Диссертация (Химический состав и биологическая активность гидрофильных фракций из соцветий бархатцев распростертых)

1Пятигорский медико-фармацевтический институт – филиалфедерального государственного бюджетного образовательногоучреждения высшего образования«Волгоградский государственный медицинский университет»Министерства здравоохранения Российской ФедерацииНа правах рукописиЧервонная Надежда МихайловнаХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ И БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬГИДРОФИЛЬНЫХ ФРАКЦИЙ ИЗ СОЦВЕТИЙ БАРХАТЦЕВРАСПРОСТЕРТЫХ (TAGETES PATULA L.)14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозияДИССЕРТАЦИЯна соискание ученой степеникандидата фармацевтических наукНаучный руководитель:доктор фармацевтических наук,профессор Э.Т. ОганесянПЯТИГОРСК – 20172ОГЛАВЛЕНИЕВведение………………………………………………………............................5Глава 1 Химический состав и фармакологически активные компонентысоцветий бархатцев распростертых (Tagetes patula L.)(Обзор литературы)……………………………………………………………..111.1 Флавоноиды как антиоксиданты……………………………………….....141.2 Эндотелиопротекторы……………………………………………………..15Выводы по обзору литературы…………………………………………………19Глава 2 Изучение химического состава извлечения из соцветий бархатцевраспростертых (Tagetes patula L.), полученного экстракцией сырьяспиртом этиловым 40%………………………...……………………………….202.1 Обсуждение результатов2.1.1 Содержание антиоксидантов в различных извлечениях изсоцветий бархатцев распростертых………………………………212.1.2 Определение фенолокислот……………………………………….212.1.3 Флавоноиды………………………………………………………...222.1.4 ВЭЖХ фенольных соединений Э-40%Et…………………………232.1.5 Дубильные вещества……………………………………………….242.1.6 Органические кислоты…………………………………………….262.1.7 Производные тиофена……………………………………………..282.1.8 Аминокислоты……………………………………………………..292.1.9 Элементный состав………………………………………………...332.2 Экспериментальная часть2.2.1 Антиоксиданты…………………………………………………….342.2.2 Полифенольный состав…………………………………………….352.2.3 Определение фенольных соединений в Э-40%Et методомВЭЖХ……………………………………………………………….352.2.4 Определение дубильных веществ………………………………...3632.2.5 Определение производных тиофена……………………………...38Выводы по главе 2…………………………………………………………..…..40Глава 3 Выделение и идентификация индивидуальных соединений……….413.1 Выделение индивидуальных соединений………………………………..413.2 Идентификация исследуемых веществ…………………………………..47Выводы по главе 3…………………………………………………….………...59Глава 4 Получение стандартного образца патулетина из соцветийбархатцев распростертых (Tagetes patula L.)….………………………………604.1 Выделение патулетина из соцветий бархатцев распростертых………...604.2 Физические характеристики исследуемого вещества4.2.1 ИК-спектроскопия…………………………………………………614.2.2 ЯМР-1Н- и 13С-спектроскопия…………………………………….644.2.3 Масс-спектроскопия исследуемого вещества……………………694.3 Стандартизация патулетина………………………………………………744.4 Количественное определение суммы флавоноидов в Э-40%Et………...804.4.1 Валидация методики количественного определения суммыфлавоноидов………………………………………………………..81Выводы по главе 4……………………………………………………………....86Глава 5 Физико-химические характеристики пектиновых веществ,выделенных из шрота соцветий бархатцев распростертых………………….875.1 Выделение полисахаридных комплексов………………………………..875.2 Определение средней молярной массы ………………………………….895.3 Определение изоэлектической точки ………………………………...….925.4 Определение поверхностной активности.……………………………….945.5 Определение сорбционной емкости……………………………………...985.6 Определение коэффициента распределения ПВ методом in vitro……...

105Выводы по главе 5…………………………………………………..……….…. 1104Глава 6 О фармакологической активности извлечения, полученногоэкстракцией спиртом этиловым 40% соцветий бархатцев распростертых(Tagetes patula L.)…………………………………………...…………..………1116.1 Изучение антиоксидантной активности Э-40%Et в отношениирадикалов на различных модельных смесях……………………………. 1126.2 Влияние Э-40%Et на заживление ран у крыс с экспериментальнымсахарным диабетом……………………………………………………….6.3 ИзучениевлиянияЭ-40%Etнавазодилатирующую115иантитромбическую функции эндотелия сосудов головного мозга…….

1186.4 Изучение влияния патулетина на вазодилатирующую функциюэндотелия сосудов головного мозга…………………………………….124Выводы по главе 6128Заключение………………………………………………………………..…….129Список литературы…...…………………………………………………….…... 131Приложения……………………………………………………………….......... 1475ВведениеАктуальность темы исследования. В настоящее время продолжаютоставаться актуальными исследования по созданию лекарственных средстврастительного происхождения, характеризующихся низкой токсичностью,достаточной фармакологической эффективностью и широтой терапевтическогодействия в сочетании с относительной безопасностью и возможностьюдлительного применения.

В связи с этим интерес представляют растения,содержащиеполифенольныесоединения,которыеопосредованночерезферментные системы регулируют окислительно-восстановительные процессы,определяющие состояние клеточной мембраны. С этой точки зрения бархатцыраспростертые (Tagetes patula L.) представляют собой сырьевой источник сбогатым и разнообразным составом полифенолов.

Настои и отвары бархатцевшироко используются в народной медицине в качестве антимикробных,гипотензивных, гепатопротекторных и мочегонных средств.Благодаря своей неприхотливости, бархатцы распростертые широкоинтродуцированы во многих эколого-географических районах России, аселекционерами созданымногочисленные сорта, отличающиеся высотой,размером соцветий, их окраской, сырьевой массой.Своевременным и важным является также разработка технологииполучения стандартного образца патулетина, так как этот флавоноид являетсядоминирующим для рода Tagetes (Asteraceae) и характерен для растенийнекоторых других семейств.Актуальность данной работы заключается в изучении химическогосостава и фармакологической активности извлечения, полученного из соцветийбархатцев сорта «Carmen» экстракцией спиртом этиловым 40%. Данноеисследование проводится впервые и дополнит общую картину химическогосостава и фармакологических свойств бархатцев распростертых.Степень разработанности темы исследования.

Соцветия бархатцевраспростертых (Tagetes patula L.) являются ценным источником биологическиактивных веществ (БАВ), преимущественно, флавоноидов, что подтверждается6исследованиями, посвященными изучению, как химического состава, так ифармакологическойиндивидуальныхактивностивеществ.различныхИнтересфракцийпредставляетивыделенныхтакжекомплексноеиспользование шрота соцветий как дополнительного источника биологическиактивных соединений.Следует отметить, что важной задачей остается разработка стандартногообразца патулетина. Ранее была попытка получения стандарта патулетина изцветков бархатцев, однако эти исследования дальнейшего развития неполучили, поскольку не были доведены до логического завершения исоответствующая документация не была представлена в Научный центрэкспертизы средств медицинского применения.Цель и задачи исследований.

Учитывая вышеперечисленное, мы сочлицелесообразнымпровестикомплексноеизучениесоцветийбархатцевраспростертых (Tagetes patula L.), а также разработать технологию получениястандарта патулетина, что собственно, является целью наших исследований.В связи с поставленной целью мы сочли целесообразным решитьследующие задачи:•осуществитьпредварительныйфармакологическийскринингфракций,полученных экстракцией соцветий бархатцев распростертых сорта «Carmen»спиртом этиловым различной концентрации;•изучить химический состав извлечения, проявившего наиболее выраженнуюфармакологическую активность;•осуществить идентификацию индивидуальных соединений в анализируемомизвлечении;•разработать технологию получения стандартного образца патулетина из сырья(соцветий бархатцев распростертых сорта «Carmen»);•провести количественное определение суммы флавоноидов в анализируемомизвлечении;•из шрота соцветий бархатцев выделить пектиновые вещества и изучить ихфизико-химические свойства;7•провести фармакологическое исследование патулетина и анализируемогоизвлечения.Длярешенияпоставленныхзадачпредполагаетсяиспользоватьсовременные химические и физико-химические методы исследования.Научная новизна исследования заключается в том, что впервыеосуществленоуглубленноеизучениехимическогосоставаизвлечения,полученного экстракцией спиртом этиловым 40%.

Обоснован выбор экстрагентадля данного объекта. Приоритетным направлением является изучение иустановлениехимическогосоставаанализируемогоизвлечениясцельюполучения субстанции, обладающей ранозаживляющей активностью.Установлен качественный и количественный состав основных групп БАВ ванализируемом извлечении: флавоноидов, фенолкарбоновых и органическихкислот,дубильныхвеществ,аминокислот,макро-имикроэлементов,производных тиофена.Методомвысокоэффективнойидентифицированыфенольныежидкостнойсоединения.хроматографииВпервыевыявлено(ВЭЖХ)наличиедубильных веществ танина, кислоты галловой, эпигаллокатехин галлата.Выявлены различия в количественном содержании дубильных веществ в оберткахи цветках соцветий бархатцев, а также обоснован выбор наиболее оптимальногоэкстрагента для их извлечения.Методомвещества,препаративнойкоторыенаколоночнойоснованииданныххроматографиивыделеныфизико-химического4анализаидентифицированы как патулетин, патулитрин, кверцетин, кислота кофейная.Предложен способ получения стандарта патулетина, структура которогодоказана такими физико-химическими методами, как ЯМР-1H-, 13C-, масс-, ИК-,УФ-спектроскопия, а в соответствии с требованиями ГФ ХIII проведеныисследования, предъявляемые к стандартным образцам.Из шрота, остающегося после экстракции сырья спиртом этиловым 40%,выделены пектиновые вещества и гравиметрически установлено их высокоесодержание.

Кислотным гидролизом установлен их моносахаридный состав.8Изучены такие физико-химические свойства пектиновых веществ, как средняямолярнаямасса,константаизоэлектрическаяточка,Хаггинса,поверхностнаякоэффициентактивность,распределения.Выявленакомплексообразующая способность по отношению к ионам свинца: степеньсвязывания ионов Pb2+ пектином из шрота соцветий бархатцев составляет 29,2%.Фармакологические исследования показали, что извлечение, полученноеспиртомэтиловым40%,эндотелиопротекторноепроявляетантиоксидантное,действие.