Диссертация (Создание липосомальной лекарственной формы фотосенсибилизатора на основе борированного хлорина E6), страница 28

Для«темновой» токсичности ИК50 составляет больше 50 мкМ, для световойтоксичности – ИК50=0,15 мкМ, ИК90(субстанции борхлорина)=0,3 мкМ иИК90(ЛЛФ борхлорина)=0,8 мкМ (Рисунок 1, 2).Рисунок 1. «Темновая» токсичность субстанции и ЛЛФ борхлорина183Рисунок 2. Цитотоксичность при облучении субстанции и ЛЛФ борхлоринаЗаключение.В результате проведенного исследования установлено, что ЛЛФборхлорина имеет низкую «темновую» токсичность и обладает высокойцитотоксической активностью в отношении клеток глиомы крысы С6 .184Приложение 3Изучение «острой» токсичности ЛЛФ борхлоринаМестопроведенияисследования.Лабораторияфармакологииитоксикологии НИИ Экспериментальной диагностики и терапии опухолейФГБУ «РОНЦ им. Н.Н.

Блохина» Минздрава России.Целью настоящего исследования являлось изучение "острой" токсичностиЛЛФ борхлорина на мышах и крысах самках и самцах.Материал исследования. Препарат «Борхлорин липосомальный, лиофилизатдля приготовления дисперсии для инъекций 1,0 мг».Животные. Работа проведена на 120 здоровых мышах самцах и самкахлинии Balb/c, полученных из питомника «Столбовая» и 110 здоровыхнеинбредных беспородных крысах-самцах, полученных из разведения ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России.Результаты исследования.При изучении "острой" токсичности на мышах ЛЛФ борхлорина привнутривенном применении наблюдалась гибель животных на 1-3 и 8 суткинаблюдения после введения препарата в дозах 20,25 и 13,5 мг/кг. Препарат,введенный в дозе 6,75 мг/кг, гибели животных не вызывал. Через 10-15 минутпосле введения препарата в высоких дозах и перед гибелью у мышейотмечалось: пилоэрекция, учащенное дыхание, сужение глазных щелей.

Приаутопсиипавшихживотныхотмечено:головноймозг–сосудыинъецированы, кровоизлияние под твердую мозговую оболочку, остальныеорганы – без особенностей. Показано, что у животных, получавших препаратв дозах не вызывающих гибель животных, каких-либо клиническихпроявлений токсичности и изменений в поведенческих реакциях отмечено небыло.По величине расчетных токсических доз ЛЛФ борхлорина половыхразличий в количественной токсичности препарата у мышей практически не185обнаружено: для мышей-самок ЛД50 – 21,38 мг/кг; для мышей самцов ЛД50 –22,50 мг/кг.При изучении "острой" токсичности на крысах ЛЛФ борхлоринагибели животных не наблюдалось.

Через 5-10 минут после введенияпрепарата у животных отмечалась гиподинамия, продолжающаяся в течение15-30 минут, других клинических проявлений токсичности и измененийповеденческих реакций не наблюдалось. При аутопсии умерщвленных вконце опыта животных внутренние органы – без особенностей.Расчетные токсические и летальные дозы ЛЛФ борхлорина примаксимально возможных концентрациях и максимально возможных объемахопределены не были в связи с отсутствием гибели животных.Заключение.Таким образом, изучена «острая» токсичность ЛЛФ борхлорина приоднократном внутривенном применении в диапазоне доз на мышах и крысахсамках и самцах.•Установлено отсутствие половых различий для мелких лабораторныхживотных при применении ЛЛФ борхлорина.•Установлено, что гибель мышей при применении ЛЛФ борхлоринанаступает на 1, 2, 3 и 8 сутки после введения препарата на фоне ярковыраженных сосудистых нарушений.•Получены расчетные токсические дозы ЛЛФ борхлорина приоднократном внутривенном применении мышам: для мышей-самок ЛД50 –21,38 мг/кг; для мышей самцов ЛД50 – 22,50 мг/кг; для крыс расчетныетоксические дозы не установлены в связи с отсутствием гибели животныхпри максимально возможной концентрации и максимально возможномобъеме введенного препарата;•Установлено, что у мышей – самок и у крыс – самцов, получавшихЛЛФ борхлорина в высоких дозах, на протяжении всего срока наблюденияотмечено статистически недостоверное колебание массы тела.186Приложение 4Доклиническое изучение эффективности липосомальной лекарственнойформы борхлорина для ФДТ саркомы М-1 крысМесто проведения исследования.

Лаборатория экспериментальной ифотодинамической терапии ФГБУ «Медицинский радиологический научныйцентр» МЗ РФ, Обнинск.Цель исследования: провести оценку противоопухолевой активности дозборхлорина и липосомального борхлорина при проведении ФДТ саркомы М1 беспородных крыс для определения ФС с наилучшими характеристиками.Задачи исследования:• изучить динамику накопления липосомального борхлорина в опухоли издоровой ткани;• определитьминимальнуюдозуФСдлядостиженияпротивоопухолевого эффекта после ФДТ при плотности энергиилазерного излучения 150 Дж/см2 и плотности мощности 0,25 Вт/см2;• сравнить противоопухолевую активность свободного борхлорина иборхлорина, включенного в липосомы.Материал исследования.

Субстанция борхлорина, растворенная в раствореДМСОипрепарат«Борхлоринлипосомальный,лиофилизатдляприготовления дисперсии для инъекций 1,0 мг».Животные. Исследования были проведены на 146 беспородных крысах. Вкачестве экспериментальной модели опухоли использовали саркому М-1крыс. Новообразование перевивали под кожу в область бедра в видекусочков опухоли донора. В опыт крыс брали на 7-9 день, когдапальпируемая опухоль достигала в диаметре 0,7-1,0 см.Результаты исследования1. Исследование динамики накопления ФС в опухоли и здоровой тканиПосле внутрибрюшинного введения ЛЛФ борхлорина в дозе 5,0 мг/кгмаксимальный уровень накопления ФС в опухоли наблюдался через 3-4 ч.187Затем интенсивность флюоресценции снижалась и на 10 сутки практическистала равна исходной величине – интенсивности флюоресценции до введенияФС.

Заметной селективности накопления препарата в опухолевой ткани ненаблюдалось–самыйвысокийиндексконтрастности(отношениеопухоль/здоровая ткань) 1,25 отмечен через 3,5 ч (Рисунок 1).Рисунок 1. Уровень накопления и индекс контрастности липосомальногоборхлорина в опухолевой и здоровой тканях крыс с саркомой М-12. Изучение параметров максимально эффективной дозы ФСЧерез 3,5 ч после внутрибрюшинного введения борхлорина в 2%растворе ДМСО в дозах 1,25; 2,5 и 5,0 мг/кг и липосомального борхлорина вдозах 0,75; 1,25; 2,5 и 5,0 мг/кг проводили ФДТ.

Противоопухолевый эффектполучен при всех исследуемых дозах ФС.У большинства животных на месте облучения лазером на 3 суткинаблюдался отек и различной плотности корочки, под которыми шлообразование грануляций. К 7 суткам у всех животных наблюдались коркиразной степени выраженности и к 25 – 48 суткам у 100% животных язвызаживали, на их месте признаков опухоли визуально не обнаруживалось.Степень повреждения ткани в области облучения зависела от дозы ФС.188Минимально эффективная доза ФС липосомального борхлорина,приводящая к полной регрессии саркомы М-1 у 100% животных в течение 21суток после ФДТ, составляет 1,25 мг/кг, а минимально эффективная дозасвободного борхлорина – 5,0 мг/кг.Заключение.1.

Оптимальноевремяпроведениялазерногоизлученияпослевнутрибрюшинного введения липосомального борхлорина наступаетчерез3,5ч,когдаиндексконтрастностидостигаетсвоегомаксимального значения. Время полного выведения препарата изорганизма (остаточная фототоксичность) при дозе ФС 5,0 мг/кгсоставило 10 суток.2. Минимальная доза ФС, приводящая к полной регрессии саркомы М-1 иполномуизлечениюу100%животныхпослеФДТпривнутрибрюшинном введении – 2,5 мг/кг, при плотности энергиилазерного излучения 150 Дж/см2 и плотности мощности 0,25 Вт/см2.3.

Установлено,чтомаксимальнаяэффективностьФДТсЛЛФборхлорина в отношении саркомы М-1 наблюдается в дозе 1,25 мг/кг,которая в 4 раза ниже дозы свободного борхлорина 5,0 мг/кг,вызывающейравныйпротивоопухолевыйэффект,чтоснижаетобщетоксическое воздействие на организм и накопление ФС в коже.189Приложение 5Доклиническое изучение эффективности липосомальной лекарственнойформы борхлорина для ФДТ опухоли РС-1 крысМесто проведения исследования. Лаборатория экспериментальной ифотодинамической терапии ФГБУ «Медицинский радиологический научныйцентр» МЗ РФ, Обнинск.Цель исследования: определить минимально эффективную дозу ФС длядостижения полной регрессии опухоли РС-1 у 100% животных (срокнаблюдения 21 сутки после ФДТ).Задачи исследования:• изучить динамику накопления липосомального борхлорина в опухолиРС-1 и здоровой ткани;• изучить противоопухолевую эффективность ФДТ РС-1 крыс с разнымидозами ФС и одинаковыми параметрами лазерного излучения(плотность энергии 150 Дж/см2, плотность мощности 0,25 Вт/см2).Материал исследования.