Создание наноструктурных систем для транспорта лекарственных препаратов на основе смеси тритерпеноидов бересты, страница 22

Результаты исследования по оценке влияния профилактического применения препаратана фоне облучения в дозе 7.5 Гр представлены на рис. 80.Рис. 80. Влияние генистеина в дозе 500 мг/кг на выживаемость белых беспородных мышей, подвергнутыхоблучению в дозе 7.5 Гр.Из данных, представленных на рисунке 80, видно, что внутрибрюшинное введениеСАНЧ с генистеином по различным схемам было в равной степени эффективно. Так,профилактическое введение генистеина при курсовом приеме препарата, а также за 24 ч или 1ч до радиационного воздействия в дозе 7.5 Гр способствовало увеличению выживаемостиоблученных животных на 40%, 40% или 30% соответственно.

Стоит также отметить, что114значимых отличий показателей выживаемости между опытными группамиконтролемобнаружено не было.Были также выявлены показатели СПЖ у облученных животных на фоне введения импрепарата в дозе 500 мг/кг по разным схемам профилактики радиационных поражений.Данные представлены на рис.

81.Рис. 81. Влияние генистеина в дозе 500 мг/кг на среднюю продолжительность жизни белых беспородных мышей,подвергнутых облучению в дозе 7.5 Гр.Установлено, что введение препарата за 24 ч или за 1 ч до рентгеновского облучения вдозе 7.5 Гр привело значимому к увеличению СПЖ мышей на 5 и 6 сут соответственно. Прииспользовании генистеина в схеме курсового приема была отмечена только тенденция кувеличению исследуемого показателя, величина которого значимо не отличалась от контроля.Таким образом, в результате проведенного исследования по оценке радиозащитнойэффективности нанопрепарата САНЧ с генистеином в схемах профилактического примененияпрепарата на фоне острого рентгеновского облучения в дозе 7.5 Гр было показано, чтоизученный нанопрепарат проявлял противолучевые свойства при различных схемах егопрофилактического использования. Однако максимальный радиозащитный эффект попоказателям выживаемости и СПЖ для генистеина был отмечен при его внутрибрюшинномвведении за 1 ч до облучения в дозе 7.5 Гр.4.4.3.2.

Оценка радиозащитной эффективности нанопрепарата САНЧ сгенистеином при терапевтическом применении препаратаДляизученияпротиволучевыхсвойствСАНЧсгенистеиномврежиметерапевтического применения препарата, генистеин в дозе 150 мг/кг или 500 мг/кг вводили115через 1 ч или 4 ч после острого облучения в дозе 7.5 Гр.

Срок введения препарата былобусловлен тем, что доврачебная помощь при радиационных поражениях должна оказыватьсяв течение 1 ч, а первая врачебная помощь – в течение 4-6 ч. Кроме того, показано, чтосинтетические и природные антиоксиданты обладают наиболее выраженным радиозащитнымэффектом при их применении не ранее чем через 4 ч после острого лучевого воздействия впоражающихдозах.Животнымконтрольнойгруппывводиливравномобъемефизиологический раствор. Оценивали динамику гибели облученных экспериментальныхживотных в течение 30 суток (рис. 82).Рис.

82. Влияние генистеина в дозе 150 мг/кг на выживаемость белых беспородных мышей, подвергнутыхоблучению в дозе 7.5 Гр.Показано, что внутрибрюшинное введение нанопрепарата САНЧ с генистеином через 1ч или 4 ч после облучения в дозе 7.5 Гр способствовало повышению выживаемостиоблученных животных на 30% и 10%, соответственно, по сравнению с контролем.

Однакозначимых отличий между исследуемыми показателями в опытной и контрольной группеобнаружено не было.Проведено изучение СПЖ облученных животных на фоне введения им нанопрепаратаСАНЧ генистеина в дозе 150 мг/кг (рис. 83).Рис. 83. Влияние генистеина в дозе 150 мг/кг на среднюю продолжительность жизни белых беспородных мышей,подвергнутых облучению в дозе 7.5 Гр.116Из данных, представленных на рисунке 83, видно, что введение генистеина через 1 чили 4 ч после острого рентгеновского облучения в дозе 7.5 Гр значимо не влияло на величинуСПЖ облученных мышей по сравнению с контролем. В дальнейшем была проведена оценкарадиозащитной эффективности САНЧ с генистеином в дозе 500 мг/кг на фоне воздействияострого рентгеновского облучения в дозе 7.5 Гр.

Результаты исследования представлены нарис. 84.Рис. 84. Влияние генистеина в дозе 500 мг/кг на выживаемость белых беспородных мышей, подвергнутыхоблучению в дозе 7.5 Гр.Показано, что показатели выживаемости защищенных препаратом облученныхживотных значимо не отличалась от контроля.Кроме того, при изучении влияния САНЧ с генистеином на СПЖ животных,подвергнутых воздействию острого рентгеновского облучения в дозе 7.5 Гр значимыхотличий по сравнению с контролем также обнаружено не было (рис. 85).Рис. 85. Влияние генистеина в дозе 500 мг/кг на среднюю продолжительность жизни белых беспородных мышей,подвергнутых облучению в дозе 7.5 Гр.Таким образом, в результате проведенного исследования по изучению радиозащитнойэффективности САНЧ с генистеином при терапевтическом применении препарата через 1 чили через 4 ч после воздействия острого рентгеновского облучения в дозе 7.5 Гр было117показано, что генистеин при данной схеме применения препарата обладает низкойрадиозащитной активностью во всем диапазоне изученных доз.4.4.3.3.

Определение степени выраженности радиозащитной эффективностинанопрепарата САНЧ с генистеиномНа следующем этапе исследования проводили изучение влияния нанопрепарата САНЧс генистеином на выживаемость животных в условиях радиационного воздействия в дозах 6.5,7.5 или 8.5 Гр. Препарат вводили профилактически в дозе 150 мг/кг за 24 ч, 1 ч дорадиационного воздействия, а также путем двух последовательных инъекций - первое введениеза 24 ч, второе - за 1 ч до радиационного воздействия.Наблюдение за животнымиосуществлялось только в течение 15 сут.

Результаты исследования представлены в таблице 7.Таблица 7. Влияние профилактического применения нанопрепарата САНЧ, содержащих генистеин, в различныесрокидо облучения на 15-сут выживаемость белых беспородных мышей-самцов, подвергнутых остромурентгеновскому облучению (Х±mх).УсловияэкспериментаКонтроль-24 ч-24 ч; -1 ч-1 чДозаоблучения, Гр6.57.58.56.57.58.56.57.58.56.57.58.5Количество выжившихживотных / общееколичество животныхв группе5/104/123/156/104/123/156/105/126/157/107/125/15Выживаемость, %СПЖ, сут5030206020206042407058339.2±1.48.0±2.79.0±2.011.1±1.19.6±0.89.9±0.610.8±0.88.8±0.99.7±0.511.7±0.910.8±2.09.3±1.2Показано, что наибольшим радиозащитным эффектом по критерию выживаемостиобладал генистеин, введенный за 1 ч до радиационного воздействия во всем диапазонеизученных доз.

При этом выживаемость животных возрастала при облучении в дозе 6.5 Гр на20%, в дозе 7.5 Гр на 28%, а в дозе 8.5 Гр на 13%.118Показатели выживаемости животных на фоне введения генистеина по альтернативнымсхемам применения препарата в целом мало отличались от контроля. Кроме того, показателиСПЖ также значимо не отличались от контроля во всех схемах введения препарата.4.4.4. Оценки токсичности нанопрепарата САНЧ с генистеиномТоксичность - это способность химических веществ при поступлении в организмвызывать его повреждение или гибель, не механическим путем. Чем в меньшем количествеони оказывают на биологические системы повреждающее действие, тем они токсичнее. Взависимости от контакта с химическим веществом выделяют острую, подострую ихроническую токсичность.

В этой следующей части, мы продолжили исследовать остройтоксичности, т.е. изучение вредного действия исследуемого нанопрепарата после егооднократного применения или повторного введения через короткие (не более 6 ч) интервалы втечение суток.Продолжительность наблюдения за животными составила 14 сут. В ходе наблюденияфиксировали общее состояние животных, особенности их поведения, регистрировали срокиразвития интоксикации и время наступления летального исхода. После гибели животныхпроводили макроскопическую оценку состояния внутренних органов.В конце наблюдения все животные, выжившие в эксперименте, были подвергнутыэвтаназии с помощью эфира медицинского и подвергнуты вскрытию. Было проведеномакроскопическое описание внутренних органов.В соответствии с задачами работы было выделено четыре этапа исследования:На первом этапе исследования оценивали острую токсичность нанопрепарата САНЧ сгенистеином при внутрибрюшинном пути введения в опытах на белых беспородныхмышах;На втором этапе оценивали острую токсичность нанопрепарата САНЧ с генистеиномпри подкожном пути введения в опытах на белых беспородных мышах;На третьем этапе изучали острую токсичность нанопрепарата САНЧ с генистеином припероральном пути введения в опытах на белых беспородных мышах;В ходе четвертого этапа исследования изучали острую токсичность нанопрепаратаСАНЧ с генистеином при повторном внутрибрюшинном введении препарата.1194.4.4.1.ОпределениеостройтоксичностинанопрепаратаСАНЧсгенистеином при внутрибрюшинном пути введенияПри оценке острой токсичности САНЧ с генистеином не разбавляли нанопрепарат.

Дляполучения необходимой дозы препарата, исходный раствор САНЧ с генистеином (сконцентрацией 10%) вводили в различных объемах, учитывая при этом вес каждогоживотного. Конечный объем введенных растворов САНЧ с генистеином не превышал 1 мл наособь,чтосоответствовалотребованиям«Руководствопоэкспериментальному(доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» [237].Результаты проведенного исследования по оценке острой токсичности генистеина,введенного внутрибрюшинно на различных растворителях приведены в таблице 8.Таблица 8. Показатели острой токсичности САНЧ с генистеином при внутрибрюшинном введении вэкспериментах на белых беспородных мышах самцах (максимальный объем раствора для введения 0,5 мл/10 гмассы животного).Число погибшихживотных, голКоличествоживотных вгруппе, голЛетальность, %Интактные животные010020001005000100100001003000010050000100Доза, мг/кгИз таблицы 8 видно, что при внутрибрюшинном введении САНЧ с генистеином гибелисреди животных, получавших препарат во всем диапазоне изученных доз, обнаружено небыло.Внутрижелудочное введение мышам нанопрепарата САНЧ с генистеином в малых иотносительно больших дозах животные перенесли без заметных изменений клиническойкартины интоксикации по сравнению с интактными животными.

Так, при осмотре мышей в120первые часы после инъекции препарата и в последующие сроки наблюдения шерсть мышейимела опрятный вид, была блестящей, без очагов облысения. Кожа обычной окраски безпризнаков раздражения. Окраска и состояние слизистых оболочек не отличалась от интактныхживотных. Не было также выявлено значимых различий по поведению у животных,получавших генистеин. Кроме того, было проведено исследование по изучению показателеймассы тела животных на фоне введения им САНЧ с генистеином в широком диапазоне доз.Результаты исследования представлены в таблице 9.Таблица 9. Влияние внутрибрюшинного введения САНЧ с генистеином на показатели массы тела белыхбеспородных мышей, г (X±mx).Время введения САНЧ с генистеином,сутГруппаФон714Интактные животные21.2г ± 0.221.7г ± 0.121.6г ± 0.3САНЧ с генистеином 200 мг/кг21.5г ± 0.220.3г ± 0.221.8г ± 0.3САНЧ с генистеином 500 мг/кг21.7г ± 0.121.8г ± 0.320.7г ± 0.3САНЧ с генистеином 1000 мг/кг21.1г ± 0.221.2г ± 0.3819.8г ± 0.4САНЧ с генистеином 3000 мг/кг21.5г ± 0.221.7г ± 0.319.2г ± 0.4САНЧ с генистеином 5000 мг/кг21.8г ± 0.321.3г ± 0.320.4г ± 0.4Показано, что значимых отличий показателей массы тела у животных послевнутрибрюшинного введения им препарата во всем диапазоне изученных доз по сравнению сконтролем обнаружено не было.Проведенное макроскопическое исследование выживших животных на 14 суткиисследования не выявило достоверных различий по сравнению с интактными животными.Оболочки головного мозга были тонкими, прозрачными.

Вещество мозга имело умереннуюплотность. Расширения желудочков не наблюдались.Слизистые оболочки ротовой полости, глотки и гортани – без изменений, очаговраздражения, воспаления или некроза не наблюдалось. При осмотре грудной и брюшнойполостей нарушений в расположении внутренних органов не отмечалось.

Тимус имелтреугольную форму, беловатый цвет и умеренно плотную консистенцию.121Величина и форма сердца изменений не представляли. Мышца сердца былакоричневатой, плотной. Поверхность лёгких имела бледно-розоватую окраску, лёгкие спалисьпри вскрытии грудной клетки. Ткань на разрезе также имела однородную бледно-розовуюокраску.