Диссертация (1154482), страница 17
Текст из файла (страница 17)
Характеристика животных дана в таблице 19.Таблица 19Динамика веса животных при внутрибрюшинном введении 15 мг/кг АОМ*-р<0,05Вес, г0 день(n=25)день эвтаназии (n=20)Ме(25;75)%Ме(25;75)%ГруппаКонтроль259,5*255,5;261,0268,5*258;270,0АОМ 15 мг/кг веса 2 раза253,0**249,1;260,0264,5**250,0;274,1*p=0,0006 при сравнении начального и конечного веса; регрессионный анализ ANOVA**p=0,0001 при сравнении начального веса и конечного; регрессионный анализ ANOVA.При наблюдении за животными на 40-ой день после введения АОМбыло установлено снижение аппетита (до 25 гр в сутки) с увеличениемпотребности в воде – до 38 мл в сутки.
В дальнейшем эти изменениястабильно сохранялись до окончания эксперимента. При анализе данных обизменении веса животных было установлено, что различия в начале и концеэкспериментанебылистатистическизначимыми(р = 0,88и0,91соответственно, при регрессионном анализе ANOVA). Таким образом, былсделан вывод, что изменение веса в процессе жизни животного имелозакономерный характер и не зависело от введенного препарата.110Так как АОМ вызывает мутации, то необходимо было установитьстепень изменения слизистой оболочки толстой кишки. При макроскопиитолстой кишки видимых изменений мы не отмечали.
Для морфологическогоанализа были отобраны образцы тканей толстой кишки на расстоянии 2 см отвыхода из слепой кишки. Морфологическая картина соответствоваланачальному этапу опухолевого роста (рисунок 20).ВА1Б1В1ГРисунок 20 Картина типичных изменений слизистой оболочки толстой кишкикрыс после применения АОМ 15 мг/кг, двукратно, с промежутком 14 днеймежду введениями. Введение внутрибрюшиннное. А, В, Г - окраскагематоксилин – эозин; Б – окраска по Массону на соединительную ткань. А –типичный микроскопический вид слизистой оболочки; В - зона подробноймикроскопии 1-зона роста тубулярно-ворсинчатых аденом; Г – полипслизистой оболочки толстой кишки, 1-зоны роста тубулярно-ворсинчатыхаденом.При исследовании было установлено, что микроскопически стенкатолстой кишки была представлена хорошо сформированными слизистой,111подслизистой, мышечной и серозной оболочками.
Эпителий слизистойобразует глубокие и узкие углубления в собственную пластинку - крипты.Стенка крипт образована одним слоем светлых бокаловидных клеток, наповерхности слизистой оболочки между криптами видны немногочисленныекаемчатые клетки, имеющие призматическую или низкопризматическуюформу. Нередко слизистая оболочка образована плоскими клетками безкаѐмки.
Собственная пластинка СО и подслизистый слой образованы хорошовыраженной рыхлой волокнистой соединительной тканью, в которойрасполагаютсякровеносныесосудывсостоянииумеренногокровенаполнения. Собственная пластинка и подслизистый слой густоинфильтрированынаблюдаетсяполиморфноядернымибольшоеколичестволейкоцитами,эозинофилов.средикоторыхПрианализеморфологических изменений слизистой оболочки были выявлены зоныизмененного характера роста: наличие многоядерных клеток; участкислизистойоболочки,гиперпластическогохарактеризовавшиесяполипа.Такжебыликакобластьобнаруженыростамелкие,многочисленные тубулярные аденомы, что согласовалось с даннымилитературы о действии АОМ как химического канцерогена, способноговызывать опухолевый рост в толстой кишке у крыс именно посредствомформирования полипов [50; 69; 124; 145; 149].Также для подтверждения выводов об активном опухолевом росте, намибыли проведены исследования изменений в селезенке.
Установлено, чтонаиболее характерным макроскопическим изменением являлось отсутствиеострыхугловворгане,наличиебугристостиоргана,сильноеегокровенаполнение (при поперечном разрезе сопоставление краѐв было невозможно), заметное изменение картины микроскопических препаратов. Присравнении контроля и экспериментальной группы были выявлены нарушенияв паренхиме селезенки. При патологоанатомическом осмотре селезенкиустановлено, в сравниваемых группах ее длина и ширина были увеличены до3,8±0,3 и 2,0±0,1 см, соответственно. Края были притуплены и при112поперечном надрезе не совпадали, что говорило о полнокровии органа. Приморфологическом исследовании строма органа была представлена хорошоразвитой тонкой соединительнотканной капсулой, от которой вглубь органаотходили радиально направленные плохо различимые тонкие трабекулы сартериями и венами.
Паренхима органа была образована полностьюсформированными белой и красной пульпой. Белая пульпа была представленалимфоидными фолликулами в количестве 5-7 в пределах гистологическогосреза, которые характеризовались средними и крупными размерами, округлойили овальной формой. Они были рассредоточены по всему объѐму органа, негруппируясь в отдельных участках. Герминативные центры фолликуловнебольшого размера, мантийная и периферическая маргинальная зонырасширены,периартериальнаязонаузкая.Внутрилимфатическихфолликулов, несколько эксцентрично, проходила центральная артерия,просвет которой был сужен, но полностью никогда не закрыт. Эндотелийцентральных артерий фолликулов имел правильное строение (плоский), безпризнаков повреждения.Краснаяпульпахорошовыраженаинаходиласьвсостояниидиффузного полнокровия – переполнена эритроцитами.
В красной пульпенаблюдается выраженное диффузное скопление лейкоцитов. Сосуды трабекулв состоянии умеренного кровенаполнения. Часто встречаются макрофаги, вцитоплазмекоторыхотчѐтливовиднызѐрнабуро-коричневогоцвета - гемоседерин.
Последнее наблюдение косвенно подтверждает наличиевыраженной гепатотоксичтности АОМ. Типичная морфологическая картинапредставлена на рисунке 21.113Рисунок 21 Типичная морфологическая картина селезенки. Гематоксилинэозин, увеличение х10На вскрытии установлены макроскопические изменения печени:изменение цвета в сторону оранжево-охрянистой гаммы, у 2 животных из 25малые доли. печени имели вид мускатного ореха.
Это послужило причинойболее детального микроскопического изучения структуры паренхимы. Быливыявлены следующие изменения: наличие очагов жировой дисторофии ицирротическихизмененийопубликованными(рисунокрезультатами22).Этиданныеисследованийосовпадалисвозможномгепатотоксическом действии препарата, однако требовало уточнений степенивыраженности токсического гепатита. Для этого был проведен болееподробный анализ изменений паренхимы: определяли состав тканей в органе.114Рисунок 22 Окраска гематоксилин-эозин, увеличение х40.
А - общий видобразцах печени крыс из группы контроля; Б - общий вид образца печенигруппы с введением АОМ 15 мг/кг веса, двукратно, внутрибрюшинно.Установлено, что в группе с введением АОМ существенно большепредставлены компоненты соединительной ткани, что говорит о выраженномгепатотоксическом действии АОМ на крыс линии Wistar разведенияпитомника «Пущино». Данные исследования представлены на рисунках 22 и23.Рисунок 23 Морфологическая картина печени крыс к концу эксперимента. А –группа контроля Б – группа с внутрибрюшинным двукратным введениемАОМ (интервалом 14 дней).
Окраска по Массону увеличение окуляром х20Таким образом, были получены данные о полиорганном действииканцерогена, а также утверждена схема использования АОМ в разовой115концентрации 15 мг/кг внутрибрюшинно, с кратностью применения дважды, спромежутком 14 дней. Учитывая полученные данные морфологическихисследований, анализируя результаты макроскопического исследования,обобщаясобственныерезультатысматериаламипубликаций,былоподтверждено предположение о необходимости использования животныхвесом не менее 250 граммов с крепкой конституцией. Также была определенадлительность всего эксперимента - 70 дней. Исходя из данной предпосылки, вдальнейшем,формированиегруппыссочетаннымвоздействием(язва+канцероген) логично было начинать с 25 крыс в группе.3.2.3.Патофизиологичесиеизменениявнутреннихоргановпримоделировании язвы в сочетании с введением канцерогена АОМПроведенная ранее работа позволила сформировать предпосылки дляисследования сочетанного действия АОМ и язвы.
Так как ранее былопоказано, что воспаление толстой кишки оказывает системное действие наорганизм животного, но для нас наиболее важным периодом являлись 3-12дни, в которые количество Ах было статистически значимо выше, чем вгруппе контроля. Этот факт послужил основанием для введения АОМ на 14ый день после моделирования язвы.Даннаяустановленнойгруппабылабольшейгепатотоксичностипоколичествуканцерогена,животныхиз-заобусловливающейлетальность.
В этой группе животных через 48 часов был нормальныйаппетит; пить начинали к 36 часу, а полный объем двигательной активностивосстанавливался к концу 7-ых суток, у них отмечали выраженный зуд и отеккожного шва. У этих же групп, наблюдали два пика потери веса – на 3 и/или 7дни, после чего вес стабилизировался.
Наблюдаемые изменения были связаныс этапами заживления тканей, и общим снижением жизненного тонуса.Изменение веса экспериментальных животных представлены в таблице 20.116Таблица 20Динамика изменение веса экспериментальных животных№группыГруппаКол-во живых животных к 70-ому Средний вес, грп/п12днюКонтроль8Язва+АОМ100 день70-ый259,5268,5±4,7±7,9311,8230,0±8,0±14,8На 70-ый день эксперимента проводили эвтаназию с последующейнекропсией органов и сбором тканей для изучения концентраций MMP-3,MMP-9 и EGF. Для этого использовали кровь, ткани толстой и слепой кишки.Морфологические исследования проводили на тканях кишечника, печени иселезенки.При осмотре трупов и сравнении их внешнего вида с интактными, кромеожидаемых изменений от формирования язвы и введения АОМ быливыявлены следующие особенности: увеличение объема слепой кишки ввидуобразования сужения в участке ободочной кишки в месте формирования язвы,увеличение лимфоидных фолликулов тонкой кишки и увеличение в объемеПейеровых бляшек на поверхности толстой кишки, формирование жировыхкист на поверхности почек, изменения со стороны поджелудочной железы ввиде кист.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
