Автореферат (Характеристика грибов рода Candida, выявляемых у ВИЧ-инфицированных пациентов), страница 2

Москва, 4 декабря 2015 г.); VIВсероссийской научно –практической конференции с между народным участиеммолодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье. Гигиена иэкология урбанизированных территорий», посвященная 85-летию ФГБУ «НИИЭЧ и ГОС ИМ. А.Н. Сысина» Минздрава России, (Москва ,13 – 14 сентября 2016г.); Материалах IX, X Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционнымболезням с международным участием, Москва, 2017 г., 2018; 28th EuropeanCongress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases (Madrid, Spain, from 21 24 April 2018).Личный вклад.

На основании проведенного анализа отечественной изарубежной литературы автором, сформулированы цель задачи, выбраныоптимальныеметодынастоящегоисследования.Авторпринималнепосредственное участие в клиническом обследовании больных, собираланамнез, вел клиническое наблюдение, формировал базу данных. Автором личнопроведено клиническое обследование ВИЧ инфицированных пациентов настадии 3, 4А, 4Б, 4В, выполнены микробиологические исследования по темедиссертации, включая сбор, посев биологического материала, приготовлениедиагностических сред, проведения идентификация Candida spp. методомINTEGRAL SYSTEM YEASTS plus, идентификация Candida spp.

при помощиКАНДИДАтест21,определениячувствительностивыделенныхштаммовCandida к антимикотическим препаратам диско-диффузионный методом.8Статистическаяобработкаматериаловисследования,обобщениеполученных результатов, представление их в виде таблиц, рисунков, диаграммвыполнены автором лично, также проведена статистическая обработка, анализ иобобщение полученных данных.Внедрение результатов в практику принадлежит автору.Соответствие диссертации паспорту научной специальности.Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности14.01.09- ‘Инфекционные болезни’. Результаты проведенного исследованиясоответствуют области исследования специальности, конкретно – пунктам1,2,3,4 ‘Инфекционные болезни’.Публикации по теме диссертации. По теме диссертации опубликовано 11научных работ, в т. ч.

4 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ (2оригинальные и 2 обзорные), в которых полностью отражены результатыдиссертационного исследования.Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на119 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы,описания методов и материалов исследования, результатов работы, заключения,выводов, практических рекомендаций, приложения. Диссертация содержит 13рисунков, 15 таблиц и 9 диаграмм и 10 фотографий, а также 3 клиническихпримера. В работе использованы 50 отечественных и103 иностранныхисточников литературы.СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.Методология и методы исследования: Дизайн обследования пациентов былоснован на открытом, контролируемом, рандомизированном и проспективномисследовании.

Лабораторные исследования осуществлялись на кафедрахинфекционных болезней, а также микробиологии, вирусологии, иммунологииСеченовского Университета. Все исследования проведены с согласия Комитетапо этике при ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинскийуниверситет им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)9протокол № 04-18, на основании требований Хельсинской декларацииВсемирнойассоциации«Этическиепринципыпроведениянаучныхмедицинских исследований с участием человека» от июня 1964 г.

с учётомкритериев включения и исключения.Всего было обследовано 48 человек. В 2014г. в исследование быловключено 19 пациентов, в 2017г.- 29 человек, из них 51% мужчин и 49% женщин(медиана возраста составила 38 лет). Возрастной состав представлен на рис.2.Возраст пациентов колебался от 20 до 69 лет, 65% составили лица от 20 до40 лет,как у женщин, так и у мужчин преобладали лица молодого возраста, чтоотражено на рис.3. Срок наблюдения за пациентами, к моменту обследованиясоставил в среднем 6 лет с колебаниями от 1 года до 18 лет.

Перед началом АРТу 39,9% больных количество CD4+-лимфоцитов было менее 200 клеток/мкл.Среднее количество CD4+-лимфоцитов на момент включения в исследованиесоставило 265 клеток/мкл, из них данный показатель был менее 350 клеток/мклу 77,8%, менее 50 клеток/мкл у 33,1% обследуемых пациентов. Показательмедианы количества CD4+- 153 клеток/мкл min 0 max 696) в 2017г. и 113клеток/мкл (min 0 max 412) в 2015г., что является показателем гомогенности исопоставимости двух групп обследуемых пациентов по выраженностииммуносупрессии.Показатель медианы иммунорегуляторного индекса составил 0,175 (min 0max 2,26) (со средним значением 0,399) в 2017г. и 0,23 (min 0 max 1,28) (сосредним значением 0,318) в 2015г., что также является показателемгомогенностииоднородностиобследуемых пациентов,вотношениивыраженности иммуносупрессии.Принимая во внимание совокупность клинико-лабораторных данных,стадию ВИЧ-инфекции 3 (субклиническую) имели 2% пациентов; 4А -10%пациентов, стадию 4Б -8% и подавляющее большинство– стадия 4В-80% (79% в2015г., 80% в 2017г).10Приобследованиипациентовбылидиагностированызаболевания,вызванные Candida spp.

различной локализации. Кандидозный эзофагит былвыявлен у 63% пациентов, грибковый колит у 2%, себорейный дерматит у 12%.При исследовании мокроты с целью диагностики оппортунистическихинфекций методом ПЦР C. albicans была обнаружена у 34,69%, C. glabrata у16,32%, C. krusei у 8,16% пациентов.Анализ полученных результатов выявил преимущественное присутствие упациентов ВЭБ, ЦМВ, C. albicans, C. glabrata в различных сочетаниях.Объекты исследования – образцы мазков из кишечника и ротоглотки ВИЧинфицированные пациенты на стадии 3, 4А, 4Б, 4В, находившихся настационарном лечение в ИКБ №2 с апреля 2015- по апрель 2017гг.Методыисследования.микробиологические,Длявыполнениябиохимические,работыиспользовалимолекулярно-генетическиеистатистические методы.Лабораторные методы исследования. Всем пациентам, включенным висследование, былопроведено стандартное клинико-эпидемиологическоеобследование (сбор анамнеза, оценка жалоб, данные физикального осмотра),лабораторные методы обследования (общеклинический и биохимическийанализы крови, серологическое исследование для определения маркероввирусных гепатитов и ВИЧ-инфекции, определен иммунный статус пациентов(включая количество CD4 клеток/мкл, CD4%, CD8 клеток/мкл, CD8%, CD4/8),определение наличия и уровня РНК ВИЧ в сыворотке крови (анализатор дляпроведения ПЦР Abbott m2000rt 9K 1501).

У обследованных пациентов такжебыла произведена диагностика оппортунистических инфекций методом ПЦР наосновании исследования мокроты, включая ВЭБ ЦМВ, ВГ 6 типа, ВПГ1,2 типа,MБТ, Candida albicans, Candida glabrata, Candida krusei, Candida parapsilosis(прибордляпреаналитическойподготовкиПЦР-анализов"КобасАмплиПреп"Кобас АмплиПреп, анализатор "Кобас ТакМан 48", прибор дляпреаналитической подготовки ПЦР-анализов "Кобас АмплиПреп", анализатор11для проведения ПЦР Abbott m2000rt 9K 1501, прибор m2000 04J72-01 AbbottMolecular).Для выделения культур Candida spp. образцы фекалий и мазков изротоглотки, полученные у ВИЧ-инфицированных пациентов культивировалисьна среде Сабуро-2 и Кандида-хром агаре, после чего производиласьориентировочная дифференцировка грибов по цвету колоний. ИдентификацияCandida spp.

выполнена методом ПЦР-РВ, «АмплиСенс C. albicans / C. glabrata/C. krusei-МУЛЬТИПРАЙМ-FL» (Чехия), INTEGRAL SYSTEM YEASTS plus., атакжепри помощи тест-системы КАНДИДАтест21(Erba Lachema , Чехия).Оценка чувствительности к антимикотическим препаратам проводилась дискодиффузионнымметодом(Oxoid,биохимическиеисследованияВеликобритания).ферментативнойБылиактивностивыполненыспомощьюкоммерческих тест-систем (Remel, Erba Lachema, Чехия) для подтверждениявидовой принадлежности представителей родаCandida spp.

Особенностиморфологии клеток культур грибов рода Candida изучали с помощьюфлуоресцентного микроскопа AxioImager.Z1 (Carl Zeiss, Германия).Все перечисленные исследования выполнены на базе ИКБ №2, а такжеФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского.Статистическаяобработкарезультатов. Результатыисследованияобрабатывали с помощью программы STATISTICA for Windows версия 6.0.Использовали непараметрические и параметрические методы. Критериемстатистической достоверности получаемых данных считали общепринятую вмедицине величину р<0.05.РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХОБСУЖДЕНИЕ.Всего получено 84 изолята идентифицированных как грибы рода Candida,в т.ч.

C.albicans, C.glabrata, C.tropicalis, C.krusei, причём C.albicansдоминировала по численности. Был произведён анализ изменения видового12состава Candida spp., полученных при исследовании мазков из ротоглотки икишечника в 2015 и 2017гг [диаграмма 1].2015 г. % от общего числа изолятов2017 г. % от общего числа изолятовC. albicans604020C. kruseiC.

glabrata0C. tropicalisДиаграмма 1. Изменение спектра грибов рода Candida, выделенных отВИЧ-инфицированных пациентов в 2015 и 2017гг.Видовой состав грибов рода Candida изменился к 2017г. (p <0,05) за счетвытеснения C.glabrata (43,8% в 2015г и 10,8% в 2017г) штаммами C.crusei (0% в2015г и 13,5% в 2017г) и C. tropicalis (0% в 2015г и 18,9% в 2017г).В 2017 г.

впервые выявлены C. tropicalis, повысилось долевое участие C.albicans и C. krusei (соответственно в 1,54 и 3,65 раз, p>0,05). В то же время, пулC. glabrata в 2017 г. был существенно сокращен - в 5,49 раза (p<0,001).Следовательно, анализ динамики видового состава грибов рода Candida показалего существенное изменение в 2017г., по сравнению с данными 2015г..[диаграмма 1]. По данным корреляционного анализа, C. albicans конкурирует сдругими видами грибов данного рода – обнаружена отрицательная связь среднейсилы с C. glabrata (r=-0,418), C. tropicalis (r=-0,529) и C. krusei (r=-0,475).Среднее количество изолятов, полученных от одного пациента, в общемсоставило 1,60.

При этом оно также не было постоянным, а заметно возросло с1,29 в 2015 г. до 1,95 в 2017 г., т.е. увеличилось в 1,51 раза и свидетельствует отом, что в образцах 2017г. Сandida spp. демонстрировали большую тенденцию кобразованию ассоциаций.13Было проанализировано изменение долевого участия гетерогенныхассоциаций грибов рода Candida у ВИЧ-инфицированных пациентов в 2017г., посравнению с 2015г.Установлено, что если в 2015 г. лишь у 25,0% пациентов обнаруживалисьассоциации грибов рода Candida, то в 2017 г. их доля возросла в 2,10 раза идостигла 52,6%.