квартили (25%; 75)2 p1 – по сравнению с контролем3 p2, p3– по сравнению с 7-ми и 14-ми сутками в данной группе.На 14-е сутки с момента хирургического вмешательства перфузионныйпоказатель находился в пределах вариабельности группы контроля, и отмечаетсялишь тенденция, не достигающая статистической значимости к его увеличению(рис.