Изучение особенностей метаболомного профиля растений с противовирусной ипротивобактериальной активностью, полученных в культуре in vitro, методами хроматографии и капиллярного электрофореза

1.3.2.1 Пробоподготовка растительных объектов к анализу хроматографическими и электрофоретическими методами для определения

1.3.2.2 Хроматографические и электрофоретические подходы к определению


1.3.3.1 Пробоподготовка растительных объектов к анализу хроматографическими и электрофоретическими методами для определения



3.1 Получение характеристических профилей фенольных соединений экстрактов


3.2 Получение характеристических профилей полифенолов в экстрактах листьев

биотехнологического сырья Iris ensata L. методом ВЭТСХ...................................... 60

3.2.1 Выбор условий разделения полифенолов в метанольных экстрактах

листьев Iris ensata L. методом ВЭТСХ......................................................................... 60

3.2.2 Получение характеристических профилей биотехнологического сырья

методом ВЭТСХ................................................................................................................ 62

3.3 Получение характеристических профилей аминокислот в экстрактах листьев

I. sibirica L. методом обращенно-фазовой ВЭЖХ........................................................ 66

3.3.1 Разделение дансильных производных аминокислот методом ОФ ВЭЖХ 66

3.3.2 Поиск условий извлечения аминокислот из листьев биотехнологического

сырья I. sibirica L............................................................................................................... 68

3.3.3 Получение характеристических профилей аминокислот листьев

биотехнологического сырья I. sibirica L...................................................................... 69

3.4 Получение характеристических профилей органических кислот в экстрактах

листьев I. sibirica L. методом КЭ...................................................................................... 72

3.4.1 Выбор условий электрофоретического определения органических кислот.

Извлечение органических кислот из растительного сырья..................................... 72

3.4.2 Получение характеристических профилей органических кислот

растительного сырья I. sibirica L................................................................................... 76

ВЫВОДЫ................................................................................................................................... 80

БЛАГОДАРНОСТИ И СВЕДЕНИЯ О РАБОТЕ.............................................................. 81

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ............................................................ 82


















4

ПЕРЕЧЕНЬ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ

1-НУК, α-НУК – 1-нафтиуксусная кислота

6-БАП – 6-бензиламинопурин

ВЭЖХ – высокоэффективная жидкостная хроматография

ВЭЖХ-УФ – высокоэффективная жидкостная хроматография с

ультрафиолетовым детектированием

ВЭЖХ-МС – высокоэффективная жидкостная хроматография с масс-

спектрометрическим детектированием

ВЭЖХ-МС/МС – высокоэффективная жидкостная хроматография с

тандемным масс-спектрометрическим детектированием

ВЭЖХ-МС/МС-TOF – высокоэффективная жидкостная хроматография с

тандемным времяпролётным масс-спектрометрическим детектированием

ГЭР – глубокий эвтектический растворитель

УВЭЖХ – ультравысокоэффективная жидкостная хроматография

УВЭЖХ-МС/МС – ультравысокоэффективная жидкостная хроматография с

тандемным масс-спектрометрическим детектированием

ВЭТСХ – высокоэффективная тонкослойная хроматография

ГЖХ – газо-жидкостная хроматография

ГХ – газовая хроматография

ГХ-МС - газовая хроматография с масс-спектрометрическим детектированием

КЭ – капиллярный электрофорез

КЭ-УФ - капиллярный электрофорез с ультрафиолетовым детектированием

КЗЭ – капиллярный зонный электрофорез

ОФ ВЭЖХ – обращённо-фазовая высокоэффективная жидкостная

хроматография

ПАВ – поверхностно-активное вещество

ПФ – подвижная фаза

ПЭГ - полиэтиленгликоль

ТСХ – тонкослойная хроматография

5

УЗ – ультразвук

УФ – ультрафиолетовый

ЭОП – электроосмотический поток

ЯМР – ядерный магнитный резонанс

С18 – силикагель, модифицированный октадецильными радикалами DAD – diode-array detector, диодно-матричное детектирование

ESI-MS/MS – tandem mass-spectrometry with electrospray ionization, тандемная масс-спектрометрия с электроспрей-ионизацией

SEF – sensitivity enhancement factor, степень концентрирования



















































6

ВВЕДЕНИЕ

• последнее время отмечается значительный интерес к растительным объектам – ведётся поиск лекарственных растений, обладающих высокой биологической активностью, а также новых природных молекул, способных помочь человеку в борьбе с различными заболеваниями. Растения рода Iris L. давно и успешно зарекомендовали себя в данном аспекте, они широко используются в традиционной медицине для борьбы с бактериальными и вирусными инфекциями.

Экстракты на их основе обладают пестицидными, антибактериальными,

противовирусными, антиоксидантными, противовоспалительными, противоопухолевыми благодаря накоплению в этих растениях рода Iris L. широкого спектра биологически активных веществ (флавоноиды, аминокислоты, органические кислоты и др.).

Однако, некоторые неизученные виды Iris L., например, Iris sibirica L. и Iris ensata L., относятся к исчезающим и занесены в Красные книги регионов РФ. Использование краснокнижных растений для получения лекарственных препаратов не представляется возможным. Решением проблемы являются биотехнологические подходы, такие как микроразмножение и аэропонные технологии, позволяющие получать лекарственное растительное сырьё высокого качества в необходимых количествах в короткие сроки и в любое время года. Важной особенностью биотехнологических подходов является возможность направленного биосинтеза биологически активных веществ и получения культур с высоким содержанием вторичных метаболитов. К одним из значимых регуляторов их накопления в клеточных культурах растений относятся такие компоненты питательных сред, как гормоны и гормоноподобные соединения.

Для оптимизации условий выращивания требуютс