Автореферат (Клинико-иммунологические возможности оценки активности и прогноза локального и генерализованного вариантов гранулематоза Вегенера), страница 4

Выявление признаков гранулематозного поражения имело статистическизначимую прямую корреляционную зависимость с обнаружением мРНК ИЛ-18 (r=0,63) и19обратную корреляционную связь с обнаружением мРНК ИЛ-4 (r=- 0,73) и обнаружением мРНКИЛ-10 (r=-0,48) в МПК.При поражении носа и придаточных пазух носа были установлены достоверные обратныекорреляционные зависимости с наличием экспрессии мРНК ИЛ-4 и мРНК ИЛ-12 (r=-0,86), атакже с понижением уровня ИФН-α в сыворотки крови (r=-0,68).

При поражении органа слуха убольныхГПАотмечаласьстатистическизначимаяполнаяобратнаякорреляционнаязависимость с экспрессией мРНК ИЛ-12 (r=-1,00), а также отрицательная связь с уровнемпродукции ИЛ-18 в сыворотки крови (r=-0,34). Поражение органа зрения было достоверноассоциировано с обнаружением экспрессии мРНК ИЛ-4, ИЛ-12 (r=1,00) и повышением уровняИЛ-18 в сыворотке крови (r=0,40). При поражении гортани у больных ГПА были установленыстатистически значимые обратные корреляционные зависимости с наличием экспрессии ИФН-γ(r=-1,00), ИЛ-6 (r=-0,57), и уровнем продукции ИЛ-18 (r=-0,55).При генерализованной форме ГПА с вовлечением легких отмечались достоверныекорреляционные связи с обнаружением экспрессии мРНК ИФН-γ (r=0,57), ИЛ-6 (r=0,41) и ФНОα (r=0,41), а также статистически значимая прямая корреляция с повышением уровня ИЛ-18 всыворотки крови (r=0,32).

Поражение почек у больных ГПА ассоциировано с обнаружениемдостоверных обратных корреляционных зависимостей с наличием экспрессии мРНК ИФН-α (r=0,36).Помимо исследования корреляционных связей изменения цитокинов при пораженииразличных органов и систем, проводилось исследование корреляционных зависимостейизменения цитокинов c изменение различных лабораторных показателей. Установлено, чтоповышение уровня креатинина выше нормы имело достоверную прямую корреляцию собнаружением экспрессией мРНК ИФН-гамма(0,53), ИЛ-6 (0,41) и ИЛ-12 (0,7) в мононукларахпериферической крови. Обнаружение протеинурии у больных ГПА с поражением почек имелопрямую достоверную корреляцию с сывороточными уровнями ИЛ-8 (r=0,52) и ИЛ-18 (r=0,33).При более активном течении гломерулонефрита (протеинурии более 0,5 г/сут) помимо ИЛ-8(r=0,48) и ИЛ-18 (r=0,53) определялась достоверная прямая корреляционная связь ссывороточным уровнем ИЛ-1β (r=0,47).

Проводилось также исследование корреляционныхзависимостей между уровнями экспрессии и продукции цитокинов и наличием гематурии убольных генерализованным ГПА с поражением почек. Достоверных корреляционных связейобнаружено не было.Проводилось исследование корреляционных связей с наличием АНЦА. У 46 (76,7%)больных ГПА определялись АНЦА. Определена достоверная прямая корреляционная20зависимость между наличием АНЦА и обнаружением мРНК ИЛ-18 (0,48), а также достовернаяобратная корреляционная связь между наличием АНЦА и обнаружением мРНК ИФН-альфа (0,43). Повышение уровня С-реактивного белка выше нормы имело достоверную прямуюкорреляцию с обнаружением экспрессией мРНК ИЛ-4 (0,71), ИЛ-8 (0,51), ИЛ-18 (0,65) и ФНОальфа (0,63).Факторы риска развития обострения ГПА в течение одного года.У 42 из 60 обследованных нами больных ГПА (14 мужчин и 28 женщин, в возрасте от 18до 77 лет) проводилось наблюдение в динамике.

Минимальный срок наблюдения составил 10месяцев, максимальный срок наблюдения - 18 месяцев. У всех обследованных больныхвыполнялась оценка активности васкулита с использованием шкалы BVAS. Среднее значениеиндекса BVAS на момент первичного обследования составляло 2,7 баллов.

Нарастание индексана 2 балла по сравнению с данными предыдущей госпитализации расценивалось как нарастаниеактивности ГПА.У 30 из 42 пациентов отсутствовали данные за наличие отрицательной динамики посравнению с предыдущей госпитализацией. У 12 человек определялось повышение индексаBVAS на 2 и более баллов по сравнению с предыдущим обследованием.В течение всего периода наблюдения все пациенты получали иммуносупрессивнуютерапию,втомчислеглюкокортикостероидами–глюкокортикостероидами более 20 мг/сут – 17 (40,5%)40(95,2%)человек,изних, циклофосфамидом –18 (42,9%) ,метотрексатом – 4 (9,5%), азатиоприном – 9 (21,4%), микофенолатом мофетилом - 1 (2,4%),ГИБТ (ритуксимаб) - 1 (2,4%).Определение факторов риска при исследовании транскрипции генов цитокиновВсем 42 больным, включенным в динамический контроль при первичном обследованиипроводилось исследование транскрипции цитокинов методом ОТ-ПЦР.

При обследованиибольных через год, у 12 человек было выявлено нарастание индекса BVAS на 2 балла и более, у30 указанного повышение индекса BVAS не определялось.Выполнен статистический анализ с использованием метода отношения шансов. (табл. 8).Обнаружение экспрессии мРНК цитокинов у больных ГПА расценивалось как наличие факторариска, отсутствие экспрессии мРНК цитокина - как отсутствие фактора риска.21Таблица 8 - Определение факторов риска повышение индекса BVAS на 2 балла иболее в течение года у больных ГПА при оценке транскрипции цитокинов.ЦитокиныОтношение шансов (95% ДИ)РТранскрипция цитокинов (N=42)ИФН-α1.17(0.28-4.89)0.83ИФН-γ1.00(0.17-6.03)1.00ИЛ-1β0.50(0.12-2.02)0.33ИЛ-21.8(0.26-12.41)0.55ИЛ-40.79(0.03-20.66)0.89ИЛ-60.47(0.09-2.57)0.38ИЛ-80.38(0.09-1.69)0.20ИЛ-100.80(0.14-4.66)0.80ИЛ-120.79(0.03-20.66)0.89ИЛ-180.44(0.11-1.77)0.25ФНО-α0.21(0.02-1.90)0.17Установлено, что обнаружение транскрипции генов изученых цитокинов не являетсяфактором риска повышение индекса BVAS на 2 и более баллов в течение года у больных ГПА.Определение факторов риска при исследовании продукции цитокиновПроводилось изучение факторов риска нарастания индекса BVAS на 2 и более баллов убольных ГПА при исследовании содержания цитокинов в сыворотке крови с использованиеметода ИФА.У 28 из 42 больных ГПА, при первичном обследовании, проведен иммуноферментныйанализ (ИФА) с целью оценки содержания цитокинов в сыворотки крови.

При динамическомобследовании, из 28 больных, у 9 выявлено нарастание индекса BVAS на 2 балла и более, у 19 указанного повышение индекса BVAS не определялось.Проводилось определение среднего содержания цитокинов в сыворотке крови, а такжезначения межквартильного размаха у больных с наличием и отсутствиемотрицательнойдинамики ГПА (табл. 9).Обнаружение значения цитокина в пределах межквартильного размаха, определяемого убольных с отрицательной динамикой ГПА, расценивалось как наличие фактора риска,обнаружение цитокинов вне пределов межквартильного размаха - как отсутствие фактора риска.Выполнен статистический анализ с использованием метода отношения шансов. (таб.

28)22Таблица 9 - Определение факторов риска повышение индекса BVAS на 2 балла и более втечение года у больных ГПА при оценке содержания цитокинов в сыворотке крови).ЦитокиныОтношение шансов (95% ДИ)РИФН-α9.14(0.46-182.62)0,15ИЛ-1β6.67(1.10-40.44)*0,04*ИЛ-82.22(0.43-11.60)0.34ИЛ-183.15(0.52-19.27)0.21ФНО-α7.21(0.36-145.99)0,20Продукция цитокинов (N=28)* P ˂ 0,05 (метод отношения шансов)Достоверным фактором риска повышения индекса BVAS на 2 и более баллов у больныхГПА в течение одного года является обнаружение ИЛ-1β в сыворотке крови в пределах от 5,1 до19,7 пг/мл.Выводы:1. Экспрессия мРНК цитокинов в МПК больных с локальной формой ГПА не отличается оттаковой у больных с генерализованной формой ГПА и характеризуется увеличением экспрессииИФН-α, ИЛ-8 и снижением экспрессии ФНО-α и ИЛ-12 по сравнению со здоровымидобровольцами.2. Цитокиновый профиль в МПК больных с обострением и ремиссией ГПА идентиченцитокиновому профилю больных с локальной и генерализованной формами заболевания, однакопри обострении ГПА по сравнению со здоровыми добровольцами отмечается достоверноеповышение экспрессии мРНК ИЛ-18, который является маркером активности заболевания.3.

Поражение почек у больных ГПА имеет достоверную обратную корреляцию с экспрессиеймРНК ИФН-α, поражение легких - прямую корреляционную связь с экспрессией мРНК ИФН-γ,ИЛ-6, ФНО-α в МПК и продукцией ИЛ-18. Содержание ИЛ-18 более 258,5 пг/мл в сывороткекрови больных ГПА является маркером генерализованной формы заболевания.4. У больных ГПА достоверным фактором риска нарастания активности в течение 1 годаявляется сывороточный уровень ИЛ-1β в диапазоне от 5,1 до 19,7 пг/мл, а обострениезаболевания ассоциировано с повышением сывороточного уровня ИЛ-8.5. Достоверные прямые корреляционные зависимости обнаружены между наличием признаковваскулита и продукцией ИФН-α, ФНО-α; поражением органа зрения и экспрессией мРНК ИЛ-4,ИЛ-12 и продукцией ИЛ-18; обратные корреляционные связи - между наличием признаков23гранулематозного воспаления, поражением носа, придаточных пазух и экспрессией мРНК ИЛ-4;поражением органа слуха и экспрессией мРНК ИЛ-12, продукцией ИЛ-18.Практические рекомендации1.Обнаружение сывороточной концентрации ИЛ-1β в диапазоне от 5,1 до 19,7 пг/млуказывает на вероятность повышения индекса BVAS на 2 и более баллов в течение ближайшегогода у больных ГПА.2.Определение мРНК ИЛ-18 в мононуклеарах периферической крови целесообразнодля дополнительного определения активности заболевания.3.ИсследованиесывороточногоуровняИЛ-18у больных ГПА возможноиспользовать как дополнительный маркер наличия генерализованной формы ГПА.СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ1.