Автореферат (1141386), страница 3
Текст из файла (страница 3)
На эндокарпе также имеются трихомы, состоящихиз одной или нескольких длинных заостренных клеток, выходящих из одногооснования. В отличие от трихом экзокарпия они расположены спорадически(рисунок 5).13а (СЭМ)б (ОМ)с (СЭМ)д (ОМ)Рисунок 5. Поперечный срез эндокарпия стиракса лекарственногоТакже были установлены некоторые показатели для раздела «Испытания»проекта НД на сырье. Результаты представлены в таблице 2. Работа надустановлением норм остальных показателей таких как (тяжелые металлы,радионуклиды, остаточные количества пестицидов) продолжается.Таблица 2. Некоторые характеристики высушенных околоплодников стираксалекарственногоПоказательВлажность, %Зола общая, %Зола, нерастворимая в10% растворе HCl, %Нормане более 4,5не более 1,0ПоказательКоэффициент водопоглощенияКоэфф. поглощения метанолаЗначение, мл/г2,30,77не более 0,1Коэфф. поглощения спирта 96%0,73частиц размером более 2 мм, не более 15%; частиц размером менее0,25 мм, не более 20%Дисперсный состав2.3.
Разработка технологии сухого экстракта околоплодников стираксалекарственногоВыделение суммы сапонинов из околоплодников стиракса лекарственногопроводилосьметодомциркуляционнойэкстракцииваппаратеСокслетаметанолом и спиртом этиловым различной концентрации, при соотношениисырья и экстрагента 1:5, при температуре 55-60°С. После упаривания в вакууме(230 мбар) при 66°С первичное извлечение последовательно обрабатывалисначала этилацетатом (1:10 вес/объем), потом н-бутанолом (1:30 вес/объем). Приподкислении очищенного извлечения раствором кислоты хлористоводородной доpH=1,0 выпадал осадок, который отфильтровывали на воронке с бумажнымфильтром и сушили на воздухе при комнатной температуре, затем в вакуумсушильном шкафу,до полного удалениярастворителя и соляной кислоты.Полученный сухой экстракт, содержащий сумму сапонинов, - аморфные частицыот светло-кремового до кремового цвета с серым оттенком, со специфическимзапахом.
Результаты подбора условий экстрагирования представлены в таб. 3.14Таблица 3. Технологические параметры выделения СЭСЛТехнологическиепараметрыметанолВыход СЭСЛ, %39,45ЭкстрагентФракция сырья, ммспирт96%спирт90%спирт70%31,7532,6335,23сквозь на сите на сите на ситесито 0,25 0,250,518,3636,99 35,06 32,38Время экстракции, ч.68910Технологическиепараметры45выход %30,731,8134,0734,29 34,66 34,64111334,5534,43Максимальный выход сухого экстракта из сырья достигал 39,45% приэкстрагировании метанолом и 35,23% - спиртом 70%. Наиболее технологичнойфракцией измельченного сырья признаны частицы 0,25-0,5 мм.
Экономическицелесообразным можно считать 8-10 циклов экстракции в течение 6-7 часов.Этапы выделения и очистки суммы сапонинов из околоплодников стираксалекарственного представлены на рисунке 6.Высушенные околоплодники стираксалекарственногоМетанол*/ спиртэтиловый **Экстракция циркуляционная в аппаратеСокслетаОтходыСпиртовая вытяжкаОтгон метанола*/спирта**Упаривание на роторном испарителеЭтилацетатГустой экстрактФильтрацияРекуперацияЭтилацетатный слойОтгонэтилацетатаУпаривание на ротационном испарителен-бутанол 10%Очищенный экстрактВода очищеннаяОтходыОтходыОсаждение сапонинов в фильтрате приподкислении раствором конц.
HCl до pH= 1,0Отделение осадка сапониновфильтрациейОтходыОтгонка воды, сушкаВодаВыход экстрактивных веществ 32%** до 39%*Суммарное содержание сапонинов не менее 27%Рисунок 6. Технологическая схема выделения сапонинов из высушенныхоколоплодников стиракса лекарственного15Присутствие сапонинов в полученном по разработанной методике СЭСЛподтверждено с помощью качественных реакций (пенообразование, реакцииСанье и Сальковского, гемолиз эритроцитов), давших положительные результаты.Проведено сравнение УФ, ВЭЖХ-УФ и Масс-спектров СЭСЛ и сапонинов,выделенных при помощи препаративной ТСХ из стандартного образца PurifiedQuillaia Saponin (СО PQS) (рис.
7). На ТСХ наблюдаются зоны адсорбции (при245 нм / детектор-раствор взвеси дефибринированной крови) белого цвета с Rfоколо 0,68 - СЭСЛ и Rf около 0,55 – СО PQS.Результаты УФ-спектрофотометрии СЭСЛ (А) и СО PQS (Б) насоответствующем участке хроматографической пластины приведены на рис. 8.Рисунок7.ТСХ-хроматограммарастворовсапонинов из;а – СЭСЛ, б – СО PQS в системе хлороформметанол-вода (6:3:1).Спектр поглощения растворов выделенныхсапониноввобласти230-365нмимеетмаксимумы поглощения при 270±1 нм и 315±1 нм.Рисунок 8. УФ-кривые спектрального сканирования растворов сапониновстиракса лекарственного (А- из СЭСЛа; Б- из ССС).Были получены ВЭЖХ профили для СЭСЛ (А) и ССС (Б).
На ВЭЖХ СЭСЛидентифицированы 4 пика (Рисунок 9).16Рисунок 9. ВЭЖХ-УФ (260нм) профили растворовсапониновстираксалекарственного (А – СЭСЛ,Б – ССС).АБС помощью УЭЖХ–ВРМС в сумме сапонинов идентифицирована частьпиков с помощью данных справочной литературы по временам удерживания от3,7 до 6,18 мин и молекулярным массам, которые соответствуют сапонинамстиракса лекарственного. УЭЖХ-МС профиль пиков представлен на рис. 10.Рисунок 10. УЭЖХ-МС профиль отрицательных m/z в диапазоне 1100-1300,характерных для сапонинов Styrax officinalis L.Для количественного определения сапонинов в СЭСЛ разработана ивалидирована методика ЯМР-1Н спектрометрии. Спектр ЯМР1Н сухогоэкстракта стиракса представлен на рис.
11.Для количественного определения измеряют интегральную интенсивностьсигналов сапонинов стиракса. Процентное содержание каждого сапонина виспытуемом образце в пересчете на сухое вещество (X, % масс) вычисляют поформуле: X, % масс= 100 ∙ (S' /S'0) ∙ (M ∙ a0 /M0 ∙ a) ∙ [100/(100 – W)],S' –нормированноеопределяемоговещества;значениеS'0 –интегральнойнормированноегдеинтенсивностизначениесигналаинтегральнойинтенсивности сигнала стандарта; M – молекулярная масса определяемого17вещества; M0 – молекулярная масса; a – навеска испытуемого образца; a0 –навеска вещества-стандарта; W – влажность, %.Рисунок 11.
Спектр ЯМР 1Н сухого экстракта стиракса лекарственногоСодержание сапонинов А, В, С в полученных образцах СЭСЛ поразработанной методике количественного определения составило не менее28,3±0,66 %.2.4. Исследование биологической активности СЭСЛ в опытах in vitroСпермицидная активность СЭСЛ in vitro на образцах спермы нормальногоэякулята человека зафиксирована цитологически.
При добавлении 0,5% раствораСЭСЛ в 0,9% натрия хлорида, подвижных и живых спермиев через 30 секунд ненаблюдается.Установлена антимикробная активность в отношении грамположительныхбактерий S.aureus 209-P, грамотрицательных бактерий E.coli АТСС 25922,Pr.vulgaris ATCC 6896 и Ps.aeruginosa АТСС 9027, также дрожжеподобныхгрибов C.albicans АТСС 10231 ‒ в концентрации 2000-4000 мкг/мл, и сильнаяантимикотическаяактивностьвотношенииMicrosporumcanis252‒вконцентрации 31,2 мкг/мл.Доказанная спермицидная, антимикробная и антимикотическая активностьСЭСЛ свидетельствует о целесообразности его использовании его в составевагинальных форм контрацептивного действия. Также была рассчитана дозаСЭСЛ - 0,025 г на одно применение.182.5. Разработка состава, технологии и методик стандартизацииспермицидной плёнки на основе СЭСЛДля обоснования состава спермицидных пленок были приготовленыобразцы пленочной основы и пленок с СЭСЛ, включающих наиболее подходящиекомпоненты для вагинального применения, составы представлены в таблице 4.Таблица 4.
Модельные составы пленочной основы и пленокКоличество, %5670,40,20,35Номер образцаКомпонентыMЦ10,52-30,254-ПВС1,51,51,50,752,01,5Карбопол 9800,10,10,10,30,05Глицерин--88ПЭГ 40012124ПГ84ПЭГ: ПГ:глицерин (2:1:1)4Сухой экстракт стиракса-80,39-10-1,252,084,50,1-0,05-0,1-813,5-16,57,486,7-8,16,6---43,47,4-3,3--4--6,7--1,0-----1,11,11,11,11,11,1Нейтрализующий агентдо pH 6-8Вода очищеннаядо 100,0Наоснованииоценкиплёнокорганолептическиипотакимтехнологическим показателям как: однородность, отсутствие микротрещин,разрывов, механических включений и пузырьков воздуха; хорошее отставание отподложки, избыточная липкость, эластичность, характер поверхности; времядезинтеграции, время растворения - выбран состав 10.Методика получения вагинальной пленки ВСПЭСПленки получали в асептических условиях.
Готовили пленочную основу ираствор СЭСЛ. Смешивали, после деаэрации пленочную массу разливали наполимерную подложку, сушили при комнатной температуре, снимали сподложки, дозировали. Технологическая схема представлена на рисунке 12.Описание: прозрачные пленки светло- желтого цвета, без воздушныхвключений, с гладкой не липкой поверхностью, легко складываются, без запаха ивкуса, на изломе – однородные. Размер пленок 5×5 см, масса 0,22±0,02 г.,толщина 206,03±5,1 мкм, содержание влаги не более 16,0%, рН раствора пленки в1920 мл воды очищенной рН = 4,5±0,02, визуально фиксируется потеря формыпленки за 20,5±4,04 секунд и время растворения пленки за 64,67±5,68 секунд.ВР.2.1.Санитарная подготовка помещений и воздухаВР.
2.2.ВР. 2.3.ВР.2.4.Подготовка дезинфицирующих растворовПодготовка персонала и одежды к работеПодготовка оборудованияПрием и распределение сырьяВзвешивание компонентовВР.3.1.ВР.3.2.ВР.1.Получение воды очищеннойВР.2.Кх, КмСанитарная подготовкапроизводстваОтходыВР.3.Кт, КмПодготовка сырья(сухой экстракт Styraxoff.L.)Материальные механические потериТП.4.1.Приготовление растворов полимеровТП.4.2.Растворение БАВ в (вода+ трометамол)ТП.4.Кт, Кх, КмСмешивание растворов полимеров сраствором БАВДеаэрацияТП.4.3.ТП.4.4.Розлив на подложкиСушкаДозировкаТП.5.1.ТП.5.2.ТП.5.3.Получение лекарственнойкомпозицииМатериальные механические потериОтходыТП. 5.Кт, Кх, КмПолучение пленокПотериУМО.6.1 Кх, КмФасовка пленок в буфленУМО.6.2.Упаковка в коробкиУМО.6.3.МаркировкаУМО.6. Кт, КхФасовка и упаковкаПотериНа склад готовой продукцииРисунок 12.Технологическая схема производства вагинальных пленок ссапонинами стираксаДля качественного и количественного определения сапонинов стиракса впленках была разработана и валидирована методика ЯМР 1Н.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
