Автореферат (1151507), страница 5
Текст из файла (страница 5)
Валидация метода определения остаточных количествтетрациклина в молоке методом иммуноферментного анализа сиспользованиемнабора Ridascreen®-Тетрациклин производства RBiofharmДля исследования специфичности метода были проведеныэксперименты по исследованию холостых проб продуктов и проб с внесеннымзаведомо известным количеством тетрациклина (спайков). Матрицей привалидации метода определения тетрациклина служили образцы молока.Исследовали 21 пробу молока с внесенным заранее известнымколичеством тетрациклина (стандартный образец тетрациклина гидрохлоридаРСО 9344-139-00494189-2005, производства ВГНКИ).Оценка правильности метода проводилась путем исследования проб свнесением заведомо известного количества тетрациклина в чистые пробы, несодержащие тетрациклин (1,5 и 10 мкг/кг).
Оценивалась точность метода надвух концентрациях тетрациклина(1,5 и 10 мкг/кг), одновременно оцениваласьизвлекаемость тетрациклина с внесением его в различных концентрациях.Извлекаемость тетрациклина по всему диапазону измерений составила, всреднем 86% (75–115 %).Повторяемость - разница между результатами параллельных определений (при n=5, составила, в среднем, по диапазону концентраций 1,5-10 мкг/л порядка,1,3-7,6%.Воспроизводимость (межоперационная точность) результатов измеренийобразцов с добавкой заведомо известного количества тетрациклина тремяразными операторами в условиях одной лаборатории составляет порядка 95,5%.Относительное стандартное отклонения концентрации при п=3, с вероятностью0,95 составляет 4,5%.Диапазон измерений составляет 1,5–10 и более мкг/л, предел обнаружения 0,05 мкг/л, предел количественного определения 1,5 мкг/л.Калибровочная кривая была в диапазоне 0,15–1,35 мкг/кг.Межлабораторная воспроизводимость метода оценивалась в течение всегосрока работы набором Ridascreen®-Тетрациклин производства R-Biofharm путеммежлабораторных сравнительных испытаний с ФГУ ВНИИЗЖ, ГНУВНИИВСГЭ.
Расхождения между результатами исследования образца с одним итем же содержанием тетрациклина методом ИФА с использованием набораRidascreen®-Тетрациклин производства R-Biofharm не превышала 10,0%.182.12. Валидация метода определения остаточного содержанияантибиотиков тетрациклиновой группы в мясе птицы с помощьювысокоэффективнойжидкостнойхроматографиисмассспектрометрическим детекторомНастоящая валидация распространялась на метод идентификации иколичественного определения остаточного содержания антибиотиковтетрациклиновой группы в мясе птицы.
Измерение содержания тетрациклинови их эпи-форм выполняли методом высокоэффективной жидкостнойхроматографии с масс-детектором на хроматомасс-спектрометре «Agilent 1200– LC-MS/MS API 5000» с тандемным квадрупольным масс-анализатором поГОСТ Р 53601-2009. Детектирование анализов проводили в режимемониторинга множественных реакций. Количественное определениепроводилиметодомвнутреннегостандартапоплощадипикаидентифицированных соединений относительно калибровочной кривой,полученной при анализе в аналогичных условиях градуировочных растворов.В работе использовали стандартные образцы антибиотиковтетрациклиновой группы : демеклоциклина гидрохлорид, тетрациклинагидрохлорид, хлортетрациклина гидрохлорид, окситетрациклина гидрохлорид,доксициклин фирмы SIGMA.В качестве объекта валидации использовали образец мяса птицы.
Вданном образце содержание антибиотиков не обнаружено. Процедура расчетасодержания антибиотиков проводилив четырехповерхностях сиспользованием калибровочных графиков через внутренний стандарт(демеклоциклин).Калибровочные образцы – образец мяса птицы с внесением растворовстандартных образцов, расчетное содержание антибиотиков в пробе: 1мкг/кг,10мкг/кг, 100мкг/кг, 250 мкг/кг, 500 мкг/кг; испытуемые образцы мяса птицы(20) с добавлением стандартов с содержанием антибиотиков в пробах 5, 10, 15,20, 50 мкг/кг.В результате проведенной валидации установлено, что прииспользовании данного метода коэффициент корреляции линейной регрессиидля всех антибиотиков тетрациклиновой группысоставил больше 0,99,пределколичественного определения (по всем антибиотикамтетрациклиновой группы составил 1 мкг/кг, селективность т.е.
ответнаяреакция в реагентом холостом образце и контрольных образцах составила<30% предела количественного определения, средний коэффициентизвлечения составил95,9–111,2%, повторяемость и воспроизводимостьсоответствовали критериям для всех антибиотиков тетрациклиновой группы.Таким образом, точность методики подтверждена данными исследованиями.2.13. Разработка стоимости платных ветеринарных услуг,оказываемых организациями государственной ветеринарной службыОсновной задачей наших исследований, получившей отражение вдиссертации, является разработка методических рекомендаций поопределению стоимости платных ветеринарных услуг, лабораторно19диагностическихисследований и ветеринарно-санитарной экспертизывыполняемых городскими, районными станциями по борьбе с болезнямиживотных и ветеринарными лабораториями в условиях хозрасчета,самофинансирования и рыночных отношений.Разработка, применение цен на весь комплекс платных ветеринарныхуслуг и их калькуляцию проводилась с учетом внесенных изменений идополнений в «Правила оказания платных ветеринарных услуг».В соответствии с этим нами в соавторстве были разработаны:- «Перечень платных ветеринарных услуг, лабораторно-диагностическихуслуг по ветеринарно-санитарной экспертизе, оказываемых организациями иучреждениями ветеринарной службы»;- «Прейскурант и калькуляция цен на платные ветеринарные услуги,оказываемые районными станциями по борьбе с болезнями животных» » (утв.Управлением ветеринарииКурганской области, 07 марта 2013г.
иУправлением ветеринарии Московской области, 18 мая 2014 г.).Применение научно-обоснованных прейскурантов и калькуляции цен наветеринарные услуги в ветеринарных учреждениях Московской области иКурганской области позволили:- повысить реализацию областных и муниципальных программ попредупреждению и ликвидации болезней животных;- обеспечить ветеринарно- санитарный надзор дляполучениясельхозпродукции высокого качества;- повысить материальную заинтересованность ветеринарных служб пообеспечению благополучия и оздоровления хозяйств разных формсобственности от острозаразных инфекций.ЗАКЛЮЧЕНИЕ1.
Лабораторно-диагностическая сеть государственной ветеринарнойслужбы Московской области представлена 26 учреждениями, из которых 14аккредитованы по требованиям ГОСТ ИСО 17025, где ежегодно проводятсяболее 19353 лабораторных исследований при контроле безопасностипродуктов животного происхождения и кормов. Мониторинговыеисследования безопасности пищевых продуктов на территории Московскойобласти проводятся за счет средств федерального бюджета – с 2007 г., за счетсредств субъекта – с 2012 г.2. Разработан ежегодный перспективный план мониторинговыхисследований и периодичность контроля остатков запрещенных и вредныхвеществ в продуктах животного происхождения и кормах на территорииМосковской области.3. В период 2010-2013 гг. лабораторными исследованиями в мясеубойных животных выявлены опасные и запрещенные вещества (количествои процент положительных результатов см. п.
2.6 ):говядина - всего исследований – 10444, из них положительных – 127(1,22%);свинина - всего исследований – 9652, из них положительных – 188 (1,95%);баранина - всего исследований – 935, из них положительных – 45 (4,82%);20мясо птицы - всего исследований – 8340, из них положительных – 122(1,45%);молоко - всего исследований – 4209, из них положительных – 63 (1,5%);корма - исследований – 3297, из них положительных – 40 (1,22%).4. Сравнительными испытаниями образцов мяса животных и птицы имолока классическим методом и экспресс методами с помощьюавтоматических анализаторов Tempo и Vidas установлена высокаячувствительность экспресс методов, результаты которых коррелируют склассическим методом и позволяют провести анализ по выявлениюсальмонелл, листерий, стафилококков и БГКП за 24-48 часов (классическийметод 3-5 дней), автоматизировать проведение исследований, сохранятьрезультаты в электронном виде.5.
При исследовании мяса птицы наибольшей чувствительностью повыявлению БГКП и E.coli обладают методы с применением хромогенных сред(срок исследования 24 часа) и методы микробиологических исследований поГОСТ Р 50454-92 (96 часов). Этими методами выделено наибольшееколичество БГКП и E.coli (бактерии 5 родов и 7 видов семействаEnterobacteriaceae).6. Проведена валидация методов определения остаточных количествтетрациклина в молоке методом иммуноферментного анализа (ИФА) сиспользованием набора Ridascreen ( R-Biopharm ) и мясе птицы с помощьювысокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическимдетектором (ВЭЖХ/МС).Установлено:извлекаемость тетрациклина из молока – 81- 90%(ИФА), 95,9% (ВЭЖХ/МС) ;диапазон измерения – 1,5 -10 мкг/кг (ИФА) , 1 мкг/кг (ВЭЖХ/МС) ;воспроизводимость – 95,5% (ИФА) , 99 % (ВЭЖХ/МС) ;предел обнаружения – 0,05 мкг/кг (ИФА), 1 мкг/ кг (ВЭЖХ/МС).7.
Проведен анализ эпизоотической ситуации по сальмонеллезу и подборантимикробных препаратов для эффективного лечения больных животных сучетом выявленных антибиотикорезистентных штаммов сальмонелл натерритории Московской области.8. Разработана на основе оценки рисков методика отборарепрезентативного количества проб кормов для проведения мониторингаостатков запрещенных и вредных веществ в кормах и продуктах животногопроисхождения.9. С учетом рекомендаций ученых по нормированию труда ветеринарныхспециалистов , проведенных нами фотохронометрирующих наблюдений иопредение затрат на ветеринарные работы , разработана стоимость платныхветеринарных услуг, оказываемых организациями государственнойветеринарной службы Московской области :- перечень платных ветеринарных и лабораторно-диагностических услугпо ветеринарно-санитарной экспертизе ;- калькуляция цен и прейскурант на платные ветеринарные услуги .21ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯДля ветеринарной практики разработаны и внедрены:1.
План мониторинга запрещенных веществ, остаточных количествветеринарных препаратов и других химических соединений в живыхживотных, продукции животного происхождения и кормах на 2014 год ипоследующие годы на территории Московской области, периодичностьконтроля за остатками запрещенных и вредных веществ в организме живыхживотных, продуктах животного происхождения и кормах на территорииМосковской области с учетом угроз рисков ( утв. Начальником Главногоуправления ветеринарии Московской области, 2014 г.).2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
