Автореферат (Создание липосомальной лекарственной формы фотосенсибилизатора на основе борированного хлорина E6)

На правах рукописиДмитриева Мария ВячеславовнаСОЗДАНИЕ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРА НА ОСНОВЕ БОРИРОВАННОГОХЛОРИНА Е614.04.01 – технология получения лекарствАВТОРЕФЕРАТдиссертации на соискание ученой степеникандидата фармацевтических наукМосква – 2016Диссертационная работа выполнена в Научно-исследовательском институтеэкспериментальной диагностики и терапии опухолей Федерального государственногобюджетного учреждения «Российский онкологический научный центр имениН.Н.

Блохина» Министерства здравоохранения Российской Федерации (НИИ ЭДиТОФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России)Научный руководитель:доктор фармацевтических наук, профессорОборотова Наталия АлександровнаОфициальные оппоненты:Молохова Елена Игоревна – доктор фармацевтических наук, профессор, ГБОУ ВПО«Пермскаягосударственнаяфармацевтическаяакадемия»Министерстваздравоохранения Российской Федерации, кафедра промышленной технологиилекарств с курсом биотехнологии, профессор кафедрыПанкрушева Татьяна Александровна – доктор фармацевтических наук, профессор,ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» Министерстваздравоохранения Российской Федерации, кафедра фармацевтической технологии,заведующая кафедройВедущая организация:Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшегообразования «Российский университет дружбы народов» (ФГАОУ ВО «РУДН»)Министерства образования и науки Российской ФедерацииЗащита диссертации состоится «15» июня 2016 г.

в 14.00 часов на заседаниидиссертационного совета Д.208.040.09 при ГБОУ ВПО Первый Московскийгосударственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерстваздравоохранения Российской Федерации по адресу: 119019, г. Москва, Никитскийбульвар, д. 13.С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной медицинскойбиблиотеке ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинскийуниверситет имени И.М.

Сеченова по адресу: 119034, г. Москва,Зубовский б-р, д. 37/1 и на сайте ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. СеченоваМинздрава России - www.mma.ru.Автореферат разослан «____» _______________ 2016 г.Ученый секретарьдиссертационного совета Д 208.040.09доктор фармацевтических наук,профессорДемина Наталья Борисовна2ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫАктуальность темыФотодинамическая терапия (ФДТ) является одним из наиболее динамичноразвивающихся методов лечения злокачественных новообразований.

ФДТ выгодноотличается от традиционных методов лечения злокачественных опухолей высокойизбирательностью поражения, отсутствием риска хирургического вмешательства,тяжелых местных и системных осложнений лечения, возможностью многократногоповторения при необходимости и сочетанием в одной процедуре диагностики илечебного воздействия. ФДТ – двухкомпонентный метод: одним компонентомявляется светочувствительное вещество – фотосенсибилизатор (ФС), вторым –световое излучение низкой интенсивности и определенной длины волны,соответствующей пику поглощения ФС. Поглощение энергии света ФС приводит кфотохимической реакции с образованием цитотоксичных продуктов: активных формкислорода и свободных радикалов, действие которых на опухолевые клетки ведет ких гибели.

Селективность повреждения опухоли достигается за счетпреимущественного накопления ФС в раковых клетках с последующим прицельнымоблучением новообразования. Поэтому при ФДТ онкологических заболеваний ФСвводятся в организм в основном внутривенно, реже – внутрь полости и перорально, атакже в виде наружной аппликации.В настоящее время в клинической практике при ФДТ применяется целый рядФС, созданных на основе соединений различных химических классов (табл. 1). Крометого, наряду с ныне используемыми препаратами продолжаются активные поиски иисследования новых, более эффективных ФС.Таблица 1Основные классы ФСКласс ФСПроизводныегематопорфиринаПроизводные 5аминолевулиновойкислотыХлориныФталоцианиныПрепаратыФотофрин-2 (QLT Phototherapeutics Inc., Канада), Фотогем («ВекторГНЦ вирусологии и биотехнологии», Россия)Левулан (Deprenyl USA Pharmaceuticals, Канада), Аласенс (ГНЦ«НИОПИК», Россия), «Metvix» и «Hervix» (PhotoCure, Норвегия)Фоскан (BioLitec, Германия), Фотолон (ОАО «Белмедпрепараты»,Республика Беларусь), Радахлорин (ООО «РАДА-ФАРМА»,Россия), Фотодитазин (ООО «ВЕТА-ГРАНД», Россия)Фотосенс (ГНЦ «НИОПИК», Россия)В течение последних двух десятилетий особый интерес в качестве ФСпредставляют производные природных хлорофиллов – хлорины.

Установлено, что3ФС хлоринового ряда быстро накапливаются в опухолевой ткани с высокимградиентомконтрастностиопухоль/здороваяткань,обладаютвысокойфотодинамической активностью и терапевтической эффективностью. Кроме того,хлорины быстро выводятся из организма, что полностью решает проблемудлительной кожной фототоксичности, являющейся основным недостатком почти всехприменяющихся в клинике ФС.Одним из перспективных отечественных ФС хлоринового ряда являетсяборхлорин – оригинальное борированное производное хлорина е6 с максимумомпоглощения при длине волны (662±2) нм.

Данные, полученные в результатепроведения ФДТ с внутрибрюшинным введением субстанции борхлорина (в виде 2%раствора в ДМСО) на штаммах опухолей саркомы М-1, меланомы В-16, карциномыЭрлиха и карциномы Льюиса, свидетельствуют о его высокой фотодинамическойактивности и противоопухолевой эффективности. Поскольку борхлорин являетсягидрофобным веществом, предложена его инкапсуляция в липосомы и созданиестерически стабилизированной липосомальной лекарственной формы (ЛЛФ),позволяющей вводить препарат внутривенно.Степень разработанности темы исследованияВ рамках Федеральной целевой программы «Развитие фармацевтической имедицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года идальнейшую перспективу» в Институте элементоорганических соединенийим.

А.Н. Несмеянова РАН (г. Москва) синтезирована и отобрана для проведениякомплекса исследований субстанция нового оригинального ФС на основеборированного хлорина е6. Согласно результатам доклинических исследований,проведенным в ФГБУ «Медицинский радиологический научный центр» МЗ РФ,борхлорин обладает высокими фотоактивными свойствами, что позволяетрассматривать его в качестве перспективного препарата для ФДТ злокачественныхновообразований.Целью настоящего исследования являлось создание лиофилизированнойстерически стабилизированной ЛЛФ борхлорина для внутривенного введения.ЗадачиДля достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:1.На основании технологических и химико-фармацевтических исследованийустановить оптимальный состав ЛЛФ борхлорина.2.Разработатьтехнологиюполученияустойчивойприхранениилиофилизированной ЛЛФ (ЛЛФ-лио) борхлорина для внутривенного введения.3.Разработать методику качественного анализа для контроля качества ЛЛФ иЛЛФ-лио борхлорина.44.Разработать методику количественного анализа для контроля качества ЛЛФ иЛЛФ-лио борхлорина.5.Выбрать химико-фармацевтические показатели качества для стандартизацииЛЛФ-лио борхлорина и изучить ее стабильность в процессе хранения.6.Составить проект НД на ЛЛФ-лио борхлорина.Научная новизна работыВ результате проведенных исследований впервые создана стабильная прихранении ЛЛФ-лио оригинального отечественного ФС на основе борированногохлорина е6 для внутривенного введения.

Установлен оптимальный состав ЛЛФборхлорина и разработана технология получения ЛЛФ-лио борхлорина, имеющие рядособенностей, связанных с наличием у ФС гидрофобных свойств. Предложеныметодики качественного и количественного анализа лекарственной формы (ЛФ)борхлорина. Определены показатели оценки качества и проведена стандартизацияразработанного препарата«Борхлоринлипосомальный,приготовления дисперсии для инъекций 1,0 мг».лиофилизатдляТеоретическая значимость работыТеоретическая значимость работы заключается в обосновании выбора состава испособа получения стерически стабилизированной ЛЛФ борхлорина, являющегосягидрофобным соединением.

Также доказано и экспериментально обоснованоприменение лиофилизации в технологии получения ЛЛФ-лио борхлорина с цельюповышения ее стабильности в процессе хранения. Представленный в работеэкспериментально-практический материал может служить теоретической базой длясоздания лиофилизированных ЛЛФ гидрофобных субстанций.Практическая значимость исследованийВ результате проведенных исследований разработан препарат «Борхлоринлипосомальный, лиофилизат для приготовления дисперсии для инъекций 1,0 мг», чтопозволило провести комплекс доклинических исследований ЛФ нового ФС ирекомендовать ее для клинических испытаний.

На основании выбранных показателейкачества составлен проект НД на препарат «Борхлорин липосомальный, лиофилизатдля приготовления дисперсии для инъекций 1,0 мг». Результаты исследований поразработке состава, технологии получения и методик анализа ЛЛФ-лио борхлоринавнедрены в работу лаборатории разработки лекарственных форм НИИ ЭДиТО ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России и научно-производственной фирмыООО «ВЕТА-ГРАНД» (Россия).Методология и методы исследованияМетодологическую основу исследования составили труды российских ученыхв области разработки технологии получения липосомальных форм диагностических и5лекарственных препаратов Н.А. Оборотовой, Е.Л. Водовозовой, А.П.

Каплуна,Ю.М. Краснопольского и др. В работе использованы методы фармакопейногоанализа, включенные в Государственную Фармакопею РФ XIII издания. Также былиучтены требования и рекомендации, представленные в руководствах под редакциейВ.В. Береговых: «Валидация аналитических методик для производителей лекарств»,Н.В. Юргеля и др.: «Руководство по валидации методик анализа лекарственныхсредств», С.Н. Быковского «Руководство по инструментальным методамисследований при разработке и экспертизе качества лекарственных препаратов»,Н.Д.

Бунятянидр.:«Практическиерекомендациипопроведениюхроматографических исследований в фармацевтическом анализе».При проведении исследования использованы: методы сравнительного документированного анализа; технологическиеметоды:получениелипиднойгомогенизация, УЗ обработка, сублимационная сушка;пленки,экструзия, химико-фармацевтические методы: хроматография в тонком слое сорбента,спектрофотометрия, лазерная спектроскопия рассеяния, потенциометрия; математические методы анализа и обработки результатов, полученных в ходеэкспериментальной работы.Степень достоверности результатовПри проведении экспериментальной работы использовано сертифицированноесовременное оборудование.

Методами статистической обработки установленапрецизионность и правильность результатов исследований, что позволяет считать ихдостоверными.Апробация работыМатериалы научных исследований по теме диссертации были представлены наконференциях: Белорусско-Российской научно-практической конференции смеждународным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (23-25мая 2013 г., Минск), Всероссийской научно-практической конференции смеждународным участием «Противоопухолевая терапия: от эксперимента к клинике»(20-21 марта 2014 г., Москва), V Научно-практической конференции «Актуальныепроблемы оценки безопасности лекарственных средств» (20 марта 2014 г., Москва),XII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием«Отечественные противоопухолевые препараты» (31 марта-1 апреля 2015 г., Москва).Апробация диссертационной работы прошла 28 октября 2015 г.