Автореферат (1154857), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Верифицировать микроциркуляторные критерии биосовместимостипутемвыявленияихвзаимосвязисинтенсивностьюзаселениясоединительнотканными элементами и выраженностью альтеративных иэкссудативных процессов в зоне субкутанной имплантации скаффолдов наоснове ПКЛ и ГА в сравнении с матрицами, содержащими чужеродный белок.3. Исследовать изменения концентраций церуллоплазмина и Среактивного белка в сыворотке крови и оценить их соответствие локальныммикроциркуляторным реакциям при подкожной имплантации матриц садсорбированным чужеродным белком и скаффолдов на основе ПКЛ и ГА убелых крыс.4. Оценить влияние биосовместимости матриц на динамику концентрацииэндотелиального фактора роста в сыворотке крови как основного стимулятораангиогенеза во взаимосвязи с интенсивностью васкуляризации скаффолдов приподкожной имплантации у белых крыс.Научная новизна. Впервые выявлены критерии биосовместимостиматриц, основанные на патогенетических взаимосвязях изменений показателяперфузии и активных механизмов модуляции кровотока микроциркуляторногорусла кожи над областью субкутанной имплантации скаффолдов с локальнымитканевыми реакциями и системными проявлениями воспалительного ответа.Отсутствие биосовместимости матриц проявляется стойким повышениемперфузии, реализуемым преимущественно за счет снижения миогенного тонусамикрососудов кожи над областью имплантации, что сопровождаетсявыраженной локальной лейкоцитарной инфильтрацией и отеками, а такжеформированиемотграничивающегосоединительнотканногобарьера,препятствующим колонизации скаффолда клетками фибробластического ряда.При этом стойкое повышение перфузии и снижение миогенного тонуса сосудовкожи, также ассоциировано с системными проявлениями воспалительногоответа, которые характеризуются значительным и пролонгированнымувеличением концентрации в крови церрулоплазмина и С-реактивного белка.Это патогенетически обосновывает выявление указанных изменениймикроциркуляции кожи над областью субкутанной имплантации в качествекритерия отсутствия биосовместимости скаффолдов.Установлено, что имплантация скаффолдов на основе ПКЛ и ГАсопровождается умеренным транзиторным повышением перфузии без6выраженных изменений активных механизмов модуляции локальноймикроциркуляции кожи.Сочетание этих признаковсактивнойваскуляризацией, а также колонизацией матриц на основе ПКЛ и ГА клеткамисоединительной ткани без интенсивных локальных признаков воспаления исистемных проявлений воспалительного ответа, обосновывают использованиеданныхмикроциркуляторныхизмененийвкачествекритериевбиосовместимости скаффолдов.Научную новизну подтверждает выдача Федеральной службой поинтеллектуальной собственности РФ патента на изобретение «Способ оценкибиосовместимости скаффолдов» № 2571232 от 19.11.15 г.Теоретическая и практическая значимость.
Результаты исследованиярасширяют представления о реакциях организма при имплантации скаффолдовна основе ПКЛ и ГА за счѐт получения новых данных о патогенетическихвзаимосвязях биосовместимости матриц и процессов их колонизацииклеточными элементами, васкуляризации с состоянием механизмов регуляцииангиогенеза.При выполнении работы впервые проведена доклиническая апробацияотечественных скаффолдов на основе ПКЛ и ГА в условиях in vivo.Выявленные микроциркуляторные критерии биосовместимости в комплексе соспособностью к заселению клеточными элементами и васкуляризации на фонеотсутствия выраженных проявлений системного воспалительного ответа присубкутанной имплантации доказывают возможность применения оригинальныхотечественных скаффолдов на основе ПКЛ и ГА для стимуляции процессарегенерации и позволяют рекомендовать клиническую апробацию данныхматриц.Выявленные микроциркуляторные критерии могут быть оценены вдинамике при субкутанных имплантационных тестах с помощью неинвазивнойметодики – лазерной доплеровской флоуметрии.
Данный подход реализован ввиде программного обеспечения («Программа для динамической оценкибиосовместимости скаффолдов», свидетельство о регистрации № 2015612745,приор. от 26.12.14 г., зарегистрирована в реестре 25.02.15 г.). Разработанныепрограмма и способ оценки биосовместимости скаффолдов методом ЛДФмогут быть применены в экспериментальных исследованиях при созданииновых конструкций для тканевой инженерии.7Методология и методы диссертационного исследования.
Исследованиебиосовместимости оригинальных скаффолдов на основе ПКЛ и ГА былопроведено на модели субкутанных имплантационных тестов у белых крыс.Дизайн исследования заключался в сопоставлении исследуемых параметров уживотныхопытнойгруппы,срезультатамигруппсравнения(ложнооперированные животные) и отрицательного контроля (крысы, которымимплантировали скаффолд содержащий чужеродный белок).
При выполненииработы использованы функциональное исследование микроциркуляцииметодом лазерной допплеровской флоуметрии, в комплексе с морфологическойверификацией путем микроскопии и морфометрии гистологических препаратовзоны имплантации или ее имитации, а также биохимических исследований,реализованныхметодамииммунотурбидиметрии.иммуноферментногоанализаиПоложения, выносимые на защиту:1. Изменениеперфузиииактивныхмеханизмовмодуляциимикроциркуляции кожи над областью размещения матриц, регистрируемыенеинвазивным методом лазерной допплеровской флоуметрии взаимосвязаны слокальными и системными проявлениями воспалительной реакции, процессамизаселения клетками соединительной ткани и васкуляризацией скаффолдов.
Этоявляется основанием для использования микроциркуляторных изменений вкачестве критериев динамической оценки биосовместимости при субкутанныхимплантационных тестах.2. Васкуляризация скаффолдов и состояние механизмов регуляцииангиогенеза зависят от степени их биосовместимости. Отсутствиебиосовместимости скаффолдов за счет интенсивной воспалительной реакциивызывает длительную активацию ангиогенеза, но не сопровождается ихваскуляризацией.
Имплантация скаффолдов на основе ПКЛ и ГА вызываетслабо выраженные воспалительные изменения, которые стимулируютангиогенез и, в итоге, обеспечивают их полноценную васкуляризацию.3. Комплексмикроциркуляторныхкритериевбиосовместимости,способность к заселению клетками и васкуляризации на фоне отсутствиявыраженных локальных и системных проявлений воспаления обосновываютвозможность применения оригинального скаффолда на основе ПКЛ и ГА втканевой инженерии для стимуляции регенерации поврежденных тканей.8Степень достоверности результатов исследования.
Достоверностьрезультатов исследования определяется достаточным объемом выборкиэкспериментальных животных (90 белых нелинейных крысы), применениемсовременных информативных методик, выполненных с использованиемсертифицированного оборудования и реактивов и включающих комплексфункциональных и биохимических методов в сочетании с морфологическойверификацией процесса заселения клеточными элементами оригинальныхотечественных скаффолдов. В работе использованы непараметрические методыстатистической обработки в соответствии с характеристиками вариационныхрядов изучаемых показателей.Апробация результатов исследования.
Основные положения работыдоложены и обсуждены на: научно-практической конференции молодыхучѐных, посвящѐнной 75-летию профессора В.Г. Нинеля «Вклад молодыхучѐных в развитие травматологии, ортопедии и нейрохирургии» г. Саратов,2014 г.; на X Международной конференции «Микроциркуляция игемореология. Клиника и эксперимент: из лаборатории к постели больного» г.Ярославль, 2015 г.; на заседании регионального общества травматологовортопедов г. Саратов, 2015 г.; на Всероссийской научно-практическойконференции, посвященной 70-летию СарНИИТО «Травматология и ортопедияв России: традиции и инновации» г. Саратов, 2015 г.; на VIII Всероссийскойнаучно-практической конференции молодых ученых с международнымучастием «Цивьяновские чтения» г.
Новосибирск, 2015 г.; на Всероссийскойнаучно-практической конференции «Классика и инновации в травматологии иортопедии» г. Саратов, 2016 г.; на заседании Ученого совета ФГБУ«СарНИИТО» Минздрава России, 2016.Публикации результатов исследования. По теме диссертацииопубликовано 12 научных работ, из них 5 в журналах, включенных в переченьпериодических научных и научно-практических изданий, рекомендованныхВАК Минобрнауки РФ для публикации результатов диссертационногоисследования на соискание ученой степени кандидата медицинских наук;получен 1 патента РФ на изобретение, а также свидетельство государственнойрегистрации программы для ЭВМ.Внедрение результатов исследования. Полученные результатыиспользуются в процессе преподавания на кафедре патологической физиологии9имени А.А. Богомольца и кафедре гистологии, цитологии и эмбриологииФГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им.
В.И. Разумовского Минздрава России,курса патологической физиологии на кафедре медико-биологическихдисциплин Филиала частного учреждения образовательной организациивысшего образования «Медицинский университет «Реавиз» в городе Саратове,научно-исследовательском процессе в ФГБУ «СарНИИТО» Минздрава России.Личный вклад автора. Автором лично проведен анализ современнойотечественной и зарубежной литературы, на основании которого определеннонаучное направление работы, сформулированы цель и задачи исследования,разработан план и методология исследования.
Автором проведеныэксперименты на животных, функциональное исследование микроциркуляции,забор материала для биохимических и гистоморфологических исследований,выполнение морфометрического анализа гистологических препаратов,обработка результатов исследования, их описание и подготовка публикаций поматериалам работы.Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 127страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы,главы материалов и методов, 3 глав результатов собственных исследований,заключения и выводов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
