Диссертация (Совершенствование методов стандартизации многокомпонентных лечебно-профилактических средств растительного происхождения, применяемых в стоматологии), страница 13

23),относящихсякследующиммонотерпены – D-лимонен,химическимгруппам:моноциклическиементол, цинеол (эвкалиптол); бициклическиемонотерпены – α- и β-пинен, камфен, карен; кислородные производныебициклических монотерпенов – кетоны туйон и камфору; ароматическийуглеводород – о-цимол; ароматические фенолы и фенольные эфиры - тимол иэвгенол;сексвитерпенгруппыхумуланов–альфа-хумулен,2-(2,4-гексадиинилиден)-1,6-диоксаспиро[4,4]нон-3-ен (тонгаосу) – соединение,относящееся к группе природных спирокеталь-енольных эфиров.

Кроме того,был идентифицирован этанол, являющийся экстрагентом [89]. Общий видхроматограммы представлен на рис. 20.Установлена следующая последовательность выхода пиков БАВгруппы терпеноидов и ароматических соединений на хроматограмме (рис.20), соответствующая временам удерживания: 6,84 – альфа-пинен; 7,43 –камфен; 7,98 – бета-пинен; 8,67 – тонгаосу; 9,07 – D-лимонен; 9,21 – цинеол;9,57 – карен; 9,86 – о-цимол; 11,44 (11,82)– туйон; 11,80 – альфа-хумулен;12,46 – камфора; 13,09 – ментол; 22,33 - тимол; 22,56 – эвгенол.90AbundanceTIC: STOMATOF.D5.6822000002000000180000016000001400000120000010000008000009.866000009.214000009.079.572000006.007.008.009.0010.0011.44 12.4613.0911.8211.0012.0013.0014.00Time-->AbundanceTIC: STOMATOF.D6500006000009.86550000500000450000 9.2140000035000012.4611.4413.0930000011.822500009.079.5720000015000022.331000005000022.569.0010.0011.0012.0013.0014.0015.0016.0017.0018.0019.0020.0021.0022.0023.00Time-->Рис.

20. – Общий вид хроматограмм образцов препарата стоматофитВремена удерживания: 5,68 – этанол; 6,84 – альфа-пинен; 7,43 – камфен; 7,98 –бета-пинен; 8,67– тонгаосу; 9,07 – D-лимонен; 9,21 – цинеол; 9,57 – карен; 9,86 – о-цимол;11,44 (11,82) – туйон; 11,80 – альфа-хумулен; 12,46 – камфора; 13,09 – ментол; 22,33 тимол; 22,56 – эвгенол.91Таблица 23.Состав идентифицированных соединений в образцах промышленныхсерий препарата стоматофитИдентифицированное соединениеэтанолальфа-пиненкамфенбета-пинентонгаосуD-лимонен(цинеол) эвкалиптолкарено-цимолтуйонкамфораментолальфа-хумулентимолэвгенолВремя удерживания, мин5,686,847,437,988,679,089,219,579,8611,6112,4613,0913,8022,3322,56Результаты ГХ-МС анализа позволяют выделить типичные БАВ для пятивидов растительного сырья, используемого при производстве препаратастоматофит: цинеол (1,3,3-триметил-2-оксобицикло-[2,2,2]-октан), камфора(1,7,7-триметилбицикло-[2,2,1]-гептанон-2) – шалфея лекарственного листья;ментол (2-(2-пропил)-5-метил-1-циклогексанол) – мяты перечной трава;камфен (2,2-диметил-3-метиленбицикло-[2,2,1]-гептан) – корневища аира;тимол (2-изопропил-5-метилфенол) – трава тимьяна обыкновенного[24,50];тонгаосу (2-(2,4-гексадиинилиден)-1,6-диоксаспиро[4,4]нон-3-ен) – ромашкиаптечной цветки [89].

Масс-спектры БАВ представлены на рисунках 21а и21б.92AbundanceScan 3330 (7.431 min): STOMATOF.D93121800060007940002000102030136533201076741115405060708090100 110 120 130 140m/z-->Abundance#15135: Camphene93800012160004000412000027107136531510796759203040501158660708090100 110 120 130 140m/z-->IAbundanceScan 4137 (9.211 min): STOMATOF.D4381108800071600055400020000154139932912563102030405060708090 100 110 120 130 140 150 160m/z-->Abundance#25402: Eucalyptol438000816000554000200001087127151020309313912563405060154708090 100 110 120 130 140 150 160m/z-->IIAbundanceScan 5609 (12.459 min): STOMATOF.D (-5602) (-)95800010860004000556941152831232000020m/z-->Abundance622930138405060162708090100 110 120 130 140 150 160#23921: Camphor958000600081400041200010869152552902030137405060708090100 110 120 130 140 150 160m/z-->IIIРис.

21а. – Масс-спектры БАВ препарата стоматофитI – камфен; II – цинеол; III – камфора.93AbundanceScan 5896 (13.092 min): STOMATOF.D71 81959000800070006000123415000554000138300020001092910000201476330405060708016118990 100110120130140150160170180190m/z-->Abundance#1826: Menthol719000P5368180009570006000500040001233000562000138109100002030405060708090 100110120130140150160170180190m/z-->IAbundanceScan 10077 (22.316 min): STOMATOF.D135800060004000150200044 5132010203040507758 656070809111510716212890 100 110 120 130 140 150 160m/z-->Abundance#22723: Phenol, 2-methyl-5-(1-methylethyl)135800060004000150200003918 27102030407751 58 655060708091107 11712890 100 110 120 130 140 150 160m/z-->IIAbundanceScan 702 (8.509 min): CHAMOMIL.D\data.ms (-706) (-)200240000220000200000OO18000011516000014000012000012876100000157800001025060000424000018567872000001701415830405060708090 100110120130140150160170180190200m/z-->IIIРис. 21б.

– Масс-спектры БАВ препарата стоматофитI – ментол; II –тимол; III – тонгаосу.94Идентификация тимола и камфоры может служить косвеннымдоказательством наличия в образцах промышленных серий препаратастоматофит эфиромасличных фракций травы арники [89, 119] и корневищаира,соответственно.доказывающихВкачествеприсутствиевдополнительныхобразцахсоединений,препаратастоматофитсоответствующих эфиромасличных фракций, могут использоваться: туйон иальфа-хумулен – для шалфея лекарственного листьев; эвгенол – длякорневищ аира; карен и D-лимонен – для мяты перечной листьев; о-цимол –для травы тимьяна обыкновенного.Помимо основных групп БАВ в составе препарата стоматофитиспользование метода ГХ-МС позволяет одновременно идентифицировать иколичественно определить содержание спирта этилового.Использование методики ГХ-МС при анализе многокомпонентныхлекарственных препаратов растительного происхождения позволяет в однойаналитической пробе одновременно определять БАВ и спирт этиловый безтрудоемкой пробоподготовки и с меньшей затратой времени.

Пик этаноласоответствует времени удерживания 5,68 (рис.22). Помимо идентификацииэкстрагента метод ГХ-МС позволяет определить его количественно.Содержаниеспиртаэтиловоговобразцахпрепаратастоматофитисследованных серий составляет 73,08±1,70% (относительно 100% площадейвсех идентифицированных пиков). Данные о количественном содержанииспиртавобразцахпромышленныхсерийпрепаратастоматофитстатистическая обработка результатов представлены в таблице 24.и95AbundanceETHANOL5.68TIC: STOMATOF.D450000040000003500000300000025000003.123.062000000150000010000009.86EUCALYPTOLCAMPHORA9.21THUJONELIMONEN12.46MENTHOLCARENE11.4413.0911.829.079.57THUJONE7.98 PINENE5000002.004.006.00THYMOLEUGENO8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00Time-->Рис.

22. - Общий вид хроматограммы препарата стоматофитВремя удерживания: 5,68 – этанол.Таблица 24.Содержание спирта этилового в образцах промышленных серийпрепарата стоматофит№ опыта№1№2№3№4№5Содержание спирта этилового, %71,4073,0874,7874,0372,12Метрологические характеристики (Р=0,95; n=5)xSS273,081,37261,8841Δx1,70ε, %2,396Такимобразом,одновременнаяидентификацияхимическихсоединений основных групп БАВ и спирта этилового в ходе ГХ-МС анализапрепарата стоматофит позволяет достоверно оценить его качество.4.1.1.2Результаты ГХ-МС анализа промышленных образцов препаратастоматофит АМетодом ГХ-МС идентифицированы в 5 исследованных серияхпромышленных образцов препарата стоматофит А 19 соединений (табл. 25).Кроме того, были определены анестезин и спирт этиловый [46, 47].Установленаследующаяпоследовательностьвыходапиковнахроматограмме (рис. 23): 3,42 – ментанон; 3,49 – ментол; 3,96-4,00 – тимол;5,14-5,21 – бензокаин; 5,25 – азарон; 5,29 – кариофиллен; 5,45 – бисабололаоксид; 5,53 – кадален; 5,60 – глеенол; 5,61 – кариофиллена оксид; 5,72 – 7метокси-2Н-1-бензопиран-2-он; 5,80 – изокаламендиол; 6,38 – пальмитиноваякислота; 6,46 – 7-гидрокси-кадален; 6,71 – 3α-гидроксиманоол; 8,66 –тонгаосу; 8,69 – сквален.97AbundanceTIC: stomat_3.D\data.ms62.5e+072e+071.5e+071e+077500000052110118123.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.0011.0012.0013.00Time-->AbundanceTIC: stomat_3.D\data.ms3e+072.5e+072e+071.5e+071e+0735000000943.004.005.006.007.008.009.00 10.0011.0012.0013.00Time-->Рис.

23. –Общий вид хроматограммы образцов препарата стоматофит АВремена удерживания: (1) 3,42 – ментанон; (2) 3,49 – ментол; (3) 3,73 –этанол; (4) 3,96-4,00 – тимол; (5) 5,08 – камфора; (6) 5,14-5,21 – бензокаин;(7) 5,25 – азарон; 5,29 – кариофиллен; (8) 5,45 – бисаболола оксид; (9) 5,53 –кадален; 5,60 – глеенол; 5,61 – кариофиллен оксид; 5,72 – 7-метокси-2Н-1бензопиран-2-он; (10) 5,80 – изокаламендиол; 6,38 – пальмитиновая кислота;(11) 6,46 – 7-гидроксикадален; 6,71 – 3α-гидроксиманоол; (12) 8,66 –тонгаосу; 8,69 – сквален.98Таблица 25.Состав идентифицированных соединений в образцах промышленныхсерий препарата стоматофит АИдентифицированное соединениементанонментолэтанолтимолкамфораанестезиназаронкариофилленбисаболол оксидкадаленглеенолкариофиллена оксид7-метокси-2Н-1-бензопиран-2-онизокаламендиолпальмитиновая кислота7-гидрокси-кадален3α-гидроксиманоолтонгаосускваленВремя удерживания, мин3,423,493,733,96-4,005,095,14-5,215,255,295,455,535,605,615,725,806,386,466,718,668,69Типичными БАВ ЛРС, используемого при производстве препаратастоматофит А можно считать: камфора – шалфея лекарственного листья [40,46, 48, 97]; ментол, ментанон – мяты перечной трава [3, 61, 58, 85, 97]; тимол– трава тимьяна обыкновенного [58, 97, 120]; азарон, изокаламендиол –корневища аира [1, 59, 70, 97]; бисаболола оксид, тонгаосу – ромашкиаптечной цветки [44, 88];кадален, 7-гидроксикадален – трава арники.Идентификация в составе препарата стоматофит А 7-метокси-2Н-1бензопиран-2-он – соединения, характерного для химического составарастений семейства Asteracea - косвенно подтверждает наличие цветковромашки и арники.