Диссертация (Возможности использования тканеинженерных конструкций в хирургическом лечении тазового пролапса), страница 14

Иммуногистохимическая реакция с антителами кCaspasa-3. Продукт реакции коричневого цвета. Увеличение ×100.101При использовании ТИК на основе бионедеградируемых матриксов(титановая и полипропиленовая сетка), наоборот, с увеличением сроканахождения конструкции в организме крысы снижалась степень выраженностиCaspasa-3 (снижалась запрограммированная гибель аутологичных дермальныхфибробластов,покрывающихТИК)иповышаласьцитоплазматическаяэкспрессия Col3A1, что могло говорить об увеличении плотности сосудистой сетидля лучшего кровоснабжения участка имплантации. Тем самым снижался рискотторжения (рисунок 80).А12Б12Рисунок 80 - А - участок ТИК на основе титановой сетки с аутологичными ДФкрысы с окружающими тканями на 14 сутки после имплантации. 1 Иммуногистохимическая реакция с антителами к Caspasa - 3.2 –иммуногистохимическая реакция с антителами к Col3A1 (14 сутки).

Увеличение×100. Б - участок ТИК на основе полипропиленовой сетки с аутологичными ДФкрысы с окружающими тканями на 14 сутки после имплантации. 1Иммуногистохимическая реакция с антителами к Caspasa - 3.2 –102иммуногистохимическая реакция с антителами к Col3A1 (14 сутки). Продуктреакции коричневого цвета. Увеличение ×100.Bcl-2являетсявнутриклеточныммембраносвязаннымбелком,блокирующим апоптоз. По экспрессии Bcl-2 можно судить о состоянии апоптоза.Следовательно,исчезновениеэкспрессииBcl-2способствуетзапрограммированной гибели клеток. При наличии экспрессии Bcl-2 подавляютсягены, кодирующие белки экстрацеллюлярного матрикса, белки клеточнойадгезии, а такжеклеток),CD 31 –принадлежащийбелок (мембранное окрашивание эндотелиальныхкмолекуламклеточнойадгезиисемействаиммуноглобулинов.

CD 31 выявляются мелкие капиллярного типа сосуды.Маркер CD 31 - является маркером эндотелиальных клеток и отражает характерваскуляризации ткани.Получены результаты уровня активности маркёров Bcl-2 и CD 31 по всемвидам матриксов для ТИК – результаты схожи. На 7-е сутки отмечается высокаямембраннаяэкспрессияCD31,выявляютсямембранноеокрашиваниеэндотелиальных клеток и максимальная экспрессия Bcl-2. К 14 суткампроисходит умеренное снижение экспрессии CD 31происходит снижение CD 31и Bcl-2.

К 21 сутками Bcl-2 экспрессии, вплотьдо полногоисчезновения экспрессии Вcl-2. Однако, у ТИК на основе полипропиленовойсетки – уровни активности на 14 и 21 сутки остаются одинаковыми, что говорит оотсутствии выраженной гибели дермальных фибробластов на поверхностиматрикса и хорошей кровоснабжении данного участка ткани (рисунок 81).А12103Б12В 12Г12Д 12Рисунок 81 - А - участок ТИК на основе викриловой сетки с аутологичными ДФкрысы с окружающими тканями на 7 сутки после имплантации. 1 ИммуногистохимическаяреакциясантителамикBcl-2.2–иммуногистохимическая реакция с антителами к CD31 (7 сутки). Б - участок ТИКна основе биологического имплантата с аутологичными ДФ крысы с104окружающимитканямиИммуногистохимическаянасутки21реакцияспослеантителамиимплантации.кBcl-2.12–иммуногистохимическая реакция с антителами к CD31 (21 сутки).

В - участокТИК на основе композитной сетки с аутологичными ДФ крысы с окружающимитканями на 21 сутки после имплантации. 1-Иммуногистохимическая реакция сантителами к Bcl-2. 2 – иммуногистохимическая реакция с антителами к CD31(21 сутки). Г - участок ТИК на основе титановой сетки с аутологичными ДФкрысы с окружающими тканями на 14 сутки после имплантации.

1ИммуногистохимическаяреакциясантителамикBcl-2.2–иммуногистохимическая реакция с антителами к CD31 (14 сутки). Д - участокТИК на основе полипропиленовой сетки с аутологичными ДФ крысы сокружающимитканямиИммуногистохимическаяна21реакциясуткиспослеантителамиимплантации.кBcl-2.12–иммуногистохимическая реакция с антителами к CD31 (21 сутки). Продуктреакции коричневого цвета. Ув. ×1003.3.3. Оценка васкуляризации тканиПолучены результаты уровня активности маркёра CD 31 по всем видамматриксов для ТИК – результаты схожи.

На 7-е сутки отмечается высокаямембранная экспрессия CD 31. К 14 суткам происходит умеренное снижениеэкспрессии CD 31. К 21 суткам уровень маркёра CD 31 снижается. Однако, у ТИКна основе полипропиленовой и титановой сетках– уровни активности на 14 и 21сутки остаются одинаковыми, что говорит о хорошем кровоснабжении данногоучастка ткани.3.3.4 Оценка тканевой реакцииНа первом этапе тканевую реакцию организма на имплантацию ТИК с МСККМ крысы и контрольную полипропиленовую сетку без клеточного компонента105оценивали по интенсивности, которая представлена балльной шкалой от 1(отсутствие отклонения признака) до 5 (максимальное проявление признака).Результаты отражены в таблице 5.БиорезорбцияМакрофагальная реакцияТоксические свойстваИммунореактивностьАнгиогенезМикрососудистыеповрежденияФормирование капсулыТИК (полипропилен +МСК КМ)342,38±0,484±0,824,5±0,58Полипропиленовая сетка3±0,823±144242,33±0,584,33±0,584,67±0,58Таблица 5 - Сравнительная оценка тканевой реакции на имплантацию крысе ТИКс МСК КМ и полипропиленовой сетки.У ТИК на полипропиленовой сетке с МСК КМ получили следующиеиндексы: пролиферации – 11,5 ± 0,58; воспаления – 9.38 ± 0,71; регенерации –1,23.

У полипропиленовой сетки получили следующие индексы: пролиферации –10,67 ± 0,58; воспаления – 9.66 ± 0,72; регенерации – 1,1.Таким образом установлено, что применение аутологичного клеточногокомпонента увеличивает пролиферативную и регенеративную активности приимплантации сетчатого эндопротеза.Тканевую реакцию организма на имплантацию ТИК на различных матриксахс ДФ крыс оценивали по интенсивности, которая представлена балльной шкалойот 1 (отсутствие отклонения признака) до 5 (максимальное проявление признака).Результаты отражены в таблице 6.106БиорезорбцияМакрофагальнаяреакцияТоксические свойстваИммунореактивностьАнгиогенезМикрососудистыеповрежденияФормированиекапсулыТитановая Биологич Викрило Композитсетка +.вая сетка ная сеткаДФ крысы импланта+ ДФ+ДФт + ДФкрысыкрысыкрысы3354Полипропиленовая сетка +ДФ крысы32334411111,4 ± 0,552±1112,25 ± 0,52,6 ± 0,552,33 ± 0,58 53,8 ± 0,45 33,8 ± 1,12,67 ± 1,15 11,2 ± 0,45 1,5 ± 0,581,4 ± 0,5522423Таблица 6 - Сравнительная оценка тканевой реакции на имплантацию крысе ТИКна различных матриксах с аутологичными ДФ.У ТИК на титановой сетке с ДФ получили следующиеиндексы:пролиферации – 7,33 ± 0,58; воспаления – 9.66 ± 1,08; регенерации – 0,76.

У ТИКна биологическом имплантате получили следующие индексы: пролиферации –10.0; воспаления – 3.0; регенерации – 3,33. У ТИК на викриловой сетке с ДФполучили следующие индексы: пролиферации – 10,8 ± 0,45; воспаления – 3.2 ±0,45; регенерации – 3,38.

У ТИК на композитной сетке с ДФ получили следующиеиндексы: пролиферации – 10.0; воспаления – 4.75 ± 0,54; регенерации – 2,11. УТИК на полипропиленовой сетке с ДФ получили следующиеиндексы:пролиферации – 10,8 ± 1.1; воспаления – 5.4 ± 0,55; регенерации – 2.Выводы: на основании результатов проведенных исследований можнозаключить, что ТИК на основе биодеградируемых и частично биодеградируемыхматериаловявляютсябиологическисовместимымиконструкциямиистимулируют разрастание соединительной ткани в зоне имплантации на раннихсроках.

Использование биологическогоимплантата сопровождалось раннимтотальным прорастанием его соединительной тканью. Однако, ТИК наполипропиленовом и титановом матриксе обеспечивают лучшее врастание107компонентов соединительной ткани на поздних сроках (14 и 21 сутки) ирезистентность организма к растяжению и деформации.3.3.5. Оценка тканевой реакцииРезультаты оценки тканевой реакции представлены на рисунке 82. Сравнениематериалов по регенеративному индексу.Рисунок 82 – Сравнение тканевой реакции на различные материалы.108Максимальным индексом пролиферации среди всех конструкций обладаюттканеинженерныеконструкциинаполипропиленовойсетке,покрытыеаутологичными МСК КМ крысы, минимальный индекс принадлежит – ТИК натитановой сетке, покрытой аутологичными ДФ крысы.

При сравненийрезультатов, полученных на контрольной полипропиленовой сетке и ТИК наполипропилене с МСК КМ крысы – пролиферация несколько ниже наконтрольной сетке.Максимальным индексом воспаления среди всех конструкций обладаютконтрольные полипропиленовые сетки, минимальный индекс принадлежит – ТИКна биологическом имплантате, покрытом аутологичными ДФ крысы. Присравнений результатов, полученных на контрольной полипропиленовой сетке иТИК на полипропилене с МСК КМ крысы – воспалительная реакция схожа.Максимальным индексом регенерации среди всех конструкций обладаютТИК на биодеградируемых матриксах, покрытых ДФ крысы, минимальныйиндекс принадлежит – контрольной полипропиленовой сетке.

При сравнениирезультатов, полученных на контрольной полипропиленовой сетке и ТИК наполипропилене с МСК КМ крысы – регенеративная реакция схожа.3.4.Создание тканеинженерной конструкции с применением аутологичногоклеточного компонента человека на бионедеградируемых матрицах.Подводя итоги двух этапов исследования, можно констатировать, чтоиспользование мезенхимальных стволовых клеток костного мозга и дермальныхфибробластов равнозначно. Но для клинической практики забор клеточнойкультурыдермальныхфибробластовменеетравматичен,сопровождаетсяменьшим количеством осложнений и целесообразнее с экономической точкизрения.