Диссертация (1145911), страница 5
Текст из файла (страница 5)
Показано, чтоданнаяэпигенетическаямодификацияиграетважнуюрольвдифференцировкесперматогенных клеток (Tahiliani et al., 2009).Сперматозоид содержит несколько различных типов молекул РНК: иРНК, асРНК,sncРНК, а также piРНК. Из сперматозоидов были выделены иРНК таких генов, как HLA,интегринов, инсулина и многих других (Kumar et al., 2013). Наряду с метилированием ДНК и 18 модификациями гистонов, важная роль в эпигенетической регуляции генома раннихзародышей принадлежит микроРНК (miRNA). Молекулы микроРНК сперматозоида играютважную роль в оплодотворении и раннем эмбриональном развитии.
На модельных объектахпоказано, что microRNA-34c необходима для осуществления первого деления дробления(Liu et al., 2012). 1.3.Методы оценки состояния мужской фертильности Основным методом является анализ эякулята.При азооспермии, крипторхизме и ряде других отклонений, сопровождающихсяотсутствием сперматозоидов в эякуляте, проводят биопсию яичка. Гистологическоеисследование тканей яичка дает возможность изучать половые клетки на всех стадияхсперматогенеза, оценивать способность герминативного эпителия к регенерации, выявлятьстадию сперматогенеза, на которой происходит блокирование процесса, определять степеньпатологических и дегенеративных изменений, а также судить об эндокринной деятельностияичек (Тиктинский, Михайличенко, 1999).Для получения исчерпывающей информации о состоянии сперматогенеза в практикуисследований был также введен метод количественного кариологического анализа составанезрелых половых клеток эякулята (ККА НПК), разработанный проф.
Л.Ф. Курило ссоавторами (Курило, 1993). Метод основан на подсчете клеток, находящихся на разныхстадиях мейотического деления или на разных этапах дифференцировки. Показано, чтоколичественный и качественный состав эякулированных клеток адекватно отражает общуюкартину процесса сперматогенеза, а доля незрелых половых клеток в эякуляте соответствуеттаковым показателям в биоптате (Курило, 1995).Для оценки качества эякулята в настоящее время используются нормативы,предложенные Всемирной Организации Здравоохранения (WHO, 1999, 2010), разработанныена основе анализа результатов, полученных несколькими десятками самых крупныхмировых центров здоровья и репродукции человека.За последние 50 лет у мужчин репродуктивного возраста отмечается снижениеосновных показателей спермиологического анализа.
Так, концентрация сперматозоидов вэякуляте в среднем снизилась с 113 млн/мл до 66 млн/мл, средний объем эякулятауменьшился с 3,4 до 2,75 мл, снизилась доля морфологически нормальных формсперматозоидов (Быков, 2000; Чалый, 2009). В 2010 году ВОЗ внесла изменения в 19 референсные значения показателей параметров спермограммы. В последнем пятом издании«WHO laboratory manual Forth examination and processing of human semen» (2010) измененыпороговые значения показателей концентрации, подвижности, а также доли морфологическинормальных сперматозоидов.Спермограмма,илианализэякулята,включаетвсебямакроскопическую,микроскопическую, биохимическую и иммунологическую оценки.При макроскопическом исследовании определяется объем, вязкость, запах, цвет и рНэякулята. Общий объем эякулята указывает на секреторную активность желез: 90% объемасоставляет секрет вспомогательных органов, главным образом, простаты и семенныхпузырьков (Weiske, 1994).
При некоторых патологических состояниях может изменятьсяцвет (например при гемоспермии, или присутствии эритроцитов в эякуляте, цвет образцастановится красно-коричневым), а также pH эякулята. Например, значения ниже 7,2 могутуказывать на обструкцию семявыносящего тракта. В норме разжиженный образец эякулятадолжен быть гомогенным, сероватого цвета, слегка опалесцирующий, с характернымзапахом каштанов и pH 7,2-7,4.При микроскопическом исследовании эякулята оцениваются следующие основныепараметры:1.
количественные:•концентрация сперматозоидов (млн/мл)•общее количество сперматозоидов в эякулятеПо данным ВОЗ 1999 года нижняя граница концентрации сперматозоидов в эякулятесоставляет 20 млн/мл. Показатели менее 20 млн/мл диагностируются как олигозооспермия,при этом объем эякулята должен быть равен или превышать 2 мл (WHO, 1999).
По даннымВОЗ 2010 года концентрация сперматозоидов не должна быть менее 15 млн/мл, а объем - 1,5мл (WHO, 2010). При этом такой важный показатель как общее количество сперматозоидов вэякуляте, равное 39 млн, не изменился.2. качественные:•подвижность сперматозоидов•морфологию сперматозоидовВ руководстве ВОЗ 2010 года изменены категории подвижности сперматозоидов:вместо принятых в 1999 году групп A, B, С, D (WHO, 1999), различающихся не только похарактеру, но и скорости движения, предлагается выделять сперматозоиды с прогрессивнымдвижением (PR, progressive motility) (ранее группы A+B), с непрогрессивным движением(NP, non-progressive motility) (ранее группа C), и неподвижные (IM, immotility) (ранее группаD). По данным ВОЗ 1999 года в норме у мужчины должно быть не менее 50% 20 сперматозоидов с прогрессивным движением (А+В).
Показатели ниже допустимого уровняподвижности расцениваются как астенозооспермия. По данным ВОЗ 2010 года прогрессивноподвижных сперматозоидов должно быть не менее 32%.При анализе морфологии сперматозоида оценивают строение головки, состояниеакросомы, присутствие цитоплазматической капли, наличие дефектов шейки и хвоста. Внорме зрелые сперматозоиды человека имеют плоскую овальную головку с хорошо различимойакросомой, занимающей 40—70% ее площади.
В некоторых случаях головка может быть слегказаострена в постакросомном районе, ее длина должна достигать 3-5 мкм, толщина 2-3 мкм.Средний отдел жгутика гладкий, его длинная ось совпадает с длинной осью головкисперматозоида, толщина менее 1 мкм, длина примерно в 1,5 раза больше длины головки. Всреднем отделе жгутика может быть видна цитоплазматическая капля, размер которой недолжен превышать половины площади головки. Основной отдел жгутика однороден потолщине, немного тоньше средней его части. Жгутик не должен быть закрученным, его длинадолжна достигать примерно 45 мкм. Сперматозоиды с такой морфологией составляют большуючасть клеточного пула в верхних отделах шейки матки после коитуса, то есть именно такиесперматозиоды преодолевают ряд функциональных презиготических барьеров и способны коплодотворению (Kruger et al., 1986).
Интересно отметить, что, используя данные критерииоценки морфологии сперматозоидов, диапазон процентного содержания морфологическинормальных форм как у фертильных мужчин, так и у мужчин с бесплодием, будет варьировать от0% до 30%. При этом лишь незначительная часть образцов эякулята будет содержать более 25%морфологически нормальных сперматозоидов (Menkveld et al., 2001).Согласно новым нормам ВОЗ доля морфологически нормальных сперматозоидовснизилась с 14% по сравнению с нормами ВОЗ 1999 года до 4%. Показатели менее 4%диагностируются как тератозооспермия. Показано, что 3-5% морфологически нормальныхсперматозоидов в эякуляте является достаточным для оплодотворения ооцита in vivo (Van derMerwe et al., 2005).Описание прочих результатов исследования включает в себя анализ следующихпараметров спермограммы:•агрегация (слипание либо неподвижных сперматозоидов с друг другом, либоподвижных сперматозоидов с нитями слизи, несперматогенными клетками илидебрисом);•агглютинация (слипание подвижных сперматозоидов друг с другом)•количество лимфоцитов (млн/мл)В норме агрегация и агглютинация сперматозоидов не выявляются, а содержаниелимфоцитов должно быть менее 2 млн/мл.
21 Дополнительноможетпроводитьсябиохимическоеисследованиеэякулята,включающее в себя анализ содержания в сперме фруктозы, цинка, альфа-глюкозидазы, Lкарнитина и других биохимических маркеров, изменение которых будет указывать насекреторную активность половых желез.Иммунологическийанализэякулятазаключаетсяввыявлениисодержанияантиспермальных антител (АСАТ), которые может вырабатывать организм мужчины противсобственных сперматозоидов, при этом АСАТ могут вызывать бесплодие иммуннойприроды.
Связываясь с антигенами на головке сперматозоидов, они блокируют рецепторысвязывания сперматозоида и яйцеклетки, а при связывании с антигенами на хвостесперматозоида АСАТ могут затруднять его движение. Существуют иммуноцитохимическиеметоды определения АСАТ. Наиболее распространенным на сегодняшний день являетсяметод MAR (Mixed Antiglobulin Reaction). В норме количество сперматозоидов, несущихантиспермальные антитела, не должно превышать 10% отобщего числа подвижныхсперматозоидов.Помимо вышеперечисленных существуют и другие тесты, позволяющие оценить туили иную характеристику эякулята в целом и сперматозоида в частности.
Например, анализсвободных радикалов в эякуляте, оценка акросомной реакции, или оценка взаимодействиясперматозоида с ооцитом человека. Однако они не являются рутинными и скорееиспользуются для исследовательских целей.Следует отметить, что даже у фертильных мужчин параметры спермограммы могутзначительно варьировать в зависимости от различных внешних причин.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
