Диссертация (Исследования по разработке и стандартизации комплексного урологического растительного средства), страница 16

Также, полученные сведения могут служитьдополнительным источником информации при определении подлинности сбора.3.5.3 Хроматографический анализ изучаемого сбораДля детального анализа и подтверждения подлинности БАВ изучаемогосбора нами также было проведено хроматографическое исследование.3.5.3.1 Идентификация веществ методом тонкослойной хроматографииФенольные соединенияДляхроматографическогоопределенияфенольныхсоединенийиспользовали 70% спиртовое извлечение из сбора. Получение водно-спиртовогоизвлечения и хроматографическое исследование проводили по выше приведеннымметодикам (глава 2, п. 2.3.1).Результаты приведены на рис.

3.5.3.1.1.Условияхроматографииадсорбент: силикагель 60 F254;система растворителей:хлороформ-этилацетат-метанол-5% уксусная кислота (20:20:20:5);проявление: 5% раствор фосфорномолибденовой кислоты в 95% этаноле споследующим выдерживанием 5 мин при100-105°СРис. 3.5.3.1.1 Схема хроматограммы фенольных соединений:1 – спиртовое извлечение из изучаемого сбора;Растворы стандартных образцов:2 – феруловой кислоты; 3 – хлорогеновой кислоты; 4– рутина; 5 – лютеолина; 6– галловойкислоты; 7 – гиперозида113При просматривании хроматограмм извлечения из сбора наблюдали 5 зон,окрашенных в сине-фиолетовые цвета с Rf ~ 0,12 (хлорогеновая кислота); Rf ~ 0,38(галловая кислота); Rf ~ 0,44 (гиперозид); Rf ~ 0,47 (рутин); Rf ~ 0,85 (феруловаякислота), соответствующие хроматограммам стандартных образцов (флавоноидов– рутин, гиперозид и производным фенолкарбоновых кислот – хлорогеновая,галловая, феруловая).Свободные сахараДля хроматографического обнаружения свободных сахаров в качествеисследуемого раствора использовали 50% спиртовое извлечение из сбора.Получение водно-спиртового извлечения и хроматографическое исследованиепроводили по выше приведенным методикам (глава 2, п.

2.3.1).Результаты приведены на рис. 3.5.3.1.2.Условияхроматографииадсорбент: силикагель 60 F254;система растворителей:пиридин-этилацетат-вода (5:12:4);проявление: тимол-серная кислотаконц.-спирт этиловый 95%(0,5:5:95) с последующимвыдерживанием 10 мин при 100105°СРис. 3.5.3.1.2 Схема хроматограммы сахаров:1 – спиртовое извлечение из изучаемого сбора;Растворы стандартных образцов:2 – рамнозы; 3 – глюкозы; 4 – галактозы; 5 – сахарозы; 6 – арабинозы; 7 – фруктозы; 8 –маннозыНа хроматограмме исследуемого образца сбора обнаружено 3 краснофиолетовые зоны с Rf ~ 0,39 (сахароза); Rf ~ 0,50 (глюкоза); Rf ~ 0,55 (фруктоза).ФлавоноидыДля хроматографического разделения флавоноидов в качестве исследуемогораствора использовали 70% спиртовое извлечение из сбора.

Получение водно-114спиртового извлечения и хроматографическое исследование проводили по вышеприведенным методикам (глава 2, п. 2.3.1).Результаты приведены на рис. 3.5.3.1.4.Условияхроматографииадсорбент: силикагель 60 F254;система растворителей:изопропанол-муравьиная кислотавода (2:5:5);проявление: 2% раствор алюминияхлорида (III) в 95% этаноле споследующим выдерживанием 5мин при 100-105°СРис. 3.5.3.1.4 Схема хроматограммы флавоноидов:1 – спиртовое извлечение из изучаемого сбора;Растворы стандартных образцов:2 – лютеолина; 3 – апигенина; 4 – рутина; 5 – кверцетина; 6 – нарингенина; 7 – лютеолин7-гликозида; 8 – гиперозидаПосле проявления хроматограммы и просматривании в УФ-свете, наблюдали5 зон адсорбции, окрашенных в желтый цвет с Rf ~ 0,14 (кверцетин); Rf ~ 0,42(лютеолин); Rf ~ 0,62 (лютеолин-7-гликозид); Rf ~ 0,70 (гиперозид); Rf ~ 0,78(рутин); Rf ~ 0,88 (нарингенин).АрбутинДля хроматографического анализа арбутина в качестве исследуемогораствора использовали извлечения из сбора метиловым спиртом.Получение спиртового извлечения и хроматографическое исследованиепроводили по выше приведенным методикам (глава 2, п.

2.3.1).115Результаты приведены на рис. 3.5.3.1.5.Условияхроматографииадсорбент: силикагель 60 F254;система растворителей:муравьиная кислота-вода-этилацетат (6:6:88);проявление: 1% раствордихлорхинонахлоримида в метаноле и 2%раствор натрия карбоната безводный.Рис. 3.5.3.1.5 Схема хроматограммы арбутина:1 – спиртовое извлечение из изучаемого сбора;Растворы стандартных образцов:2 – арбутина; 3 – галловой кислоты; 4 – гидрохинонаПосле детектирования хроматограммы наблюдали появление 2-х зонголубого цвета с Rf ~ 0,2 (арбутин), Rf ~ 0,85 (гидрохинон) и зоны коричневогоцвета с Rf ~ 0,67 (галловая кислота).Из полученных результатов видно, что в водно-спиртовых и водныхизвлечениях сбора идентифицированы флавоноиды (рутин, гиперозид, лютеолин,лютеолин-7-гликозид,кверцетин,нарингенин),фенолкарбоновыекислоты(галловая), гидроксикоричные кислоты (хлорогеновая, феруловая), свободныесахара (сахароза, глюкоза, фруктоза), фенологликозид (арбутин).1163.5.3.2 Идентификация веществ методом высокоэффективной жидкостнойхроматографииФенольные соединенияРезультатыисследованиякачественногофенологликозидов,фенолкарбоновыхподтвержденыдополненыикислотметодомвсоставаизучаемомвысокоэффективнойфлавоноидов,сборебылижидкостнойхроматографии.Для исследования использовали водно-спиртовое извлечение из сбора,полученное экстракцией 70% этанолом.

Получение водно-спиртового извлеченияи хроматографическое исследование проводили по выше приведенным методикам(глава 2, п. 2.3.3).Результаты проведенного ВЭЖХ анализа исследуемого водно-спиртовогоизвлечения сбора представлены на рис. 3.5.3.2.1 – 3.5.3.2.2 и в табл. 3.5.3.2.3.1000ch20 2468лютеолин200кверцетин300нарингинин400о-метоксикума500коричная к-та600н700ннэллаговая к-таннгалловая к-танкатехинЭГКГаллатнэпикатехинхлорогеноваяцикориеваяк-ткнкофейная к-таннеохлорогеновандикумаринферуловая к-таизоферуловая кнн800гиперозидрутин900лютеолин7глюкарбутинmV10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 минРис.

3.5.3.2.1 ВЭЖХ-хроматограмма фенольных соединений водно-спиртовогоизвлечения изучаемого сбора1170ch20 123456789коричная к-таннэллаговая к-та100н200н300гиперозидрутин400лютеолин7глюк500н600изоферуловая кн700феруловая к-тангалловая к-танкатехинЭГКГаллатнэпикатехинхлорогеновая кцикориеваяк-тнкофейная к-та800дикумарин900ннеохлорогенованарбутинmV10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 минРис. 3.5.3.2.2 ВЭЖХ-хроматограмма фенольных соединений водно-спиртовогоизвлечения изучаемого сбораТаблица 3.5.3.2.3Компонентный состав фенольных соединений изучаемого сбора методом ВЭЖХ№Время, мин11.2.3.4.5.6.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17.18.19.23,5433,8784,0724,5414,7184,9865,1465,3375,7596,0216,2486,8297,4147,758,4059,43210,3311,4712,14Высота,mV3750,23353,71485,42219,65200,92278,92293,81216,18136,84131,34161,40120,1761,7565,0876,2537,3343,1944,8640,47Площадь,mV*сек413571,883021,638342,633576,671642,303753,883772,912920,522667,541595,124090,543652,421132,441941,113578,121569,261706,492302,841452,85Название5АрбутинНеидентифиц.Галловая к-таКатехинНеидентифиц.ЭГКГаллатНеидентифиц.ЭпикатехинХлорогеновая к-таЦикориевая к-таНеидентифиц.Кофейная к-таНеидентифиц.Неохлорогеновая к-таНеидентифиц.ДикумаринФеруловая к-таИзоферуловая к-таНеидентифиц.118Продолжение таблицы 3.5.3.2.3120.21.22.23.24.25.26.27.28.29.30.31.32.33.213,1616,0618,6619,3922,2524,2825,8126,6227,9831,2934,4439,5145,6951,61384,92160,8583,5576,6688,4775,5264,7764,9161,6750,7838,7141,8158,6921,7044860,7116032,538130,765996,249720,988531,893518,885893,489245,058452,206261,2812778,9718180,925202,745Неидентифиц.Лютеолин-7-гликозидГиперозидРутинНеидентифиц.Неидентифиц.Неидентифиц.Эллаговая к-таНеидентифиц.Коричная к-тао-метоксикумаринНарингенинКверцетинЛютеолинВ изучаемом сборе методом ВЭЖХ идентифицировано наличие 21соединения фенольной природы, которые представлены фенологликозидом(арбутин); флавоноидами (рутин, гиперозид, лютеолин, кверцетин, нарингенин,лютеолин-7-гликозид); фенолкарбоновыми кислотами (галловая, эллаговая);гидроксикоричными кислотами (хлорогеновая, феруловая, неохлорогеновая,изоферуловая,кофейная,цикориевая,коричнаякислоты);производнымидубильных веществ (эпикатехин, катехин, эпигаллокатехингаллат); кумаринами(дикумарин, метоксикумарин).Таким образом, нами был подтвержден и дополнен качественный составфлавоноидов, фенологликозидов, фенолкарбоновых кислот в изучаемом сборе.Свободные сахара и органические кислотыДля идентификации свободных сахаров и органических кислот методомВЭЖХ в качестве исследуемого раствора использовали водное извлечение изсбора.