Автореферат (1154857), страница 4
Текст из файла (страница 4)
На фоне выраженной лейкоцитарной инфильтрации скаффолдазаселение его клетками соединительной ткани происходит крайне слабо.Рис. 3. Динамика клеточных популяций скаффолдов, не обладающихбиосовместимостьюВаскуляризация скаффолда также не выражена.
Следовательно, приподкожной имплантации белым крысам матриц, содержащих чужеродныйбелок, стойкое повышение перфузии и снижение миогенного тонусамикрососудов кожи соответствуют интенсивной локальной воспалительнойреакции с преобладанием альтерации и экссудации, которые проявляютсявыраженной лейкоцитарной инфильтрацией и отеками, а пролиферативныепроцессыхарактеризуютсяформированиемотграничивающегосоединительнотканного барьера, препятствующим колонизации скаффолдаклеткамисоединительнойткани,чтоподтверждаетотсутствиебиосовместимости.При имплантации скаффолдов, не обладающих биосовместимостью,обнаружено выраженное увеличение СРБ и ЦП на 7-е сутки эксперимента.
Впериод с 14-х по 21-е сутки происходит снижение концентрации ЦП и СРБ,однако данные показатели не достигают контрольных значений (табл. 1).Следовательно,отсутствиебиосовместимостискаффолдахарактеризуется выраженным системным воспалительным ответом сувеличением концентрации в крови белков острой фазы на протяжении всего15эксперимента, что совпадает с динамикой миогенного тонуса сосудовмикроциркуляторного русла кожи в области имплантации, интенсивностьюлокальной лейкоцитарной инфильтрации и сопровождается крайне медленнопротекающим заселением матрицы клеточными элементами.Таблица 1Уровень белков острой фазы воспаления в крови у животныхгруппы отрицательного контроляГруппаУровень белков острой фазы кровиЦП, усл. ед.СРБ, мг/лКонтроль (n=10)16,5 (15,8; 18,1)37,1 (37,0; 38,2)После7 сутки25.9 (24,8; 28,0)64,3 (62,8; 65,3)оперативного(n=10)р1 = 0,001745.p1 = 0,002628вмешательства26,4 (23,2; 28,0)46,7 (46,1; 47,3)14 суткир1 = 0,001745p1 = 0,001685(n=10)p2 = 0,948948p2 = 0,00266423,1 (22,1; 25,8)44,0 (42,7; 45,0)21 суткиp1 = 0,001745p1 = 0,001685(n=10)p2 = 0,034607p2 = 0,002664p3 = 0,047158p3 = 0,001705Примечания: в каждом случае приведены медиана, верхний и нижний квартили;p1, p2, p3– по сравнению с контролем 7 и 14 сутками после операции соответственно.При имплантации скаффолдов, не обладающих биосовместимостью, уживотных выявлено увеличение концентрации VEGF в сыворотке крови во всесроки наблюдения.
При этом концентрация VEGF достигает своего пика толькок 21-м суткам после имплантации, превышая контрольные значения в 4 раза.Следовательно, интенсивная воспалительная реакция при имплантациискаффолда, не обладающего биосовместимостью, сопровождается выраженнойстимуляцией ангиогенеза, но не приводит к их васкуляризации.Таким образом, при субкутанных имплантационных тестах установлено,что микроциркуляторные критерии отсутствия биосовместимости скаффолдов– стойкое повышение перфузии кожи над зоной имплантации и снижениемиогенного тонуса микрососудов, соответствуют интенсивным локальным исистемным проявлениям воспаления, а также продолжительной стимуляцииангиогенеза, но торможению васкуляризации матрицы и заселения ееклеточными элементами.16Местные и системные реакции организма при подкожнойимплантации скаффолдов на основе поликапролактона и гидроксиапатитаПолученные данные свидетельствуют, что при имплантации животнымскаффолда на основе ПКЛ и ГА наиболее выраженные изменения перфузиикожи над областью размещения матриц так же, как и в группе сравнения,отмечаются на 7-е сутки эксперимента.
Изменения перфузионного показателяне превышают таковые у ложнооперированных животных и полностьюнивелируются к 21-м суткам (рис. 1). При имплантации оригинальныхскаффолдов на основе ПКЛ и ГА изменения активных механизмов(нейрогенного и миогенного тонуса) модуляции микроциркуляции носяттранзиторный характер, полностью исчезая к 14-м суткам эксперимента (рис.2). Следовательно, умеренное транзиторное повышение перфузии кожи надобластью размещения скаффолда на основе ПКЛ и ГА без выраженныхизменений активных механизмов модуляции локальной микроциркуляциихарактеризует биосовместимость матриц данного типа.При морфологическом исследовании наибольшие реактивные изменениятканей, окружающих скаффолд, выявлены на 7-е сутки и проявляютсяумеренным полнокровием сосудов и отеком, а также инфильтрациейперифокальной зоны единичными нейтрофилами и лимфоцитами.
Реактивныеизменения мягких тканей зоны имплантации скаффолда на основе ПКЛ и ГАполностью купируются к 21-м суткам эксперимента.Заселение скаффолда на основе ПКЛ и ГА клетками соединительнойткани протекает активно на 7-е, 14-е и 21-е сутки эксперимента. Обнаруженаинтенсивная васкуляризация скаффолда с 14-х суток после имплантации.Инфильтрация скаффолда лейкоцитами при этом выражена слабо (рис 4).Следовательно, транзиторные изменения перфузии кожи при субкутанныхимплантационных тестах у белых крыс сочетаются с активным заселениемскаффолдов на основе ПКЛ и ГА соединительнотканными элементами, еговаскуляризацией на фоне слабовыраженных реактивных измененийокружающих тканей, что доказывает биологическую совместимость данноготипа матриц.Имплантация скаффолдов на основе ПКЛ и ГА вызывает у животныхувеличение в сыворотке крови концентрации СРБ и ЦП на 7-е суткиэксперимента (табл.
2).17Рис. 4. Динамика клеточныхполикапролактона и гидроксиапатитапопуляций скаффолдов наосновеТаблица 2Уровень белков острой фазы воспаления в крови у животных приимплантации скаффолда на основе поликапролактона и гидроксиапатитаГруппаУровень белков острой фазы кровиЦП, усл.ед.СРБ, мг/лКонтроль (n=10)16,5 (15,8; 18,1)37,1 (37,0; 38,2)После7 сутки21,3 (20,1; 22,1)43,0 (41,1; 44,1)оперативного(n=10)р1 = 0,001745p1 = 0,005790вмешательства19,1 (17,3; 20,8)38,2 (36,5; 42,7)14 суткир1 = 0,063920p1 = 0,564012(n=10)p2 = 0,025348p2 = 0,02590117,5 (16,6; 19,2)37,8 (37,6; 38,4)21 суткиp1 = 0,200842p1 = 0,109441(n=10)p2 = 0,001745p2 = 0,001705p3 = 0,306154p3 = 0,001725Примечания: в каждом случае приведены медиана, верхний и нижний квартили(25%;75); p1, p2, p3– по сравнению с контролем, 7-ми и 14-ми сутками соответственно.Однако концентрация СРБ и ЦП у животных данной группы на 7-е суткиэксперимента не имеет различий с показателями группы сравнения истатистически значимо ниже уровня группы отрицательного контроля.
Впериод с 7-х по 21-е сутки концентрация СРБ и ЦП в сыворотке крови уживотных опытной группы снижается, и в отличие от группы отрицательногоконтроля, достигает контрольных значений на 14-е сутки эксперимента (табл.2). Следовательно, транзиторные микроциркуляторные изменения приимплантации скаффолдов на основе ПКЛ и ГА соответствуюткратковременным сдвигам концентрации белков острой фазы в первую неделю18эксперимента, степень выраженности которых не превышает таковые уложнооперированных животных, что свидетельствует в пользу ихтравматического генеза.В ходе исследования установлено, что при имплантации скаффолда наоснове ПКЛ и ГА пиковое увеличение уровня VEGF в сыворотке кровипроисходит на 14-е сутки эксперимента.
К 21-м суткам его концентрациядостигает контрольных значений (рис. 5). При этом морфологическиобнаружено, что к 21-м суткам после имплантации скаффолд васкуляризован изаселен клетками соединительной ткани. Следовательно, в этом случаетранзиторные воспалительные изменения стимулируют васкуляризацию, а к21-м суткам эксперимента происходит завершение процессов ангиогенеза истабилизация сосудистого русла.Рис. 5. Концентрация эндотелиального фактора роста в сыворотке кровиживотных опытной группы и отрицательного контроляПримечание - - различия статистически значимы по сравнению с контролем (р < 0,05)Таким образом, разработанные комбинированные скаффолды на основеПКЛ и ГА способны к интеграции в соединительную ткань в условиях in vivo.Активное заселение исследуемых скаффолдов соединительнотканнымиэлементами и васкуляризация на фоне незначительных реактивных измененийпри подкожной имплантации доказывают их биосовместимость.
Транзиторноеповышение перфузии без выраженных сдвигов активных механизмовмодуляции локальной микроциркуляции кожи над областью имплантациивзаимосвязаны с кратковременными слабовыраженными локальными исистемными проявлениями воспалительной реакции, которые оказываютстимулирующее влияние на ангиогенез, васкуляризацию и заселениескаффолдов на основе ПКЛ и ГА клетками, что позволяет характеризовать19указанные микроциркуляторные изменения как критерии биосовместимостипри субкутанных имплантационных тестах.Результаты,ЗАКЛЮЧЕНИЕполученные в ходе настоящегодиссертационногоисследования, позволяют подвести следующие итоги:1.
Критериямиотсутствиябиосовместимостискаффолдовприсубкутанных имплантационных тестах являются стойкое повышение перфузиикожи над зоной их размещения, реализуемое преимущественно за счетснижения миогенного тонуса микрососудов. Имплантация скаффолда на основеПКЛ и ГА сопровождается умеренным транзиторным повышением перфузиикожи над областью его размещения без выраженных изменений активныхмеханизмовмодуляциимикроциркуляции,чтохарактеризуетбиосовместимость матриц данного типа.2. Микроциркуляторныекритерииотсутствиябиосовместимостисоответствуют интенсивной лейкоцитарной инфильтрации, отекам иформированиюсоединительнотканногобарьера,препятствующегоколонизации скаффолда клетками соединительной ткани.
Транзиторныеизменения перфузии кожи при субкутанных имплантационных тестах у белыхкрыс ассоциированы с активным заселением клетками фибробластическогоряда скаффолдов на основе ПКЛ и ГА на фоне слабо выраженныхвоспалительных изменений, что доказывает биологическую совместимостьданного типа матриц.3. Локальные микроциркуляторные реакции при подкожной имплантацииматриц, не обладающих биосовместимостью, сопровождаются увеличениемконцентрации ЦП и СРБ в сыворотке крови на протяжении всего эксперимента.Транзиторные микроциркуляторные изменения при имплантации скаффолдовна основе ПКЛ и ГА соответствуют кратковременным сдвигам травматическогогенеза концентрации белков острой фазы в первую неделю эксперимента.4.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
