Автореферат (Иммуногенетические маркеры прогнозирования эффективности программ экстракорпорального оплодотворения у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием), страница 2

И. М. Сеченова Минздрава России (Сеченовскийуниверситет), ФГАОУ ВО «Национальный исследовательский Нижегородскийгосударственныйуниверситетим.Н.И.Лобачевского»,ФГБОУВО«Национальный исследовательский Мордовский государственный университетим. Н. П. Огарёва».Генотипирование женщин на носительство полиморфных вариантов Т/Тrs1800587 гена IL-1α, ТС/СА rs3693509 и del/G rs3216780 гена CSF1R, а такжеопределение концентрации IL-1α и M-CSF в сыворотке могут быть использованыдля прогнозирования эффективности программ ЭКО на преконцептивном этапе,что позволит обоснованно планировать индивидуальную тактику веденияпациенток в предстоящем цикле лечения методом ЭКО и снизить затратыгосударства и частных лиц на проведение процедуры.Методология и методы исследованияВ проведенном исследовании использовался комплексный подход к оценкеклинико-анамнестических, инструментальных и лабораторных данных 120женщин в возрасте 32,8±4,1 года с верифицированным диагнозом трубноперитонеального бесплодия, обратившихся для проведения программы ЭКО вотделение вспомогательных репродуктивных технологий ГБУЗ РМ «Мордовскийреспубликанский клинический перинатальный центр».

Дизайн исследования былсоставлен в соответствии с этическими нормами, на основании подписанияинформированногодобровольногосогласияпациентанавключениевисследование. Работа выполнена с участием необходимого количества пациентов,современного оборудования, методов исследования иммунного статуса и7молекулярно-генетических методов и методов статистической обработки всоответствииспоставленнымизадачами,позволяющиеполучитьрепрезентативные и достоверные результаты.Степень достоверности и апробация результатовПоложения и выводы диссертационного исследования основаны на анализелабораторного материала, который получили при проведении клиническихнаблюдений, с использованием современных иммунологических, биохимическихи молекулярно-генетических методов. Статистическая обработка проводилась сприменениемкомплексаучетно-оценочных и аналитических показателей,адекватных математических методов, что определяет высокую достоверностьрезультатов.Основные положения диссертации представлены на XVIII Международномконгрессе «Здоровье и образование в XXI веке: «Глобальная интеграциясовременных исследований и технологий в медицину и образовательноепространство» (Москва, 2016), ежегодных научных конференциях Мордовскогогосударственного университета «Огаревские чтения» (Саранск, 2015-2016), XXМеждународной медико-биологической конференции молодых исследователей«Фундаментальная наука и клиническая медицина – человек и его здоровье»(Санкт-Петербург,2017),XVIВсероссийскомнаучномфоруме«Днииммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2017), Международнойконференции, посвященной 100-летию со дня рождения академика АН СССР Д.К.

Беляева «Беляевские чтения» (Новосибирск, 2017), III Всероссийскойконференции молодых специалистов, аспирантов, ординаторов «Инновационныетехнологиивмедицине: взглядмолодогоспециалиста» (Рязань,2017),Международном медицинском форуме Донбасса «Наука побеждать... болезнь»(Донецк, 2017), XII Международном конгрессе по репродуктивной медицине(Москва,2018),76-йМеждународнойнаучно-практическойконференциимолодых ученых и студентов «Актуальные проблемы экспериментальной иклинической медицины» (Волгоград, 2018).8Личный вклад автораАвтору принадлежит ключевая роль в выборе тематики исследования,аналитическом обзоре литературы, в клинических наблюдениях, сборе материала,проведении ИФА, статистической обработке результатов и их анализе, а такжеформулировании выводов и практических рекомендаций.

В совместных сдругими исследователями работах, автор разрабатывал программы исследований,участвовал в мониторинге уровня цитокинов сыворотки крови, проводилстатистическую обработку полученных данных. Таким образом, вклад автора вработу над диссертацией является основным на всех этапах исследования: отопределения задач, их теоретического обоснования и организации клиниколабораторных исследований до представления полученных результатов внаучных публикациях, докладах на научных форумах.

Доля автора в совместныхпубликациях составила 7080%.Внедрение результатов в практикуДанные, полученные в результате проведенного исследования, внедрены вработу ГБУЗ РМ «Мордовский республиканский клинический перинатальныйцентр» и на кафедру клинической иммунологии и аллергологии ФГАОУ ВОПервый МГМУ им.И.М.

Сеченова МинздраваРоссии (Сеченовскийуниверситет), кафедру молекулярной биологии и иммунологии ФГАОУ ВО«НациональныйисследовательскийНижегородскийгосударственныйуниверситет им. Н. И. Лобачевского», кафедру иммунологии, микробиологии ивирусологии ФГБОУ ВО «Национальный исследовательский Мордовскийгосударственный университет им. Н. П. Огарёва».Соответствие диссертации паспорту научной специальностиОсновные научные положения диссертации соответствуют Паспортуспециальности 14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология, областиисследований«Фундаментальныеисследования,посвященныеизучениюстроения, функционирования иммунной системы и механизмов иммуннойзащиты.Изучениепатогенезаиммунозависимыхзаболеваний(иммунодефицитных состояний, аллергической и аутоиммунной патологии).9Разработка и усовершенствование методов диагностики, лечения и профилактикиаллергических и иммунопатологических процессов».ПубликацииПо материалам диссертации опубликовано 13 печатных работ, в том числе в3 статьях в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки России, в 3 статьях вжурналах, индексируемых в Scopus, получен 1 патент на изобретение РоссийскойФедерации.Объем и структура диссертацииДиссертацияизложенана183страницахкомпьютерноготекста,иллюстрирована 37 таблицами и 2 рисунками, состоит из введения, обзоралитературы (4 параграфа), описания материалов и методов исследования (2параграфа), изложения результатов исследования (6 параграфов), обсуждения,выводов, списка использованной литературы, включающего 91отечественный и272 зарубежных источников.СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериалы и методы исследованияВ соответствии с целью исследования и поставленными задачами, вотделении вспомогательных репродуктивных технологий ГБУЗ РМ «Мордовскийреспубликанский клинический перинатальный центр» было обследовано 120пациентокрепродуктивноговозрастаструбно-перитонеальнойформойбесплодия, обратившихся для проведения программы ЭКО.

Все пациенткиподписали письменное информированное согласие на участие в исследовании.Критериями включения в исследование были: возраст женщин 25-39 лет;трубно-перитонеальный фактор бесплодия; регулярный менструальный цикл;нормальный овариальный резерв (по данным гормонального исследования и УЗИорганов малого таза); наличие в анамнезе не более 3-х неудачных попыток ЭКО;отсутствие патологии эндометрия по данным УЗИ; перенос только эмбрионовхорошего качества; отсутствие противопоказаний к проведению ЭКО; фертильнаясперма супруга/партнера; нормальный кариотип обоих супругов.10Критериями исключения были: бесплодие, обусловленное отсутствиемовуляции;бесплодие,обусловленноеиммунологическимфактором;экстрагенитальная патология, при которой проведение базовой программы ЭКОпротивопоказано; гинекологические заболевания: эндометриоз, миома матки;острыевоспалительныезаболеваниявзаболеваниястадииоргановобострения;малоготаза;ожирениехронические2-3степени;олигоастенотератозооспермия у супруга/партнера (нормативы ВОЗ, 2010 г.);синдром поликистозных яичников и наружный генитальный эндометриоз 3-4степени; гиперандрогенемия; гипо- и гипергонадотропная недостаточностьфункция яичников; аномалии развития женской половой системы.Все женщины были обследованы согласно приказу Минздрава России от30.08.2012 №107Н «О порядке использования вспомогательных репродуктивныхтехнологий, противопоказаниях и ограничениях к их применению».Всемпациенткамсуперовуляции,былпроведензавершившийсякороткийпереносомпротоколэмбрионовстимуляции(неболее2-х).Диагностика беременности проводилась на основании определения в сывороткеконцентрации β-субъединицы хорионического гонадотропина через 14 дней послепереноса эмбрионов в полость матки и ультразвуковой диагностики клиническойбеременности с целью оценки наличия одного или двух плодных яиц в полостиматки через 21 день после переноса эмбрионов.В зависимости от исхода проведенного ЭКО ретроспективно былисформированы 2 группы.

В первую группу были включены 40 женщин,программаЭКОукоторыхзавершиласьнаступлениембеременности,подтвержденная УЗИ (I группа). Вторую группу составили 80 женщин сненаступившей беременностью после проведенной программы ЭКО.Образцы цельной крови забирали у пациенток на 3 день менструальногоцикла, предшествующего процедуре ЭКО.Содержаниегипофизарныхияичниковыхгормоновопределялирадиоиммунным и иммуноферментным методами с использованием стандартныхнаборов.11Иммунологические методы исследованияМетодом ИФА в сыворотке крови определяли содержание M-CSF сиспользованием коммерческих тест-систем («RnD Systems», США) и уровеньIL-1α, IL-1β, IL-1RA с использованием коммерческих тест-систем (ООО«Цитокин», Россия) согласно инструкциям производителей.Молекулярно-генетические исследованияНами были изучены частоты полиморфных маркеров rs1800587 (C/T) генаIL-1α, rs2234663 (2/4) гена IL-1Rа, rs386693509 (CA/TC) и rs3216780 (del/G) генаCSF1R. Для полиморфного минисателлитного маркёра IL1RN-VNTR былаиспользована стандартная пара праймеров из работы Tarlow et al., 1993.

Дляисследуемых образцов генотипы по маркёру IL1RN-VNTR определяли согласноинструкции производителя наборов «Тапотили» (г.Москва). Полиморфныемаркеры rs1800587 (C/T) гена IL-1α, rs386693509 (CA/TC) и rs3216780 (del/G) генаCSF1R были исследованы методом ПЦР с последующим секвенированием поСенгеру. Для локусов IL1a-889 и CSF1R_64032 были использованы оригинальныепары праймеров. Для подбора праймеров использовали Primer-BLAST (Ye et al.,2012)иреферентныенуклеотидныепоследовательностиNG_008850.1иNG_012303.1 из Базы данных NCBI: Nucleotide data base.Статистическая обработка данныхСтатистическуюобработкурезультатоввыполнялиспомощьюстандартного пакета прикладных программ Stat Soft Statistica 10.0 (США).