Диссертация (1154482)
Текст из файла
1ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ГОРОДАМОСКВЫ « МОСКОВСКИЙ КЛИНИЧЕСКИЙ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЙ ЦЕНТРДЕПАРТАМЕНТА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ГОРОДА МОСКВЫ»ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ АВТОНОМНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕУЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ«РОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ»На правах рукописиСмирнова Анна Вячеславна«Патофизиологическое значение ацетилхолина в пролиферацииопухолевых клеток толстой кишки in vitro и in vivo»14.03.03 - патологическая физиологиядиссертация на соискание ученой степеникандидата биологических наукНаучный руководитель:доктор медицинских наукТрубицына И.Е.Москва2017г.2ОглавлениеСписок сокращенийОбщая характеристика работыАктуальность темыРазработанность темыЦели исследованияЗадачи исследованияНаучная новизнаТеоретическая и практическая значимость работыМетодология и методы исследованияВнедрение результатовОсновные положения, выносимые на защитуСтепень достоверности полученных результатовЛичное участие автора в проведенных исследованияхАпробация работыПубликации по теме исследованияОбъем и структура диссертацииГлава 1.
Обзор литературы1. Рак толстой кишки. Современные представления о патологии57788999101010111212121314141.1.Формирование первичной опухоли толстой кишки: путьхромосомной и микросателлитной нестабильности1.2.Воспаление как фактор развития опухолевого роста1.2.1. Модели для исследования рака толстой кишки1824271.2.2. Диффузная эндокринная система толстой кишки у человека илабораторных животных (крыс)1.3. АцетилхолинГлава 2. Материалы и методы2.1.Общий дизайн исследования2.2.Эксперименты in vitro333742424232.2.1. Краткое описание клеточной линии рака толстой кишки SW620442.2.2. Методы работы с культурой клеток442.3.
Эксперименты in vivo2.3.1. Экспериментальные модели in vivo55572.3.1.1.Моделирование язвы толстой кишки572.3.1.2.Моделирование опухолей толстой кишки592.3.1.3.Моделирование язвы толстой кишки в сочетании с введениемканцерогена602.3.2.Биохимические методы и гистологическая техника602.4. Статистическая обработка результатовГлава3 Собственные результаты и обсуждение62633.1.
Биологические эффекты от воздействия ацетилхолина наопухолевые клетки SW620633.1.1. Определение рабочих концентраций раствора ацетилхолина дляin vitro исследований633.1.2. Сопоставление полученных данных и определениепролиферативной активности вещества683.1.3. Микроскопический анализ влияния ацетилхолина на характерроста популяций SW6203.1.4. Исследование концентрации EGF, ММР-3 и ММР-971763.1.5. Влияние ацетилхолина на экспрессию молекул главногокомплекса гистосовместимости человека первого и второго классов823.1.6. Влияние ацетилхолина на фазы клеточного цикла клеточнойлинии SW620843.2. Влияния ацетилхолина на рост и развитие полипов толстойкишки у крыс963.2.1. Определение рабочих концентраций раствора ацетилхолинадля in vitro исследований9743.2.2.
Патофизиологические изменения внутренних органов на фонеприменения канцерогена АОМ1093.2.3 Патофизиологические изменения внутренних органов примоделировании язвы в сочетании с введением канцерогена АОМ1153.2.4. Сравнительная оценка концентраций EGF и матриксныхметаллопротеиназ 3 и 9 типов в крови и образцах тканей вэкспериментальных моделях1203.3. Анализ причин летальности и послеоперационных осложненийпри работе с животными124Выводы127Практические рекомендации128Перспективы дальнейшей разработки темы128Библиография1295Список сокращений1АОМ1,2-азоксиметан2АхАцетилхолин3БСАБычий сывороточный альбумин V фракция4БАВБиологически-активные вещества5ВОКВосходящая ободочная кишка6ДМСОДиметилсульфоксид7ДЭСДиффузно расположенная эндокринная система8ИФАИммунно-ферментаный метод9КФКультуральный флакон10 МКАМоноклональные антитела11 МТТСолитетразолия3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолий бромида12 МТТ-методМетод по Mosmann для определения жизнеспособностиклеток.
Метаболизм тетразолия 3-(4,5-диметилтиазол-2ил)-2,5-дифенилтетразолий бромида в формазан13 НСНервная система14 ОКОпухолевые клетки15 РТКРак толстой кишки16 СКСреда культивирования17 СОСлизистая оболочка18 СлКСлепая кишка19 ТЭСТелячья эмбриональная сыворотка20 ФСБФосфатно-солевой буфер21 ЦНСЦентральная нервная система22 APUDAmine Precursor Uptake and Decarboxylation, ДЭС23 CVSОт СristallViolet Staining24 EGFЭпидермальный фактор роста25 HLAГлавный комплекс гистосовмесимости человека626 ММР-3Матриксная металлопротеиназа (протеаза) 3-его типа27 ММР-9Матриксная металлопротеиназа (протеаза) 9-его типа7Общая характеристика работыАктуальность темыРак толстой кишки (РТК) 25 лет занимает первые места в структуреопухолевых заболеваний в экономически-развитых странах (Давыдов М.И.,2011).
К этиологическим и факторам риска относят наследственнуюпредрасположенность (Корчагина, 2009), возраст, хронический стресс идлительноевоспалениеоргановжелудочно-кишечноготракта(ЖКТ),нерациональное питание (Савицкий С.Э., 2009). Биологические особенностиразвития РТК не позволяют создать полноценную программу скринига(Моисеенко, Волков, 2014, Д.Г. Заридзе, 2009) и/или создать адекватнуюисследовательскую модель для экспериментальной онкологии (Corpet DE,2003).Биологически активные вещества нейроэндокринного происхожденияобладают способностью изменять физиологические процессы, происходящиев ЖКТ.
Ацетилхолин (Ах) активно участвует в данных процессах. Вопрос егововлеченности в процесс воспаления достаточно изучен (Трубицына И.Е.,2004); (Парфенов, 2002); (Трубицына И.Е., Винокурова, 2006); (Коротько,2009), однако остается много вопросов о его влиянии на начальный этапканцерогенеза при хроническом воспалении. Слизистая оболочка ЖКТвыполняет функции диффузной эндокринной железы, относящейся к APUDсистеме. Она имеет как прямую, так и обратную связь с центральной нервнойсистемой (Воробьев А.В., 2010), и известно, что клетки этой системы –апудоциты- обеспечивают метаболизм биогенных аминов, и ацетилхолина(Ах) в частности. Благодаря Ах и его действию на эту систему происходитрегуляция секреции пептидных гормонов, которые вовлечены в начальныйэтап роста опухолевых клонов и способствуют их селекции (Blankenstein,2005)(Arias, etal, 2009).
Исследования в данной области проводятся активно сконца 90х гг ХХ века, когда было показано одновременное нейрональное игуморальное влияние Ах: прямое (через систему рецепторов клеток слизистой8оболочки кишки), и ненейрональное – через систему биологически активныхвеществ, выделяемых апудоцитами (Pelisser-Rota, etal, 2013).В 2000гг. предположили, что Ах может продуцироваться и/илинакапливаться опухолевыми клетками, которые стимулируют свой ростблагодаря его наличию в окружающих тканях (Delbro, 2012; Novotny, et al.,2011).
Установлено, что процессы нарушения гомеостаза Ах в тканях иопухолевый рост в слизистой оболочке толстой кишки (СОТК) связаны, аклетки многих клеточных линий экспрессируют рецепторы к Ах (Belo A.,2011, Pelisser-Rota, etal2013).Отсутствие полноценной экспериментальной модели, воспроизводящейопухолевый рост в слизистой оболочке толстой кишки у лабораторныхживотных (Corpet D.E., 2003) является причиной активного исследованиягенетических причин опухолей. Однако распространенность такого видаопухолей не велика, и учитывая данный факт требуется изучение спонтанного,а также связанного с воспалением опухолевого роста. Таким образом,изучение роли Ах в процессах опухолевого роста как на изолированнойсистеме (in vitro), так и в организме (in vivo) является актуальнымнаправлением для экспериментальной онкологии и патофизиологии.Разработанность темыНесмотрянаактивноеизучениемолекулярныхмеханизмоввозникновения опухолей, в том числе и рака толстой кишки (РТК), остаетсянеразработанной область нейро-иммуно-эндокринной регуляции данногопроцесса.
Вопрос о нейрональной регуляции опухолевого роста в кишечникедо сих пор изучен недостаточно подробно, что ставит задачу изучить рольацетилхолина в опухолевом ростеЦели исследованияУстановить возможные патофизиологические механизмы влиянияацетилхолина на процесс пролиферации клеток эпителия слизистой оболочкитолстой кишки in vivo и in vitro.9Задачи исследования1. На модели in vitro выявить влияние различных доз ацетилхолина наопухолевую клеточную линию клеток SW620 (рак толстой кишки человека).2. Определить in vitro концентрации ацетилхолина, которые способствуютизменению количества митозов в популяции опухолевых клеток.3. Выявитьinvitroвлияниеацетилхолинанауровеньэкспрессииповерхностных молекул главного комплекса гистосовместимости I и IIклассов опухолевых клеток.4.
Создать экспериментальные модели для изучения начальных этапов ростаопухоли толстой кишки у крыс.5. Определить изменение концентрации ацетилхолина в слизистой оболочкетолстой кишки в динамике заживления язвенного дефекта.6. Определитьвлияниеацетилхолинанаизменениеконцентрацииэпидермального фактора роста, матриксных металлопротеиназ 3 и 9 типов вэкстрактах слизистой оболочки толстой кишки у крыс.Научная новизна1.
Впервые для исследования патофизиологического значения ацетилхолина вразных модельных системах применили метод параллельного изученияфакторов межклеточного взаимодействия: эпидермального фактора роста иматриксных металлопротеиназ 3 и 9 типов.2. Впервые разработана модель опухолевого роста в толстой кишке у крыспутем индукции воспаления в сочетании с введением 1,2-азоксиметана.3. Определены факторы, влияющие на рост полипов толстой кишки у крыс сразным способом индукции первичной трансформации.4. Впервые параллельно in vitro и in vivo определено влияние ацетилхолина наконцентрацию матриксных металлопротеиназ 3 и 9 типов и эпидермальногофактора роста.Теоретическая и практическая значимость работыПоказана тесная взаимосвязь между процессом пролиферации клетоктолстой кишки крыс, как в нормальной ткани, так и на фоне воспалительного10процесса.
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
