Диссертация (1154858), страница 11
Текст из файла (страница 11)
ед.Примечания:1 в каждом случае приведены медиана, верхний и нижний квартили (25%; 75)2 p1 – по сравнению с контролем3 p2, p3– по сравнению с 7-ми и 14-ми сутками в данной группе.Таким образом, через 7 суток после имплантации скаффолда, необладающего биосовместимостью, возникают изменения нейрогенного и, вбольшей степени миогенного контроля, которые обусловливают повышениеперфузии.На 14-е сутки после имплантации скаффолдов, содержащих чужеродныйбелок, перфузионный показатель в среднем в два раза превышает свой исходныйуровень (рис. 7 В), абсолютные амплитуды миогенных колебаний кровотокастатически значимо выше на 61 и 49% соответственно (табл.
6, 7). Однако приэтом обнаружена высокая вариабельность нормированных амплитуд нейрогенных63колебаний, которая в значительной степени перекрывает квартиль-диапазонысоответствующих показателей контрольной группы и данных, полученных на7-е сутки после имплантации (табл.7).Таким образом, данные динамики перфузионного показателя кожи надобластьюимплантациискаффолда,необладающегобиосовместимостью,свидетельствует о продолжающейся местной воспалительной реакции у даннойгруппы животных на 14-е сутки эксперимента. Через 14 суток после имплантациискаффолда, не обладающего биосовместимостью, изменения активной модуляциикровотока проявляются снижением миогенного тонуса сосудов. Изменениянейрогенного контроля при этом вариабельны и не достигают статистическойзначимости.В ходе проведенных исследований установлено, что на 21-е сутки с моментаимплантации скаффолда с чужеродным белком не обнаружено тенденции кснижению перфузионного показателя относительно 14-х суток (рис.
7 Г).Абсолютные и нормированные амплитуды нейрогенных и миогенных колебанийна 21-е сутки с момента имплантации скаффолда с чужеродным белком такжестатистически значимо превышают исходный уровень (табл. 6, 7).Таким образом, обнаружено, что воспалительные изменения кровотока вкоже над областью имплантации скаффолда, содержащего чужеродный белок,проявляются статистически значимым увеличением перфузионного показателя в2 раза. В отличие от группы сравнения, где максимально выраженные реактивныеизменения сосудов микроциркуляторного русла были выявлены на 7-е суткиэксперимента, у животных группы отрицательного контроля выраженная истойкая гиперемия зарегистрирована с помощью ЛДФ в период с 7-х по 21-есутки.
В ходе проведенного исследования установлено, что имплантацияскаффолда,необладающегобиосовместимостью,вызываетизменениянейрогенного и миогенного механизмов модуляции микроциркуляции. При этомизменения нейрогенного тонуса сосудов вариабельны, а миогенного – стойкие ирегистрируются в период с 7-х по 21-е сутки, что позволяет считать изменениямиогенного тонуса преобладающим активным механизмом микроциркуляторных64сдвигов у животных группы отрицательного контроля. Стойкое увеличениеперфузиииснижениемиогенноготонусаявляютсяпрогностическинеблагоприятными и могут быть выделены в качестве критериев отсутствиябиосовместимости скаффолдов при субкутанных имплантационных тестах,которые могут быть выявлены не инвазивным мониторингом при помощи ЛДФ.4.2. Динамика заселения матрицы клетками соединительной тканиприподкожнойимплантациискаффолда,необладающегобиосовместимостью (Иванов А.Н.
и др., 2015; Иванов А.Н. и др., 2016;Козадаев М.Н. и др., 2017)В ходе морфологического исследования препаратов области имплантациибыловыявлено,чточерез7сутокпослеимплантациискаффолдасадсорбированным на нем чужеродным белком наблюдается выраженнаявоспалительная реакция. В мягких тканях на границе с имплантатом сосудымикроциркуляторного русла полнокровны. В области имплантации обнаруженымножественные кровоизлияния (рис. 8 А).
Соединительная ткань на границе соскаффолдомотечна,инфильтрированаклеткамилейкоцитарногоряда:нейтрофилами, макрофагами, лимфоцитами (рис. 8 Б). В структуре самогоскаффолда выявлены лейкоцитарная инфильтрация и отек (рис. 8 В), в отдельныхучастках – диапедез эритроцитов. В составе лейкоцитарной инфильтрациискаффолда преобладают нейтрофилы (табл. 8).Таким образом, через 7 суток после имплантации скаффолда с чужероднымбелком морфологическая картинаотражаетвыраженную воспалительнуюреакцию.У животных группы отрицательного контроля к 14-м суткам послеимплантации скаффолда, не обладающего биосовместимостью, в перифокальнойзоне отмечается пролиферация клеток фибробластического ряда и формированиеотграничивающего соединительнотканного барьера, который инфильтрированлейкоцитами: нейтрофилами, моноцитами, макрофагами, лимфоцитами (рис.
9 А).65Так же, как и на 7-е сутки, отмечается отек тканей в зоне имплантации скаффолдаи выраженное полнокровие сосудов микроциркуляторного русла (рис. 9 А).АБВРис. 8. Скаффолд на основе ПКЛ с адсорбированным чужеродным белкомна 7-е сутки эксперимента Г-Э: А – морфология зоны имплантации Об. 10 х; Б –граница скаффолда и окружаюших тканей. Об. 40 х;В – лейкоцитарная инфильтрация скаффолда Об 63 х.66Таблица 8Динамика клеточных популяций скаффолдов, не обладающихбиосовместимостью (число клеток на одно поле при увеличении х 400)КлеткиФибробластыВремя после имплантации7-е сутки14-е сутки21-е сутки5 (3; 6)8 (6; 9)17 (14; 23)p1 = 0,002827p1 = 0,000183p2 = 0,000212Фиброциты0 (0; 0)1 (0; 2)6 (4; 9)p1 = 0,104111p1 = 0,000212p2 = 0,000583Нейтрофилы56 (46; 65)58 (44; 67)44 (42; 56)p1 = 0,909722p1 = 0,185878p2 = 0,140466Моноциты и11 (9; 13)макрофаги37 (32; 39)35 (28; 41)p1 = 0,000183p1 = 0,000183p2 = 0,791337Лимфоциты25 (22; 35)30 (23; 35)9 (7; 12)p1 = 0,570751p1 = 0,000183p2 = 0,000183Примечания:1 в каждом случае приведены медиана, верхний и нижний квартили (25%; 75)2 p1 – по сравнению с 7-ми сутками3 p2 – по сравнению с 14-ми сутками.Стенки сосудов микроциркуляторного русла утолщены, эндотелий частичнодесквамирован.
В мягких тканях, окружающих скаффолд, и в нем самомопределяются сидерофаги, а также свободнолежащие глыбки гемосидерина.67В структуре скаффолда выявляются единичные клетки соединительной ткани нафоне выраженной лейкоцитарной инфильтрации (рис. 9 Б).АБВРис. 9 Скаффолд на основе ПКЛ с чужеродным белком и его перифокальнаязона на 14-е сутки эксперимента Г-Э: А – граница скаффолда и окружающих еготканей.
Об. 20 х; Б – лейкоцитарная инфильтрация скаффолда Об. 20 х; В – гигантские клеткиинородных тел Об. 63 х68Всоставелейкоцитарнойинфильтрациипреобладаютнейтрофилы,обнаруживаются моноциты, макрофаги и лимфоциты (табл. 8). При этомколичествонейтрофильныхлейкоцитовилимфоцитовнепретерпеваетстатистически значимой динамики, а количество макрофагов – статистическизначимо увеличивается по сравнению с 7-ми сутками эксперимента (табл. 8),отмечается формирование гигантских клеток инородных тел (рис.
9 В).Таким образом, данные морфологического исследования препаратов мягкихтканей зоны имплантации скаффолда, не обладающего биосовместимостью,свидетельствуют о продолжающейся местной воспалительной реакции у даннойгруппы животных на 14-е сутки эксперимента.Через 21-е сутки вокруг имплантированного скаффолда наблюдаетсясформированный барьер грануляционной ткани (рис.
10 А), инфильтрированныйклетками лейкоцитарного ряда, среди которых присутствуют макрофаги,моноциты, лимфоциты и плазматические клетки (рис. 10 Б). В перифокальнойобластиотмечаетсямикроциркуляторногонеравномерноерусла,аместамикровенаполнениеотмечаютсясосудовмелкоочаговыекровоизлияния и диапедез эритроцитов. На 21-е сутки эксперимента скаффолдинфильтрирован клетками лейкоцитарного ряда, определяются преимущественнонейтрофилы (рис 10 В), единичные макрофаги и гигантские многоядерные клетки,плазматические клетки, лимфоциты (табл. 8). При этом по сравнению с 14-мисуткамиэкспериментадинамикасоставалейкоцитарнойинфильтрациипроявляется только уменьшением числа лимфоцитов в поле зрения.
В составескаффолда, кроме лейкоцитов, выявляется небольшое количество фибробластов ифиброцитов, количество которых увеличивается по сравнению как с 7-ми, так и с14-ми сутками эксперимента (табл. 8). Васкуляризация скаффолда выраженаслабо – в отдельных зонах наблюдаются единичные сосуды микроциркуляторногорусла.69АБВРис. 10. Скаффолд на основе ПКЛ с чужеродным белком и его перифокальнаязона на 21-е сутки эксперимента Г-Э: А – граница скаффолда и окружающих еготканей.
Об. 20 х; Б – перифокальная зона Об. 63 х; В – инфильтрация скаффолда Об. 63х70Полученныеморфологическиеданныеподтверждаютотсутствиебиосовместимости скаффолда на основе ПКЛ с адсорбированным чужероднымбелком. Изменения морфологической картины препаратов мягких тканей областиимплантации скаффолда, не обладающего биосовместимостью, свидетельствует оразвитии активной воспалительной реакции в период с 7-х по 21-е сутки,сопровождающейся выраженной лейкоцитарной инфильтрацией.
Принимая вовнимание данные предыдущего раздела, изменения перфузии, миогенного инейрогенного контроля, вероятно, обусловлены действием провоспалительныхцитокинов, выделяемых лейкоцитами. К 14-м суткам воспалительная реакция взоне имплантации скаффолда, содержащего чужеродный белок, переходит впролиферативную фазу, что приводит к началу формирования отграничивающегобарьера. На фоне выраженной лейкоцитарной инфильтрации скаффолда заселениеего клетками соединительной ткани происходит крайне слабо.
Васкуляризацияскаффолда также не выражена. Клеточный состав скаффолда у животных даннойгруппы на всех сроках наблюдения представлен преимущественно лейкоцитами.Такимобразом,воспалительнаявреакциягруппеотрицательногопротекаетсконтроляпреобладаниеминтенсивнаяальтеративныхиэкссудативных процессов, которые проявляются выраженной лейкоцитарнойинфильтрацией, а также слабыми васкуляризацией и колонизацией скаффолдаклеточнымиэлементами.ПоказателиЛДФсоответствуюткартинеморфологических изменений, возникающих при имплантации скаффолдов содсарбированным чужеродным белком, что подтверждает целесообразностьинтерпретации стойкого повышения перфузии, реализуемого за счет снижениямиогенногоскаффолдов.тонусавкачествекритериевотсутствиябиосовместимости714.3. Изменение маркеров острой фазы воспалительной реакции приимплантации скаффолда, не обладающего биосовместимостью (Иванов А.Н.и др., 2016; Козадаев М.Н.
и др., 2017)Данные, представленные в предыдущих разделах, свидетельствуют о том,что при субкутанной имплантации скаффолдов процессы их заселения клеткамисоединительной ткани взаимосвязаны с изменениями миогенного тонуса сосудовмикроциркуляцииисоответствующейдинамикойперфузии,атакжеинфильтрацией тканей данной области лейкоцитами. Поскольку лейкоцитарнаяинфильтрациясопровождаетсявыделениемразличныхпровоспалительныхцитокинов, которые оказывают влияние на миогенный тонус сосудов, то дляоценки роли воспаления в механизмах изменения перфузии кожи присубкутанной имплантации скаффолдов у животных было проведено исследованиеконцентрации острофазовых белков в сыворотке крови на 7, 14, 21-е суткиэксперимента.При имплантации скаффолдов, не обладающих биосовместимостью,обнаружено выраженное увеличение СРБ и ЦП на 7-е сутки эксперимента.В период с 14-х по 21-е сутки происходит снижение концентрации ЦП и СРБ,однако данные показатели не достигают уровня контрольных значений (табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
