Диссертация (Возможности использования тканеинженерных конструкций в хирургическом лечении тазового пролапса), страница 12

Количество макрофагов и гигантских клетоквокруг полипропиленовой сетки приблизительно такое же, как и через 2 месяцапослеоперации.Отмечаетсятакжекрупныеучасткикровоизлияниявсоединительную ткань. По-видимому, в этом случае имелось экструзия сетки ивозможноинфицированиераны.Вдругихобразцахтогожесрока:соединительная ткань, окружающая сетку, становится более тонкой, чем через 2месяца после операции.

При этом она достаточно рыхлая, полнокровная, отёчнаяи диффузно инфильтрирована макрофагами и лимфоцитами с примесьюнемногочисленных нейтрофилов (рисунок 61). Видны скопления сидерофагов идиапедезные кровоизлияния.Рисунок 60 - Контрольная сетка, 4.5 месяца. Диффузная воспалительнаяинфильтрация тканей вокруг сетки. Окраска ГЭ, увеличение х 200.83Рисунок 61 - Контрольная сетка, 4.5 месяца. Отёк и воспалительная инфильтрациясоединительной ткани вокруг сетки. Окраска ГЭ, увеличение х 200.При сравнении опытной сетки с контрольной сеткой через 4.5 месяца послеимплантации можно отметить следующие моменты: соединительная ткань вокругсетки уплотнена вокруг нитей и рыхлая в отдалении от них (рисунки 62, 63).Воспалительная инфильтрация относительно слабая, она выражается в очаговойлимфомакрофагальной инфильтрации с небольшой примесью плазматическихклеток и нейтрофилов.Рисунок 62 - Опытная сетка (полипропиленовая сетка с нанесенными МСК КМкрысы), 4,5 месяца.

Уплотнённая и рыхлая соединительная ткань вокруг сетки.Слабая воспалительная реакция. Окраска ГЭ, увеличение х 200.84Рисунок 63 - Опытная сетка (полипропиленовая сетка с нанесенными МСК КМкрысы), 4,5 месяца. Нити сетки окружены тонкой и рыхлой капсулой, вокруготносительно рыхлая соединительная ткань, окружающая сетку. Отмечаетсяполнокровие и минимальная лимфомакрофагальная инфильтрация.Окраска ГЭ, увеличение х 200.Гистологическоеизучениеимплантированнойвподапоневротическоепространство крысам полипропиленовой сетки с культивированными на неймезенхимальными стволовыми клетками (опытная сетка) и с отсутствием клеток(контроль) позволяет прийти к следующим выводам.1) В контроле через 2 месяца после имплантации сетки у животного сотсутствующимихирургическиминовообразованнаязрелаяосложнениями(фиброзная)ткань,вокругсеткипрорастающаяпорыимеласьсетки.Воспалительная инфильтрация в этом случае была минимальной. У 2-х животныхпроизошлаэкструзиясеткичерезэпидермисвобластиоперативноговмешательства и расхождение краев хирургической раны.

В этом случаесоединительнаятканьвокругсеткиотличаласьналичиемотечностиивыраженной воспалительной инфильтрацией, что может быть связано синфицированием при хирургическом осложнении.2) В опыте через 2 месяца после имплантации, соединительная ткань вокруг сеткиимела меньшую степень зрелости по сравнению с контролем, при этом несколькосильнее был выражен отек ткани и лимфо-макрофагальная инфильтрация.3) Через 4,5 месяца в контрольной группе результаты различались в зависимостиот хирургических осложнений. При наличии экструзии сетки и расхождения швовимелась не только лимфо-макрофагальная, но и нейтрофильная инфильтрациясоединительной ткани, что было связано с инфицированием.

В трёх случаях вэтой группе инфицирование отсутствовало, и воспалительная инфильтрацияобразующейсясоединительнойтканибыламинимальной.Однако,соединительная ткань отличалась большей выраженностью отёка и меньшейзрелостью по сравнению с аналогичной группой через 2 месяца.854) Через тот же срок в опытной группе воспалительные изменения были только втом случае, если происходила экструзия сетки и расхождение швов (одноживотное). В остальных случаях, где хирургических осложнений не было,соединительная ткань вокруг сетки отличалась зрелостью и минимальнойвоспалительной реакцией (в отличии от контрольной сетки у того же животного).Методикавтороготканеинженерныхэтапаконструкцийисследованияразмеромзаключалась10х10ммвполучениенаосновебионедеградируемых (полипропиленовая хирургическая сетка и титановая сетка),композиционной хирургической сетке (Пролен + Викрил) и биодеградируемых(викриловаясеткаибиологическийимплантат,состоящийизсвиногодермального коллагена) матриксах с нанесением на них аутологичногоклеточного компонента - дермальных фибробластов крысы.

Имплантацияполученных ТИК производилась в подапоневротическое пространство вмежлопаточной области у лабораторных животных. Через 7, 14, 21 сутки образцывырезались, парафиновые срезы толщиной 5 мкм окрашивались гематоксилинэозином, пикрофуксином по Ван - Гизону, изучались в микроскопе OlympusBX51, фотографировались с помощью видеокамеры фирмы Спецтехника(Москва) и программы Launch CAM VIEW.Рассмотрим тканевую реакцию, полученную на ТИК с полипропиленовойсеткой на 7, 14 и 21 сутки в условиях in vivo:На 7 сутки происходило формирование соединительнотканного каркасавокругматериала,приэтомволокнаиформирующиесяфибробластырасполагались хаотично. Часть коллагеновых волокон, прилежащих к материалу,была резко истончена и разрыхлена, что указывало на их частичный лизиссохранениемфуксинофилии.Отмечалисьвоспалительныеизменения:нейтрофильная, лимфоцитарная и макрофагальная инфильтрация.

Фибробластыимели веретеновидную или звездчатую форму, фибрин отсутствовал, сосудыбыли полнокровными (рисунок 64).86Рисунок 64 - ТИК на полипропиленовой сетке с ДФ крысы, 7 сутки. Отмечалисьвоспалительные изменения: нейтрофильная, лимфоцитарная и макрофагальнаяинфильтрация.

Окраска ГЭ, увеличение х 200.На 14 сутки в зоне прилежания материала определялось полнокровие икровенаполнение капилляров, в некоторых сосудах – адвентиции, лейкостазы иэритродиапедез (рисунок 65). Клеточная реакция на материал маловыраженная,проявляющаясявосновномвумеренно-выраженнойдиффузнойполиморфноклеточной инфильтрацией с минимальным количеством клетокрассасывания и макрофагов. Среди клеток инфильтрата, определялись единичныеплазмоциты и тучные клетки в различной стадии дегрануляции. Стромаотличаласьочаговыммежуточным отеком.Внекоторыхполяхзренияопределялось наличие клеток инородных тел в толще имплантируемогоматериала.87Рисунок 65 - ТИК на полипропиленовой сетке с ДФ крысы, 14 сутки.

Клеточнаяреакциянаматериалмаловыраженная,умеренно-выраженнаядиффузнаяполиморфноклеточная инфильтрация с минимальным количеством клетокрассасывания и макрофагов. Окраска ГЭ, увеличение х 200.К 21 суткам ткани, окружающие структуры материала были хорошоваскуляризированы и слабо инфильтрированы отдельными лимфоцитами,плазматическими клетками и макрофагами (рисунок 70). В жировой ткани уимплантата отсутствовала лимфоплазмоцитарная инфильтрация и ответнаягранулематозная реакция.

Вокруг материала отмечался сформированный изволокнистой соединительной ткани с элементами липоматоза каркас. Волокнасоединительной ткани с отсутствием каких-либо воспалительных изменений ипризнаковмакрофагальнойактивности.Наличиеполейсоединительно тканных трабекулах и активности капилляров.ангионезезав88Рисунок 66 - ТИК на полипропиленовой сетке с ДФ крысы, 21 сутки. Отмечаетсяхорошаяваскуляризациятканейсослабойинфильтрациейотдельнымилимфоцитами, плазматическими клетками и макрофагами. Наличие полейангионезеза в соединительно тканных трабекулах и активности капилляров.Окраска ГЭ, увеличение х 100.Тканевая реакция, возникающая на имплантацию ТИК на основе титановойсеткой к 7, 14 суткам в условиях in vivo:На 7 сутки в месте нахождения титановой сетки отмечался дефект,заполненный грануляционной тканью, которая на этот срок еще сохранялапризнаки незрелости: рыхлую структуру, большое количество новообразованныхсосудов, тонкие и слабо фуксинофильные коллагеновые волокна (рисунок 67).Определяласьмакрофагальнаяинфильтрация.Формафибробласты-веретеновидная либо звездчатая, фибрин отсутствовал, сосуды отличалисьполнокровием.89Рисунок 67 - ТИК на титановой сетке с ДФ крысы, 7 сутки.

Сохраняютсяпризнаки незрелости (рыхлая структура и новообразованные сосуды, тонкие ислабо фуксинофильные коллагеновые волокна). Отмечается макрофагальнаяинфильтрация. Окраска ГЭ, увеличение х 200.К 14 суткам в глубине дефекта от нахождения ТИК на основе титановойсетки грануляционная ткань отличалась большей плотностью и зрелостью,нарастало количество фуксинофильных коллагеновых волокон (рисунок 68).

Вткани определялось сохранение увеличенного количества сосудов, но количествоих гораздо меньше, чем в грануляционной ткани на 7 сутках после имплантации.Коллагеновыеволокнарасполагалиськомпактнее,ониобладалифуксинофильностью. Фибробласты имели в основном веретеновидную форму.Фиксировалосьформированиетрабекулярногокаркасаизволоконсоединительной ткани с отсутствием каких-либо воспалительных изменений.90Рисунок 68 - ТИК на титановой сетке с ДФ крысы, 14 сутки. Количество сосудовзначительно меньше по сравнению с 7 сутками.