Диссертация (Исследования по разработке и стандартизации комплексного урологического растительного средства), страница 23

4.4.1.8).Таблица 4.4.1.8Результаты валидационной оценки методики количественного определениясуммы флавоноидов в экстракте сухом в пересчёте на лютеолин-7-гликозид№п/п1Параметрывалидации21.Правильность2.СходимостьКритерий приемлемости3Процент восстановления98,0-102%Коэффициентвариации не более 2%Экспериментальныеданные499,93%1-ый день CV=1,56%2-ой день CV=1,60%168Продолжение таблицы 4.4.1.81233.ВоспроизводимостьКоэффициентвариации не более 2%4.Специфичность5.Линейность идиапазон41-ая лаборатория:CV=1,252-ая лаборатория:CV=1,61.Доказана идентичностьспектров поглощенияокрашенных комплексовводно-спиртового1.Совпадение спектровизвлечения экстрактапоглощениясухого изучаемого сбора2.Относительная ошибкаи СО лютеолин-7опытов с добавкамигликозида.должна находиться в2.Относительная ошибкапределах случайнойопытов с добавкамиошибки методики, чтонаходится в пределахсвидетельствует обслучайной ошибкиотсутствииметодики, чтосистематической ошибки.свидетельствует оботсутствиисистематическойошибки.Коэффициент0,999корреляции должен быть0,32-1,6 мг%не ниже 0,98Таким образом, разработана и валидирована методика количественногоопределения суммы флавоноидов в пересчёте на лютеолин-7-гликозид в экстрактесухом изучаемого сбора.

Данная методика в дальнейшем может быть использованапри разработке проекта Фармакопейной статьи на «Фитоурол» экстракт сухой иустановлении норм.1694.5 Количественное определение основных БАВ в экстракте сухомОпределение флавоноидовАнализ исследуемых образцов экстракта сухого по разработанной намиметодике (см. глава 4, п. 4.4) показал, что в проанализированных образцахэкстракта сухого содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7гликозид варьирует от 2,83 до 3,07% (табл. 4.5.1). Рекомендуем установить нормусодержания суммы флавоноидов в экстракте сухом не менее 2,8%Таблица 4.5.1Результаты количественного определения суммы флавоноидов в пересчете налютеолин-7-гликозид в «Фитоурол» экстракте сухом (n=5, р=0,95)№12245Среднее из 5-ти определенийСодержание суммы флавоноидов впересчете на лютеолин-7-гликозид, %2,833,052,953,072,882,956±0,13Метрологические характеристики методики представлены в табл.

4.5.2.Таблица 4.5.2Метрологические характеристики методики количественного определения суммыфлавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид в «Фитоурол» экстракте сухомn5f4Р, %95t (Р,f)2,78_Х, %2,9562S0,01088S0,1043_ΔХ0,13_E, %4,39Среднее содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7гликозид в экстракте сухом изучаемого сбора составляет 2,9±0,13%.170Определение арбутинаКоличественное определение арбутина в сухом экстракте изучаемого сборапроводили методом йодометрического титрования по ГФ XI изд. [29] и методомВЭЖХ (см.

глава 2, п. 2.3.3) [155].Результаты проведенных исследований количественного определенияарбутина в экстракте сухом приведены в табл. 4.5.3.Таблица 4.5.3Результаты количественного определения арбутина в «Фитоурол» экстрактесухом разными методами (n=5, р=0,95)№12345Среднее из 5-ти определенийСодержание арбутина найденное методом, %ГФ XIВЭЖХ2,234,032,254,142,284,062,294,172,244,214,12±0,092,258±0,03Как видно из табл. 4.5.3, содержание арбутина в разных образцах экстрактасухого методом йодометрического титрования колеблется от 4,03 до 4,21%, аметодом ВЭЖХ – от 2,23 до 2,29%. Так, сравнение результатов определенияарбутина разными методами показало, что фармакопейным методом результат в1,5 раза выше, по сравнению с полученными результатами, найденными ВЭЖХметодом.Метрологические характеристики методик представлены в табл.

4.5.4 и 4.5.5.Таблица 4.5.4Метрологические характеристики методики количественного определенияарбутина в экстракте сухом изучаемого сбора фармакопейным методомn5f4Р, %95t (Р,f)2,78_Х, %4,1162S0,00183S0,04278_ΔХ0,053_E, %1,29171Таблица 4.5.5Метрологические характеристики методики количественного определенияарбутина в экстракте сухом изучаемого сбора методом ВЭЖХn5f4Р, %95Таким_Х, %2,258t (Р,f)2,78образом,согласно2S0,00067_ΔХ0,032S0,0258проведеннымисследованиям_E, %1,43среднееколичественное содержание арбутина в экстракте сухом изучаемого сборафармакопейным методом составило 4,12±0,09%; ВЭЖХ – 2,26±0,03%.Определение полисахаридов (инулина)Определение содержания суммы полисахаридов в пересчете на фруктозу вэкстракте сухом изучаемого сбора проводили по методике ГФ РФ XIII изд. (см.глава 2, п.

2.3.4) [27].В качестве стандартного образца использовали стандартный образецфруктозы, так как максимумы поглощения водных растворов стандартного образцафруктозы и экстракта сухого находятся в одной области 480±2 нм (рис. 4.5.6).(1)(2)Рис. 4.5.6 Спектры поглощения комплексов водного извлечения экстракта сухогои раствора стандартного образца фруктозы с резорциномРезультаты по количественному определению суммы полисахаридов впересчере на фруктозу в экстракте приведены в табл.

4.5.7.172Таблица 4.5.7Результаты количественного определения полисахаридов в пересчете на фруктозув «Фитоурол» экстракте сухом (n=5, р=0,95)Содержание полисахаридов впересчете на фруктозу, %3,603,893,743,643,893,752±0,17№12345Среднее из 5-ти определенийКак видно из табл. 4.5.7, в изученых образцах экстракта сухого содержаниесуммы полисахаридов в пересчете на фруктозу варьирует от 3,60 до 3,89%.Метрологические характеристики методики представлены в табл. 4.5.8.Таблица 4.5.8Метрологические характеристики методики количественного определения суммыполисахаридов в пересчете на фруктозу в экстракте сухом изучаемого сбораn5f4Р, %95t (Р,f)2,78_Х, %3,7522S0,01847S0,1359_ΔХ0,169_E, %4,5Таким образом, среднее содержание суммы полисахаридов в пересчете нафруктозу в экстракте сухом составляет 3,75±0,17%.Определение дубильных веществОпределение дубильных веществ в пересчёте на танин в экстракте сухомизучаемого сбора проводили методом перманганометрического титрованиясогласно Государственной Фармакопеи (глава 2, п.

2.3.5) [27, 28].Результаты проведенных исследований приведены в табл. 4.5.9.173Таблица 4.5.9Результаты количественного определения дубильных веществ в пересчете натанин в «Фитоурол» экстракте сухом (n=5, р=0,95)Содержание дубильных веществ впересчете на танин, %3,933,984,094,113,954,012±0,04№ образца12345Среднее из 5-ти определенийКак видно из табл.

4.5.9, в разных образцах экстракта сухого содержаниедубильных веществ в пересчете на танин колеблется от 3,93 до 4,11%.Метрологические характеристики методики представлены в табл. 4.5.10.Таблица 4.5.10Метрологические характеристики методики количественного определениядубильных веществ в экстракте сухом изучаемого сбораn5f4Р, %95t (Р,f)2,78_Х, %4,0122S0,00682S0,0826_ΔХ0,11_E, %2,56Таким образом, среднее содержание суммы дубильных веществ в экстрактесухом составляет 4,01±0,11%.Определение органических кислотОпределение содержания суммы свободных органических кислот в экстрактесухом проводили титриметрическим методом в пересчете на яблочную кислоту пометодике Государственной Фармакопеи (см. глава 2, п.

2.3.5) [27, 28].Анализ исследуемых образцов экстракта сухого показал, что содержаниесуммы органических кислот в пересчете на яблочную кислоту варьирует от 1,93 до2,10% (табл. 4.5.11).174Таблица 4.5.11Результаты количественного определения органических кислот в пересчете наяблочную кислоту в «Фитоурол» экстракте сухом(n=5, р=0,95)№12345Среднее из 5-ти определенийСодержание органических кислот впересчете на яблочную кислоту, %2,011,932,101,962,042,008±0,04Метрологические характеристики методики представлены в табл. 4.5.12.Таблица 4.5.12Метрологические характеристики методики количественного определенияорганических кислот в пересчете на яблочную кислоту в экстракте сухомизучаемого сбораn5f4Р, %95Согласноt (Р,f)2,78_Х, %2,008проведенным2S0,00447исследованиям_ΔХ0,083S0,06685среднеесодержание_E, %4,13суммыорганических кислот в экстракте сухом составляет 2,0±0,08%.Проведенные исследования позволили определить, что в образцах экстрактасухого изучаемого сбора содержание флавоноидов от 2,83 до 3,07%, арбутина от4,03 до 4,21%, полисахаридов (инулина) от 3,60 до 3,89%, дубильных веществ от3,93 до 4,11%, органических кислот от 1,93 до 2,10% (табл.

4.5.13). Количественнаястандартизация экстракта сухого может проводится по содержанию суммыфлавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид и арбутину.175Таблица 4.5.13Количественное содержание БАВ в экстракте сухом изучаемого сбора(n=5, р=0,95)Суммаполисахаридов(инулин)СуммадубильныхвеществСуммаорганическихкислот12345среднееАрбутин№СуммафлавоноидовСодержание, %2,833,052,953,072,882,96±0,134,174,144,064,124,094,12±0,053,603,893,743,643,893,75±0,173,933,984,094,113,954,01±0,112,011,932,101,962,042,01±0,08Таким образом, стандартизация экстракта сухого «Фитоурол» проводится поколичественному содержанию флавоноидов и арбутина.Полученные данные могут быть использованы при разработке проектаФармакопейной статьи на экстракт сухой «Фитоурол» и установлении норм.4.6 Определение показателей качества экстракта сухогоОпределение показателей качества экстракта сухого изучаемого сборапроводили согласно общей фармакопейной статье «Экстракты» ГФ XI изд., вып.2 и ГФ РФ XIII изд., ОФС.1.4.1.0021.15 [27, 28].Определение внешнего вида экстракта сухого проводилось органолептически.На образцах пяти серий установлено, что экстракт сухой представляет собойаморфный порошок от светло-коричневого до темно-коричневого цвета соспецифическим запахом, горьковатого слегка вяжущего вкуса.

Гигроскопичен,слегка комкуется.176Определение потери в массе при высушивании. Около 0,5000 г (точнаянавеска) экстракта сухого сушили при температуре от 85 до 100С до постоянноймассы.Определение тяжёлых металлов проводилось в зольном остатке по ГФ РФXII изд., вып. 1 и ГФ РФ XIII изд., ОФС.1.2.2.2.0012.15 [26, 27].Результаты испытаний по пяти образцам экстракта сухого представлены втабл.

4.6.1.Таблица 4.6.1Результаты испытаний показателей качества экстракта сухого изучаемого сбораОбразецОписание12345соответствуетсоответствуетсоответствуетсоответствуетсоответствуетПотеря в массе привысушивании, %3,73,22,72,93,3Тяжёлые металлысоответствуетсоответствуетсоответствуетсоответствуетсоответствуетНасыпная масса экстракта сухого «Фитоурол» при свободном падении – 0,48г/см3, при уплотнении – 0,76 г/см3.

Сыпучесть – 1,90 г/сек, угол естественногооткоса 35-37°. Потеря в массе при высушивании не превышает 5%.177ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 41. Установлены оптимальные параметры экстрагирования изучаемого сборадля получения экстракта сухого: экстрагент – горячая вода (70°С), соотношениесырья и экстрагента – 1:10, измельченность сбора – 2 мм, кратность и времяэкстракции – трехкратно, 60 мин.; разработана лабораторная схема полученияэкстракта сухого из исходного сбора.2. Качественными реакциями, а также методами УФ-спектрофотометрии, ТСХиВЭЖХ проведеноизучение качественногосоставаэкстрактасухого.Подтверждено наличие в экстракте: флавоноидов, фенолкарбоновых кислот,гидроксикоричных кислот, свободных сахаров, арбутина, дубильных веществ,кумаринов, полисахаридов, а также идентифицирована аскорбиновая кислота.3.

Для экстракта сухого разработана и валидирована спектрофотометрическаяметодика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете налютеолин-7-гликозид. Методика может быть включена в проект НД на экстрактсухой «Фитоурол».4. Установлено количественное содержание БАВ в «Фитоурол» экстрактесухом: флавоноидов 2,9±0,13%, арбутина 4,12±0,09%, полисахаридов (инулина)3,75±0,17%, дубильных веществ 4,01±0,11%, органических кислот 2,0±0,08%.178ОБЩИЕ ВЫВОДЫ1. Проведено информационно-аналитическое исследование урологическихлекарственных средств.