Автореферат (Иммуногенетические маркеры прогнозирования эффективности программ экстракорпорального оплодотворения у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием), страница 3

Дляоценки нормальности распределения количественных данных применялись:графические (частотная гистограмма) и расчётные (критерий КолмогороваСмирнова, Шапиро-Уилка) методы.В качестве меры центральной тенденции количественных признаков былавыбрана медиана (Ме), а для интервальной оценки 25 и 75 квартиль, поскольку вбольшинстве случаев распределение данных было отличным от нормального. Дляанализа межгрупповых различий количественных признаков использоваласьописательная статистика с использованием t-критерия Стьюдента и рангового Uкритерия Манна-Уитни.

Качественные значения отражены в виде абсолютных12величин (n) и процентных долей. Распределение частот генотипов всехисследованных полиморфных маркеров соответствовало уравнению ХардиВайнберга.Для выявления различий частот значений качественных показателей междугруппами и оценки их статистической значимости применялся критерий χ2, принебольшом количестве наблюдений рассчитывался точный критерий Фишера.Для оценки взаимосвязи между изучаемыми показателями проводился линейныйкорреляционный анализ с определением коэффициента корреляции (r) иопределением его значимости по критерию t.

Для оценки ассоциаций генотипов снаступлением беременности использовался критерий χ2 Пирсона и отношениешансов(OR)с95%-нымдоверительныминтервалом(CI).Значимостьвыявленных различий и взаимосвязей во всех видах анализа была принята приуровне значимости p< 0,05.Результаты собственных исследований и их обсуждениеДля решения поставленных задач, на первом этапе исследования былпроведен анализ анамнестических данных, показавший, что пациентки как изосновной группы, так и из группы сравнения были сопоставимы по возрасту,даннымакушерско-гинекологическогоанамнеза,частотесопутствующейгенитальной и экстрагенитальной патологии.На втором этапе исследования был проведен анализ гормонального статусав менструальном цикле, предшествовавшем процедуре ЭКО. Нами не быловыявленоотклоненийотнормальныхзначений,однаковсодержаниипрогестерона и пролактина были выявлены достоверные различия междугруппами.

Так, у женщин из группы с наступившей беременностью содержаниепролактина было достоверно ниже, а прогестерона достоверно выше, чем уженщин из группы сравнения (р=0,000070 и 0,000013 соответственно).Успешная имплантация во многом обусловлена качеством эмбрионаиготовностью эндометрия, необходимыми для адгезии и инвазии бластоцисты вэндометрий. На следующем этапе исследования был проведен анализ толщиныэндометрия на 2 день м.ц., предшествующего ЭКО и количества ооцитов,13полученных при трансвагинальной пункции (TVP) в протоколе ЭКО.

У женщиниз основной группы толщина составила 3,8±1,3 мм и была достоверно ниже, чем уженщин из группы сравнения 4,5±1,8 мм (р=0,024121). Количество ооцитов,полученных при TVP у женщин с неблагоприятным исходом составило 11,0±4,8шт. и было достоверно выше, чем в группе с благоприятным исходом процедуры8,4±3,6 шт. (р=0,002342).Для оценки прогностической роли изучаемых цитокинов в наступленииЭКО-индуцированной беременности, был проведен анализ их содержания на 3-йдень менструального цикла, предшествующего процедуре ЭКО. У женщин сразличными исходами процедуры ЭКО были выявлены различия в содержанииIL-1α: у женщин с эффективной процедурой ЭКО уровень IL-1α составил 26,6(3,940,2) пг/мл и был достоверно выше, чем у женщин с неэффективнойпроцедурой  17,4 (4,218,0) пг/мл (p=0,038178) (табл.1).

На основе расчетаотношения шансов было установлено, что женщины с концентрацией IL-1α всыворотке от 28,7 до 85,1 пг/мл имеют шанс забеременеть в программе ЭКО в 3,8раза выше, чем женщины с другими концентрациями данного цитокина(р=0,001745).Таблица 1Содержание изучаемых цитокинов в сыворотке крови у обследованныхженщинОсновная группа(n=40)Группасравнения (n=80)ДостоверностьразличийIL-1α, пг/мл26,6(3,940,2)17,4(4,218,0)p = 0,038178IL-1β, пг/мл10,0(8,211,6)9,7(8,112,1)p = 0,708963IL-1Ra, пг/мл M-CSF, пг/мл138,4303,1(90,6200,5) (260,3379,9)122,5355,9(73,4200,0) (265,8449,9)p = 0,687625 p = 0,161357Полученные в настоящем исследовании данные о предикторной роли IL-1αбыли подтверждены результатами молекулярно-генетических исследований.Выявлено, что наибольшее количество женщин с ТПБ с благоприятным исходом14процедуры ЭКО являлись носителями генотипа Т/Т rs1800587 5`нетранслируемойобласти гена IL-1α, в то время как у женщин с ненаступившей беременностьюданный генотип встречался достоверно реже (табл.

2). Женщины-носителигенотипа Т/Т имеют шанс забеременеть в результате ЭКО в 4,64 раза выше, чемженщины с другими генотипами (р=0,000 347) (табл. 3).Следует отметить, что в группе женщин с наступившей беременностью нафоне процедуры ЭКО у женщин-носителей «благоприятного» генотипа Т/Тконцентрация IL-1α в сыворотке крови была достоверно выше, чем у пациенток сгенотипами С/С и С/Т (р=0,0001, р=0,0001 соответственно), а у женщинносителей генотипа С/С – достоверно ниже, чем у женщин-носителей генотипаС/Т и Т/Т (р=0,0113, р=0,0001 соответственно).

Аналогичные результатыполучены и в группе женщин с неблагоприятным исходом процедуры, чтосогласуется с данными других авторов об ассоциации генотипа Т/Т сповышенным уровнем продукции IL-1α (Громова А.Ю., Симбирцев А.С., 2005).Таблица 2Распределение частот генотипов изучаемых генов в зависимости отисхода процедуры ЭКО у обследованных женщинПоказательОсновная группа (n=40)Ген IL-1αТ/Т18 чел.

(45 %)rs1800587С/Т10 чел. (25 %)(C/T)С/С12 чел. (30 %)Ген IL-1Rа2,2rs22346632,412 чел. (30 %)(2/4)4,428 чел. (70 %)4,5Ген CSF1RСА/СА1 чел. (2,5 %)rs386693509 ТС/СА29 чел. (72,5 %)(CA/TC)ТС/ТС10 чел. (25 %)Ген CSF1RG/G8 чел. (20 %)rs3216780del/G30 чел. (75 %)(del/G)del/del2 чел. (5 %)15Группа сравнения (n=80)12 чел.

(15 %)32 чел. (40 %)36 чел. (45 %)6 чел. (7,5 %)24 чел. (30 %)44 чел. (55 %)6 чел. (7,5 %)7 чел. (8,8 %)12 чел. (15 %)61 чел. (76,2%)18 чел. (25 %)22 чел. (27,5 %)38 чел. (47,5 %)Прогностическая ценность генотипа Т/Т гена IL-1α вероятно можетзаключаться в ассоциации с уровнем прогестерона. Выявлено, что у женщинносителей генотипа Т/Т из основной группы содержание прогестерона былодостоверно выше, чем у женщин-носителей генотипов С/Т и С/С (р=0,000001,p=0,040727), более того, у женщин из группы сравнения наблюдалась такая жезакономерность(р=0,000001,р=0,000001соответственно).Присравнениисодержания прогестерона у женщин-носителей генотипа Т/Т между группами взависимости от исхода процедуры обнаружено, что у женщин с благоприятнымисходом ЭКО содержание прогестерона было достоверно выше (p=0,000 122).Различий в сывороточном содержании IL-1β, IL-1Rа между группамивыявлено не было.

Проводяанализ распределения генотипов IL1RN-VNTRустановлено, что наибольший процент обследованных женщин из основнойгруппы, так и из группы сравнения были носителями генотипа 4,4 – 70% (28 чел.)и 55% (44чел.). В ходе анализа содержания IL-1Rа в сыворотке крови взависимости от носительства полиморфного минисателлита гена IL-1Rа не быловыявлено достоверных различий как внутри групп, так и между исследуемымигруппами.ВнашемисследованиибылаопределенаконцентрацияM-CSF 265,8-322,1 пг/мл, позволяющая на преконцептивном этапе прогнозироватьмаксимальную вероятность наступления беременности в результате процедурыЭКО у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием(р=0,000347) (табл.

3).В проведенном исследовании сравнительный анализ частоты встречаемостигенотипов полиморфизмов rs3216780 и rs386693509 гена c-fms показал, чтобольшинство обследованных женщин из основной группы были носителямигенотипов del/G и TC/CA, в группе женщин с ненаступившей беременностьюдоминировали генотипы del/del и TC/TC (табл. 2). Расчет отношения шансовпоказал, что генотипы del/G и TC/CA выступают как условно прогностическиблагоприятными для наступления беременности в результате процедуры ЭКО упациенток с трубно-перитонеальным бесплодием: женщины носители данных16генотипов имеют шанс забеременеть в результате ЭКО в 7,9 и в 14,94 раза выше,чем носители других генотипов (р=0,00005, р=0,0001 соответственно).Полиморфизм генов цитокинов и их рецепторов оказывает влияние насывороточный уровень цитокинов, что в свою очередь оказывает эффект нареализацию их биологических функций.

В работе впервые выявлена зависимостьсывороточного содержания M-CSF в зависимости от носительства генотипаrs386693509 гена c-fms. Выявлено, что женщины  носители генотипа ТС/ТСимеют более высокую концентрацию M-CSF, чем носители генотипов СА/СА иТС/СА. Вероятно, это может быть обусловлено чувствительностью самогорецептора CSF1R. Взаимодействие лиганда и рецептора – сложный процесс, воснове которого лежит каскад последовательных реакций аутофосфорилирования,перекрестного фосфорилирования близлежащих к рецептору эффектных молекул.Стоит также отметить, что медиана концентрации M-CSF, выявленная дляносителей условно благоприятного генотипа ТС/СА rs386693509 гена c-fms,соответствуетIIквартилюуровняM-CSF,такжеассоциированнымсблагоприятных исходом процедуры ЭКО.Отсутствиеразличийвсодержаниигормоноввзависимостиотносительства генотипов полиморфных маркеров rs386693509 и rs3216780 генаCSF1R, вероятно, могут указывать на независимость данного фактора в качествемаркера эффективности программ ЭКО.На наш взгляд, предикторную роль M-CSF можно объяснить в первуюочередь полиморфизмом гена его рецептора, обуславливающим чувствительностьCSF1R, посредством которого он реализует свои биологические функции.С целью оценки вклада всех изучаемых показателей в прогнозированиеЭКО-индуцированной беременности нами было рассчитано ОR для каждогопоказателя (табл.

3). Наибольший вклад в прогнозирование благоприятногоисходапроцедурыЭКОвносят:концентрацияIL-1α28,785,1пг/мл,концентрация пролактина 144291,5 мЕд/дл, концентрация M-CSF 265,8322,5пг/мл, генотип Т/Т rs1800587 гена IL-1α, концентрация прогестерона 74,298,017нмоль/л, генотип ТС/СА rs3693509гена CSF1R, генотип del/G rs3216780 генаCSF1R.Заслуживает внимание тот факт, что сочетание изучаемых показателейимеет большую прогностическую значимость, чем использование только одногомаркера.

Для поиска сочетаний, обладающих максимальной прогностическойзначимостью,былиизученыкомбинации.Сочетаниесывороточныхконцентраций прогестерона (74,298 пг/мл), пролактина (144291,5 мЕд/дл) итолщины эндометрия 3,14 мм дает отношение шансов 1,0 (OR=0,31,2,p=0,021 484). Сочетание генотипа Т/Т гена IL-1α и сывороточной концентрацииIL-1α (28,785,1 пг/мл) дает отношение шансов 4,2 (OR=1,710,1, р=0,000 909).Сочетание генотипа Т/Т гена IL-1α, генотипа ТС/СА гена CSF1R, генотипа del/GгенаCSF1R и сывороточной концентрации M-CSF (265,8322,5 пг/мл),пролактина (144291,5 мЕд/дл) и прогестерона (74,298 пг/мл) дает отношениешансов 4,8 (OR=1,117,2, р=0,001 893).