Автореферат (Микробиологическая характеристика, механизмы устойчивости к антибиотикам и молекулярная эпидемиология резистентных форм респираторных патогенов и госпитальных грамотрицательных бактерий), страница 10

Большинство изолятовCC663 (79%) имели МЛУ-фенотип с высокими значениями МПК β-лактамов.Все резистентные к цефтриаксону изоляты (n=4; МПК> 2 мг/л) принадлежали к этомуклональному комплексу. Более того, изоляты ST10434 (n=5), входящего в СС663, обладалиэкстремальной резистентностью, т.к. были нечувствительны к пяти из шести тестированныхгрупп антибиотиков, включая пенициллин, эритромицин, клиндамицин, тетрациклин ихлорамфеникол; они сохраняли чувствительность только к ко-тримоксазолу.Вторым по распространенности клоном был CC230 (n=12, 25% от всей коллекции),который включал восемь сиквенс-типов. Большинство изолятов CC230 было выделено в Москвев 2010-2013 гг., составляя 41% от этой части коллекции; три изолята было получено в азиатскойчасти России.

CC230 характеризовался умеренными и низкими значениями МПК β-лактамов, вбольшинствеслучаевсохранялчувствительностькклиндамицину,тетрациклинуи39хлорамфениколу, но обладал резистентностью к ко-тримоксазолу. МЛУ обладали пять (42%)изолятов CC230, которые были резистентны к эритромицину.CC156 был представлен семью 19А-пневмококками (14% от всей коллекции),относящимися к четырем сиквенс-типам. Шесть из семи изолятов были выделены в городахевропейской части России в 2003 году, сформировав субклон в составе трех новыхблизкородственных сиквенс-типов: ST10437, ST10438 и ST10514.

Эти пневмококки обладалипримечательным фенотипом, будучи полностью резистентными к амоксициллину с МПК 4-8мг/л, которые превышали МПК пенициллина. Кроме того, эти изоляты были устойчивы к котримоксазолу, но сохраняли чувствительность к эритромицину, клиндамицину, тетрациклину ихлорамфениколу.CC320-пневмококки (n=7, 14% от всей коллекции) были выделены исключительно в 20102013 гг., их доля в этот период составила 32%. СС320 был представлен двумя сиквенс-типами:ST320 (n=3) и ST9656 (n=4; новый однолокусный вариант ST320 по аллели recP). Все изолятыCC320 имели МЛУ с высокими МПК пенициллина и амоксициллина (диапазон 1-4 мг/л) ирезистентностью к эритромицину и ко-тримоксазолу.

Все изоляты, кроме одного, имели болеевысокие значения МПК амоксициллина, чем МПК пенициллина; все СС320-пневмококки быличувствительны к хлорамфениколу.Девять изолятов представляли различные клональные линии или несвязанные сиквенстипы. Все шесть пенициллин-чувствительных 19А-пневмококков принадлежали к этой группеизолятов и не имели МЛУ. Один синглетон (ST10436) демонстрировал высокие значения МПКпенициллина и амоксициллина (2 мг/л).В целом, чувствительность 19А-пневмококков к β-лактамным антибиотикам была сходнойв 2003 и 2010-2013 гг. В течение этого периода доля полностью пенициллин-резистентныхизолятов (МПК> 2 мг/л) снизилась с 28% (5/18) до 5% (1/22) (р=0,041). Несмотря на то, что доляэритромицин-резистентных 19А-пневмококков осталась неизменной (67-68%), доля изолятов,несущих две детерминанты резистентности к эритромицину ermB и mef, увеличилась с 17% (2/12)в 2003 году до 60% (9/15) в 2010-2013 гг.

(р=0,023). Частота хлорамфеникол-резистентныхизолятов значительно снизилась с 33% (6/18) до 5% (1/22) (р=0,017). Наоборот, долярезистентных ко-тримоксазолу изолятов в течение периода исследования увеличилась с 44%(8/18) до 82% (18/22) (р=0,014).Таким образом, 80% изученной коллекции изолятов 19А-пневмококков относились кчетырем глобально распространенным клональным комплексам: СС156, СС230, СС320 и СС663.Циркулирующие в настоящее время в Европейской части России пневмококки серотипа 19Аотносятся преимущественно к СС230 и СС320 (70%), замещая распространенные ранее СС156 иСС663. Все изоляты CC156, CC320 и CC663 имели значения МПК пенициллина ≥1 мг/л, в то40время как изоляты CC230 характеризовались умеренными и низкими значениями МПКпенициллина, и были полностью чувствительны к амоксициллину и цефтриаксону.

Этосвидетельствует о клональных различиях чувствительности к β-лактамным антибиотикам висследуемой популяции пневмококков. Поскольку данная коллекция изолятов была получена довключения ПКВ в Национальный календарь профилактических прививок в 2014 году, описаннаяэволюция колнальной структура пневмококков серотипа 19А носила ПКВ-независимый характер,как и в некоторых других регионах. Распространение небольшого числа клонов серотипа 19Аскорее всего связано с их конкурентными преимуществами на генном уровне, а также сселективным давлением антибиотиков.7. Распространенность и механизмы устойчивости к макролидам Streptococcus pyogenes,выделенных у детейИзучение частоты и молекулярных механизмов резистентности S.

pyogenes к макролидами линкозамиду проходило в 3 периода: 1-й - 2011- 2012 гг (246 штаммов), 2-й - 2013 -2014 (273штамма) и 3-й - с января 2015 по декабрь 2016 г (267 штаммов). Все 786 исследованных за этипериоды штаммы S. pyogenes были выделены при культуральном исследовании 27011 мазков иззева, носа, вагины, отделяемого среднего уха и др., полученных от детей при консультативныхполиклинических осмотрах и в соматических отделениях клиник.Данные антибиотикочувствительности S.

pyogenes к препаратам, относящимся к разнымгруппам показали, что уровень нечувствительности микроорганизма к макролидам составил15,7%, к клиндамицину – 9,4%, к ко-тримоксазолу - 14,3% и тетрациклину - 8,4%. Самые низкиезначения нечувствительности S. pyogenes выявлены к хлорамфениколу – у 2,6% штаммов илевофлоксацину - 4,5%.Поскольку макролиды и линкозамиды рассматриваются как альтернативные препаратыдля лечения пенициллин устойчивых стрептококков, необходим мониторинг устойчивостиданных микроорганизмов к этой группе антибиотиков.

Нами была прослежена динамика ростаустойчивости S. pyogenes к макролидам и линкозамидам в течение 2011-2016 гг.Результаты исследования, полученные при анализе уровней устойчивости S. pyogenes втечение 6-летнего периода (2011 - 2016 гг), позволили выявить рост нечувствительностимикроорганизма как к отдельным представителям макролидных препаратов, так и клинкозамидам (клиндамицину) (рисунок 7). В 2011-2012 гг доля штаммов S. pyogenes,нечувствительных (резистентные и умеренно резистентные) к эритромицину, азитромицину,кларитромицину и клиндамицину (маркеру устойчивости к джозамицину и другим 16-членныммакролидам), находилась на низком уровне и составила 4,9%, 6,5%, 2,8% и 2,4% соответственно.41В 2013 - 2014 гг частота выделения устойчивых штаммов выросла более чем в 2 раза и составиладля перечисленных антибиотиков 13,5%, 13,5%, 9,2%.

Однако к клиндамицину и 16-членныммакролидам она по-прежнему сохранялась на низком уровне (3,8%). Для последнегонаблюдаемого периода (2015 - 2016 гг) был характерен продолжающийся небольшой ростустойчивости S. pyogenes к эритромицину, достигший 15,7% и резкий подъем устойчивости кклиндамицину (до 9,4%).% 18161412108Эритромицин6Клиндамицин4202011-20122013-20142015-2016ПериодыРисунок 7.

Динамика устойчивости S. pyogenes к макролидам и клиндамицину втечение 2011-2016 ггРезультаты определения фенотипа устойчивости у 46 эритромицин-резистентных изолятов,выделенных в 2014 – 2016 годах (6 изолятов выделены в 2013-2014 г и 40– в 2015 -2016 гг),показали, что 11 (24%) из них имели М-фенотип, столько же (24%) - iMLSВ фенотип и 52% сMLSВ фенотип. У изолятов с М-фенотипом резистентности МПК эритромицина колебалась от 4до 32 мг/л, у 33 штаммов с iMLSВ и сMLSВ фенотипами МПК эритромицина составляла 128-256мг/л и лишь у одного изолята она была на уровне 4 мг/л. Для изолятов с М-фенотипом такжебыли характерны низкие показатели МПК клиндамицина.

Они составляли от 0,047 мг/л до 0,125мг/л, что позволяло отнести их к категории чувствительных. У 11 изолятов с iMLSВ-фенотипомМПК клиндамицина была в пределах 0,064 - 0,38 мг/л, и они также входили в категориючувствительных микроорганизмов.Высокие (≥256 мг/л) значения МПК эритромицина имели изоляты с сMLSВ фенотипомустойчивости, а МПК клиндамицина у таких изолятов не отличалась единообразием, поскольку уполовины из них уровень МПК находился на сравнительно низких значениях (от 0,75 до 3 мг/л).У одного изолята МПК клиндамицина составляла 0,5 мг/л, т.е. находилась на пороговом уровне,42но по данным диско-диффузионного метода этот изолят был определен как нечувствительный кантибиотику. У остальных 12 штаммов с сMLSВ-фенотипом устойчивости показатели МПКклиндамицина были ≥256 мг/л.Следует отметить, что изоляты с М-фенотипом были резистентны ко всем исследованным14- и 15-членным макролидам при сохранении чувствительности к 16-членному макролиду иклиндамицину.

Изоляты с iMLSВ-фенотипом (n=11) также были нечувствительны к 14- и 15членным макролидам, чувствительность к 16-членным макролидам была отмечена у 2-х из них.Штаммы S. pyogenes с сMLSВ-фенотипом были нечувствительны ко всем макролиднымантибиотикам и к клиндамицину.Результаты детекции генов, кодирующих резистентность S. pyogenes к макролиднымантибиотикам, показали, что только у 11 из 46 изолятов (24%) была экспрессия mef гена,кодирующего эффлюксный механизм устойчивости.

Все штаммы с mef-зависимым эффлюксомотносились к М-фенотипу. У 22 (48%) эритромицин-резистентных S. pyogenes был обнаруженermB-ген в качестве одной детерминанты, а в 11 (24%) случаях ermB-ген находился в ассоциациис mef-геном. У двух (4%) изолятов гены резистентности не были идентифицированы.Эритромицин-резистентные изоляты с ermB-геном, а также с комбинацией mef – гена имелиiMLSВ и сMLSВ фенотипы устойчивости.ВЫВОДЫ1.