Отзыв ведущей организации (1145835)
Текст из файла
«УТВЕРЖДАЛО» Директор ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины» доктор биологических наук, профессор РАН А.В. Дчнт~йав:; " ':.~Ч1~'=,— -=.. --...,. «~ ~~,"~а~ф..„.': „"" ':~':- 'ж,. 20! 8 г. ОТЗЫВ ведущего учреждения на диссертацию Тихонова Андрея Владимировича "ХРОМОСОМНАЯ, КЛЕТОЧНАЯ И ТКАНЕВАЯ СПЕЦИЕИЧНОСТЬ ГИДРОКСИМЕТИЛИРОВАНИЯ ДНК В ПРОЭМВРИОНАЛЬНЫЙ И ЭМБРИОНАЛЬНЫЙ ПЕРИОДЫ 1 АЗВИТИЯ ЧЕЛОВЕКА", представленную на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.02.07 — генетика. Актуальность темы Работа Тихонова Андрея Владимировича посвящена крайне актуальной теме, а именно изучению эпигенетнческих механизмов регуляции активности генов в проэмбриональном и эмбриональном периоде развития человека.
Особое внимание уделено наименее изученному вопросу относительно гидроксиметилирования ДНК в сравнении с метилированием ДНК на хромосомном, клеточном и тканевом уровнях. Кроме того, к настоящему времени все более общепринятым становится взгляд, согласно которому отклонения от нормы в эпигенетическом и эпигеномном маркировании, в первую очередь, метилировании ДНК, в ходе самого раннего развития связаны с появлением 1 "взрослых" заболеваний. Недавно появились данные, что указанные процессы дифференцировки связаны с динамическим изменениями не только метилирования, но и гидроксиметилирования ДНК. Образование гидроксиметилцитозина, как установлено, связано с процессом активного деметилирования ДНК.
В этой связи крайне актуальным является вопрос о том, каким образом в структуре хромосом и модификациях хроматина отражается дифференциальная активность генов и целых их кластеров, чему в значительной степени и посвящена работа Л.В,Гихонова. Остается неясным, каким образом на уровне метафазных хромосом осуществляется эпигенетический "ЬоойпагЫщ" транскрипционно активных районов хромосом, как он меняется в ходе первичной дифференцировки в дои мплантационном развитии„имеются ли какие-либо специфичные хромосомные участки, различающиеся по уровню метилирования в ходе дифференцировки, или, картина распределения метилцитозина и гидроксиметилцитозина вдоль хромосом не меняется.
Основные сведения по этой проблематике получены на модельных организмах, а для человека таких данных крайне мало, Данные о динамике активного деметилирования в раннем эмбриогенезе человека на сегодняшний день отсутствуют. Информация об этом процессе имеет как фундаментальную, так и практическую ценность, в связи с тем, что нарушения процессов эпигенетической реорганизации генома половых клеток и доимплантационных зародышей могут препятствовать нормальному эмбриогенезу и приводить к остановке развития. Поэтому представляется логичной и актуальной основная цель автора «изучение специфичности распределения 5гпС и 5Ь1пС в ДНК в проэмбриональном и доимплантационном периодах развития человека», и соответствуюшие задачи по локализации участков метил- и гидроксиметилцитозина в хромосомах.
Научная новизна исследования, полученных результатов и выводов Впервые проведен анализ гидроксиметилирования ДНК метафазных хромосом половых клеток, зигот, бластомеров дробящихся зародышей и и экстраэмбриональных тканей э~бр~ональны~ постимплантационных зародышей человека. Установлено, что на стадии зиГОты имеет место асимметричность актиннОГО деметилирования отцовского и материнского геномов, то есть, метафазные хромосомы отцовского происхождения подвергаются активному деметилированию с образованием 5ЬтС сильнее„чем метафазные хромосомы материнского происхождения.
Гидроксиметилированная ДНК неравномерно распределена в метафазных хромосомах зигот. При делениях дробления вплоть до стадии бластоцисты происходит пассивная потеря 51зтпС с образованием ГемиГидроксиметилированных хромосом и сохранением привлечено большое количество данных литературы. Сформулированные в 3 сегментоспецифичного распределения 5ЬпС в гидроксиметилированных хроматидах. Получены уникальные данные о межхромосомных, межклеточных и межтканевых различиях гидроксиметилирования ДНК метафазных хромосом эмбрионов человека 5-12 недель развития, обусловленные случайным сочетанием гидроксиметилированных, гемигидроксиметилированных и негидроксиметилированных сестринских хроматид и гомологичных хромосом.
Впервые установлена связь между параметрами спермограммы и характером гидроксиметилирования сперматозоидов в эякулятс: увеличение доли гидроксиметилированных сперматозоидов ассоциировано со снижением качества эякулята и нарушениями фертильности. Обоснованность н достоверность научных положений, выводов и рекомендаций, сформулированных в диссертации Значительный объем подтверждает достоверность полученных результатов.
В данной диссертационной работе осуществлен подробный статистический анализ данных, что определяет высокую степень достоверности полученных результатов. Для интерпретации результатов работе выводы являются итогом анализа и обобщения результатов исследования. Полученные в ходе работы результаты опубликованы в виде 7 научных статей в рецензируемых отечественных и зарубежных журналах и 11 тезисных сообщений.
Материалы работы были представлены на трех международных и одной российской конференциях, Выводы, сформулированные в диссертации, основаны на достаточном объеме наблкэдений и аргументировано доказываются соответствующими исследованиями. Практические рекомендации обоснованы фактическим материалом, их достоверность не вызывает сомнений и отражает суть проведенного научного исследования и полученных достижений. Тема представленной диссертационной работы Тихонова Андрея Владимировича полностью отвечает требованиям по специальности 03.02.07 — генетика.
Общая характеристика диссертационной работы Диссертация изложена на 129 страницах и включает следующие разделы: «Введение», «Обзор литературы», «Материал и методы», «Результаты», «Обсуждение», «Заключение», с<Выводы» и «Список литературы». Работа иллюстрирована 25 рисунками и 4 таблицами. Список литературы содержит 291 источник. В соответствии с темой диссертации построен литературный обзор, в котором автор анализирует современное состояние исследований в области метилирования ДНК, 5-гидроксиметилирования, возникающего в ходе активного деметилирования. Проанализированы основные молекулярные механизмы как метилирования, так и деметилирования в ходе гаметогенеза и эмбриогенеза.
Описана роль гидроксиметилцитозина в регуляции активности генов. Очень ценным является, что автор уделяет внимание роли внешних факторов 1токсикантов) в репрограммировании генома на основе эпигенетических механизмов. В соответствии с темой работы в обзоре рассматриваются основные механизмы сперматогенеза, оогенеза, до — и постимплантационного развития человека. Таким образом, обзор литературы 4 приводит автора к обоснованному заключению о недостаточности данных об эпигенетических особенностях генома гамет и эмбриона человека и необходимости дальнейших исследований механизмов репрограммирования генома человека в гаметогенезе и эмбриогенезе как для понимания фундаментальных проблем биологии развития, так и для решения актуальных задач медицинской генетики, в том числе и с широким использованием современных вспомогательных репродуктивных технологий.
В целом обзор прекрасно написан и, конечно, может быть использован при преподавании соответствующих курсов, Единственное замечание относиться к рисунку 1, в котором непонятно, какая из 0ХМТ имеется в виду, В главе "Материал и методы" автор подробно описывает как материал исследования, так и использованные методы.
Описаны методы приготовления препаратов метафазных хромосом и интерфазных ядер из неоплодотворившихся яйцеклеток, зигот и бластомеров доимплантационных зародышей человека, Приготовления цитогенетических препаратов из фрагментов тестикулярной ткани„ворсин хориона и фрагментов эмбриональных органов, приготовления гистологических препаратов из биоптата тканей семенника„ приготовления препаратов из образцов эякулята. Все эти методы описаны подробно, что дает возможность оценки в дальнейшем адекватности использованных методов окрашивания. Использовано "классическое" ОГН-окрашивание цитогенетических препаратов яйцеклеток, зигот, бластомеров доиплантационных зародышей и сперматогенных клеток человека, иммунофлуоресцентное окрашивание цитогенетических и гистологических препаратов с помощью антител к 5ЬпзС и 5пзС, флуоресцентная гибридизация ш з1ш (Г1КН).
Автор также использовал измерение интенсивности флуоресцентного сигнала после иммунофлуоресцентной детекции 5ЬтС и 5тС на препаратах. То есть, как методы приготовления препаратов, так и визуализации сигналов являются современными и адекватными поставленным задачам. Основные полученные результаты представлены в виде 15 микрофотографий и ряда графиков, показывающих результаты количественных исследований. К сожалению, в силу практической недоступности половых клеток, зигот и доимплантационных зародышей человека, работа была в основном проведена на анормальном материале, что, видимо, и обусловило недостаточно высокое качество ряда микрофотографий.
Возможно, что недостаточное качество хромосом связано с тем, что автор не использовал при приготовлении хромосомных препаратов цитостатики, как, например, колцемид. Понятно, что при наблюдении в микроскоп, картина является более четкой. Кроме того, видимо, имело смысл сделать микрофотографии как общих планов метафазных пластинок, так и представить отдельные фрагменты с большим увеличением, чтобы более доказательно утверждать ряд заключений автора, Тем более, что в ряде случаев это было сделано. Тем не менее, обнаруженные автором основные закономерности репрограммирования с участием 5шС и 5ЬгпС у человека сходны с таковыми у грызунов, что также указывает на достоверность полученных результатов„как и проведенная статистическая обработка.
Ряд особенно интересных результатов был отмечен вьш~е. Очень хорошо написана глава «Обсуждение». Диссертационная работа написана литературным языком, достаточно легко читается. Представленный материал в таблицах и рисунках удобен для восприятия и анализа. Выводы логично вытекают из содержания диссертации, обоснованы и полностью соответствуют поставленным целям и задачам исследования. Практические рекомендации сформулированы четко и понятно, что позволяет использовать их в практической работе.
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
